实验9细胞凝集反应及细胞吞噬.ppt

实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,一、实验目的,1掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝聚的原理。2观察凝集的现象。3了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理。4熟悉细胞吞噬作用的基本过程。,2020/4/30,1,二、实验原理,动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖链伸向膜表面，它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制现象的必要组分。凝集素是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。,2020/4/30,2,二、实验原理,吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是高等动物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能。当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，会向异物处聚集，将其内吞入细胞质，形成吞噬泡，然后吞噬泡与溶酶体融合，将异物消化分解。通过观察细胞对鸡红细胞的吞噬，计算吞噬百分数和吞噬指数，可以分析判断动物个体的免疫水平。,2020/4/30,3,三、实验用品,1器材：显微镜、解剖器械、小烧杯、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸2材料：凝集-土豆块茎、鸡红细胞吞噬-小白鼠、鸡红细胞3试剂：鸡红细胞悬液，凝集素粗提液，PBS缓冲液，Alsever血液保存液，2%的可溶性淀粉溶液，0.85%生理盐水，瑞氏染液(美蓝-伊红Y),2020/4/30,4,四、实验步骤,2%鸡红细胞悬液制备（已完成）凝集素粗提液制备：将去皮的土豆块茎2g在10mLPBS缓冲液中浸泡2hr后，PBS液中含有可溶性土豆凝集素。细胞凝集反应现象的观察：用滴管吸取土豆凝集素粗提液和2%鸡红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置20min后于低倍显微镜下观察。,1、细胞凝集,2020/4/30,5,四、实验步骤,实验前3天，每天向小鼠腹腔注射2%的可溶性淀粉1mL。实验前1小时，向腹腔内注射1%鸡红细胞1mL，轻揉腹部，使鸡红细胞分散（已完成）,2、细胞吞噬,2020/4/30,6,四、实验步骤,颈椎脱臼法处死小鼠，暴露小鼠腹腔，将内脏推向一侧，用滴管吸取腹腔液。滴1滴腹腔液在干净的载玻片上，静置5-10分钟，使腹水细胞贴壁。待其稍干后，进行瑞氏染色。加上盖玻片，显微镜下观察。,2、细胞吞噬,2020/4/30,7,五、实验结果,PBS+2%血细胞液,凝集素+2%血细胞液,对照组,实验组,1、细胞凝集,2020/4/30,8,五、实验结果,1、细胞凝集,2020/4/30,9,五、实验结果,未染色的：鸡红细胞是淡黄色、椭圆形有核的细胞；较大的圆形或不规则的细胞，表面具有许多似刺毛状的小突起的是巨噬细胞。,2、细胞吞噬,2020/4/30,10,五、实验结果,鸡红细胞被消化程度（染色后）未消化：鸡红细胞核清晰，着色正常，胞质浅红色，细胞核蓝或紫红色轻度消化：鸡红细胞胞质深黄绿色，核固缩，紫红色重度消化：鸡红细胞核模糊，核肿胀，染色淡，胞质浅染，核呈浅灰黄色完全消化：鸡红细胞核溶解，染色极淡，巨噬细胞内只见形状类似鸡红细胞大小的空泡，边缘整齐，核隐约可见。,2、细胞吞噬,2020/4/30,11,五、实验结果,2、细胞吞噬,2020/4/30,12,六、讨论与思考题,绘图表示镜检时你所能看到的各种细胞类型及其形态。细胞凝集实验中，为什么对照组使用PBS溶液作对照？描述小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，并分析吞噬作用的生理意义。,2020/4/30,13,