本科生创新实验项目申请书

-附件： 工程编号： 广州中医药大学本科生创新实验工程 申 请 书工程名称葛花治疗酒精性脂肪肝大鼠的实验研究工程负责人学生吴向维所在学院班级中药学院2007级中药学专业指导教师李政木、龙泳伶单 位中药学院电 话申请日期2009-3-25广州中医药大学教务处二OO七年九月说 明1. 学生参与学生创新实验工程，均须填写广州中医药大学本科生创新实验工程申请书。2. 填写表格前必须认真阅读广州中医药大学本科生创新实验工程实施与管理暂行方法，并根据教务处发布的工程招标公告和工程指南的要求认真填写。3. 指导教师必须保证确有时间和精力在查阅资料、设计课题、实验操作、分析结果与撰写论文等环节对学生给予全程指导，并签署意见。4. 有关实验室要按照实验室开放的原则为学生提供完成创新实验工程的必要条件，并由实验室负责人签署意见。如果个别工程是以教研室或我校其他实践教学基地为主实施完成的，需要相应部门签署意见，保证提供必要的条件支持。5. 工程申请人须为入学以来平均学分积点在3.0以上的在读二年级及以上本科生，由学生所在学院负责审核。研究工程工程名称葛花治疗酒精性脂肪肝大鼠的实验研究学科名称中药学院申请金额2000 元起止时间2009年3月至2010年3月工程负责人吴向维学院中药学院平均学分积点3.5性别男年级2007级指导教师李政木职称教授性别男单位中药学院Email工程小组成员性别学院年级班别平均学分积点林顺粦男第一临床医学院2004级中医学七年制3.5钟成培男中药学院2007级中药学营销与物流3.4戚伯成男中药学院2007信息管理学院3.2吴文瀚男中药学院2007级中药学营销与物流3.0胡奕荣男中药学院2007级制药工程3.5研究内容和意义简介(400500字) 随着我国社会经济的快速开展和人民生活水平的提高，酗酒、暴饮者明显增多，与之相关的酒精性脂肪肝(AFLD)患者也逐年增多。据悉，约75%95%慢性嗜酒者有不同程度的肝脂肪浸润。AFLD属酒精性肝病(ALD)的早期表现，病症不明显，很多患者在初次诊断为AFLD时，往往存在不重视或不相信心理，缺乏对AFLD危害的了解，延误早期治疗的时机，导致本来可缓解甚至治愈的疾病不能得到有效控制，进而开展至酒精性肝炎、肝纤维化、肝硬化、甚至肝癌，严重影响了患者的生活质量和寿命，故寻找平安有效的治疗脂肪肝的中药研究越来越引起人们的重视。因此，现用葛花对酒精性脂肪肝的大鼠模型进展实验研究，找出对酒精性脂肪肝更有效的防治方法。立论依据1.选题依据：1.1 提出问题及其意义：随着我国社会经济的快速开展和人民生活水平的提高，酗酒、暴饮者明显增多，与之相关的酒精性脂肪肝(AFLD)患者也逐年增多。据悉，约75%95%慢性嗜酒者有不同程度的肝脂肪浸润1。AFLD属酒精性肝病(ALD)的早期表现，病症不明显，很多患者在初次诊断为AFLD时，往往存在不重视或不相信心理，缺乏对AFLD危害的了解，延误早期治疗的时机，导致本来可缓解甚至治愈的疾病不能得到有效控制，进而开展至酒精性肝炎、肝纤维化、肝硬化、甚至肝癌，严重影响了患者的生活质量和寿命2，故寻找平安有效的治疗脂肪肝的中药研究越来越引起人们的重视。因此，现用葛花对酒精性脂肪肝的大鼠模型进展实验研究，找出对酒精性脂肪肝更有效的防治方法。1.2国内外的研究现状述评文献资料来源笔者通过CKNI-KNS4.0全文期刊数据库和维普数据库,使用篇名/关键词/摘要模糊匹配的方法,对1995年以来关于对酒精性脂肪肝大鼠的预防及治疗的文献进展了检索，通过对这些文献的初步整理和分析,可以看出在文献中均以选取AFLD的特异性指标的形式来得出结论的定量研究。文献的思路是：所有的研究者都主要通过实验分组，设立病理模型进展比照分析的实验方法来初步得出药物对酒精性脂肪肝的防治作用。在文献中,研究者的研究对象为通过建模所人为形成的酒精肝大鼠模型;以对照实验的方法，实验大多数采用血清谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活性以及总蛋白(TP)及白蛋白(ALB)的含量作为检测指标，对数据处理应用SPSS120统计软件。关于酒精性脂肪肝的研究成果.1 酒精性脂肪肝的研究乙醇水溶性极强，极易为消化道吸收，饮酒后5分钟便可从血液中检出，3060分钟血中浓度达顶峰。吸收后的乙醇98通过生物氧化被去除，少量可由呼吸道及尿液排出。主要在肝脏代谢，在生理条件下经乙醇脱氢酶(ADH)代谢为乙醛，进而转化为乙酸，进入体循环。此外，肝脏中还存在微粒体乙醇氧化酶系(MEOS)等代谢系统，MEOS的米氏常数(Km=86mmol/L) 比ADH(2mmol/L)大数倍，主要在摄取高剂量乙醇时发挥作用3。乙醇在代谢过程中诱发自由基的产生，对肝脏等多个器官造成损害 。乙醇脂溶性较大，可透过血脑屏障入脑4。 酒精性脂肪肝的发生与以下因素有关：(1)TG合成增多，这是酒精损伤肝脏引致脂肪肝的主要原因；(2)肝脏分解脂肪的能力下降；(3)肝脏输出TG的能力下降5。.2 中药葛花解酒功能的研究明兰茂(滇南本草载：葛花解酒醒脾；酒毒酒痢，吐血呕血。消热，解酒毒。据此，说明葛花(Flos Puerariae)是中国传统医学中最具代表性的解酒药物6。文献通过每日予大鼠白酒灌胃方法复制大鼠酒精性肝损伤模型。观察中药葛花对大鼠酒精性肝损伤的预防作用。110只雄性Wistar大鼠随机分为6组：空白组、模型组、葛花醇提物低剂量组、葛花醇提物中剂量组、葛花醇提物高剂量组和阳性对照药东宝甘泰片组。在造模的同时灌胃葛花醇提物及东宝甘泰片水溶液。连续灌胃8周，8周末取材观察：血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性。总蛋白(TP)及白蛋白(ALB)含量；肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、复原型谷胱甘肽(GSH)含量；肝组织病理变化。结果显示，模型组大鼠出现肝组织脂肪变性和炎性浸润，血清ALT、AST、ALP活性较空白组显著增加。TP、ALB含量较空白组显著降低；且肝组织中SOD活性显著降低。MDA含量显著升高。葛花醇提物组大鼠的肝组织脂肪变性和炎性浸润均较模型组有所减轻。血清ALT、AST活性较模型组显著降低，TP、ALB含量较模型组显著升高肝组织SOD活性较模型组显著升高。MDA含量显著低于模型组。GSH含量较模型组也明显升高。研究说明，葛花醇提物具有明显预防酒精性肝损伤的作用7。.3 中药葛花解酒的作用机制葛花主要作用为解酒和保肝。葛花中的异黄酮可使血中乙醇、乙醛浓度下降，以及降低BUN的升高，从而起到解酒作用；异黄酮及三萜皂苷对CCl4所致小鼠肝损伤，可使AST、ALT显著下降8。葛花能够在乙醇的肠胃吸收及代谢两个环节发挥作用。其水提取物通过激活乙醇脱氢酶活性来降低乙醇的浓度，从而有效地降低血中乙醇浓度，对酒精引起的肝细胞损害有保护作用911。葛花中的有效成分对酒精代谢障碍及肝功能有改善作用；对酒精引起的脏器障碍及消化道功能障碍也有一定的改善作用12。此外，葛花异黄酮还能扩张脑血管、心血管和外周血管，使血压骤降、心输出量锐减，使脑组织缺血缺氧，异黄酮还能解除平滑肌痉挛13。葛花解酲汤可降低酒精所致小鼠ALT、HI升高。减轻肝脏损害，有明确的保肝作用，也是治疗酒精性肝病的有效方药13。2研究方案：2.1研究目标：用葛花对酒精性脂肪肝大鼠模型进展治疗研究，找出对酒精性脂肪肝更有效的防治方法。2.2材料与方法动物及饲料安康雄性Wistar大鼠40只，体重20020g，二级动物由学校实验动物中心提供。普通饲料喂养，动物室温度(252)2.2.2药物及试剂高度白酒(北京酿酒总厂生产的红星二锅头酒，56度)；玉米油(华北制药康欣生产)；葛花购自杏园春药材；谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)测定试剂盒北京化工生产。2.2.3造模方法将40大鼠正常饲养1周后，随机取10只作为空白组正常饲养，其余30只动物为造模组。造模8周后随机分为模型组、葛花水煎液组、葛花粉末组，每组10只动物。按照厉有名14等的造模方法，给予根底饲料加1胆固醇、5猪油、10玉米油做成的混合饲料，另外结合孙怡宁15等白酒灌胃的方法，按白酒剂量为1 mL/100 g次，每日上午9时灌胃。2.2.4给药方法除正常喂养外，每日上午按1 mL/100 g分别灌胃：空白组以生理盐水灌胃；葛花水煎液组按0.16g/mL葛花水煎液灌胃，葛花粉末组按1.4g/kg粉末喂食。3h后模型组和葛花水煎液以及粉末组分别灌一样量的白酒，持续8周。2.3 测试指标于第8周末，所有大鼠均禁食12 h，取全血以2500 rpm低温离心15分钟别离血清，血清ALT、AST采用改良赖氏法检测；取出大鼠肝脏观察，并取肝右叶距肝脏边缘0.5cm处组织一小块，放入10甲醛固定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察。2.4统计学方法应用SPSS12.0软件进展录入和统计分析，组间比较统计方法为一般性描述性统计，单因素方差分析、相关和回归分析等。2.5 预期结果至第8周末，模型组大鼠的体重较空白组大鼠体重明显减轻(P001)，葛花水煎液以及粉末组大鼠体重与模型组无显著差异。至第8周末模型组大鼠肝指数与空白组相比显著增加(P001)。葛花的两组组肝指数与模型组相比均有显著下降(P005)。模型组肝细胞的变态及炎性浸润程度要比空白组以及葛花两组大。2.6技术路线讨论定题主要是我们浏览了各类期刊后再针对社会医学的研究的热点和近年来出现频率越来越高的疾病现象确定我们要研究的方向和定下课题主题。查找撰写定好题目后我们分工合作查找相关资料，主要通过上校园网检索，或其它网站搜索还有利用学校图书馆的文献资源，撰写好综述。实验设计参考文献的实验，针对实际情况，设计出属于自己的实验方案。讨论分析针对实验中出现的与预期目标不符合或相反的情况进展分析，找出其原因所在。2.7拟解决的重要问题及难点本课题的难度在于实验过程中取血以及肝脏的处理，因为本人对该实验还没完全熟练，故需要老资格的师兄协助完成。2.8创新性选题的切入点恰当，采用标准的实验分析方法对数据进展分析汇总文献使用的是葛花的醇提取物，我们改用葛花的水煎液以及粉末进展对照性实验，以另一个角度对葛花的成效与它的剂型是否相关有更深的认识。2.9 研究进度第一阶段：在四月初到四月中旬购置研究需要材料。第二阶段：在四月中旬到五月中旬进展对大鼠的喂养。第三阶段：五月中旬到六月初进展实验。第四阶段：六月初将实验得到的数据进展处理及汇总完成论文。3.可行性分析此次研究是在别人研究工作的根底上进展的，有前人的大量工作可供借鉴，吸取其中的优点，防止其中的缺点，从而此次研究的有据可寻，有理可依。本课题组成员理论知识扎实，有很好的独立思考问题能力和团队合作精神，有过屡次实验的经历，熟悉有关的步骤。我校的师资队伍和科研力量都比较强大，有相关经历的师兄师姐也表示会支持我们的课题和提供建议和帮助，这也将很有助于我们的课题的开展。参考文献1 2 张秀芬。酒精性脂肪肝患者的安康指导。中国误诊学杂志2008年8月第8卷第23期3 戴德银酒的代谢生理及对药效和安康的影响J华西药学杂志，1991，6(4)：231-2354 Alfonso V，Cristina L，Karo-i Set a1 Silymarin protection Flagainst heptic lipid pem*idatlon induced by acute ethanol into*lcatio JBiochem Pharmacol，1985，34：220922125 欧明汉英常用中医处方手册M：广东科学技术出版社，19912086 孙卫胜，马骏等解酒方药研究概况甘肃中医，1998，11(3)：47487苗彦妮，钟赣生.葛花对大鼠酒精性肝损伤的预防作用研究.科技导报 2008，26(15)618 田代华实用中药辞典(下卷)M：人民卫生出版社.200218979 江苏新医学院中药学大辞典(下册)M：上海科学技术出版社，199423010芦洁，李文哲，倪亚明中药水提取物对乙醇脱氢酶活性影响的初步研究J同济大学学报医学版，2002。23(1)：2311王东坡，谭学林葛花解醒汤对酒精性肝病防治作用研究J贵阳中医学院学报，2002，24(2)：5512中岛嘉次郎葛花对消化道的影响J国外医学中医中药分册，2002，24(4)：25013 王东坡，谭学林葛花解醒汤对酒精性肝病防治作用研究J贵阳中医学院学报，2002，24(2)：514 厉有名，夏维新脂肪肝现代诊疗M：江苏科学技术出版社，20036515 孙怡宁，尚荣军白酒灌胃法建立大鼠早期酒精性肝病模型J陕西医学杂志，2002，6(32)：565教师与学生承担的工作及责任1. 教师在该研究工程中承担的工作及责任：指导和监视课题的进展2. 学生在该研究工程中承担的工作及责任：负责课题实验的进展、数据统计、论文撰写预期成果类别： 社科类社会调查报告及学术论文 自然科学类学术论文经费预算序号经 费 开 支 科 目经 费 预 算金 额 元 1雄性Wistar大鼠30.00元*40只1200.002白酒28元*15瓶420.003葛花150.00 4ALT、AST试剂盒ALT、AST试剂盒各一瓶84.005显微镜用品50.006玉米油30元*2L一瓶30.007常规石蜡20.008以上科目预算经费合计 1954.00参与工程的学生承诺：我保证上述填报内容的真实性。如果获得资助，我与本工程组成员将严格遵守广州中医药大学本科生创新实验工程实施与管理暂行方法的有关规定，切实保证研究工作时间，按方案认真开展研究工作，按时报送有关材料。签名： 指导教师意见： 本课题选题合理、研究思路清晰，技术路线合理，目标明确，同意对其进展指导。如获资助，确保工程顺利开展并完成工作目标。 签名： 指导教师所在实验室意见 同意提供可能的帮助，以完成课题。 主任签章： 年 月 日学生所在学院意见 单位盖章： 年 月 日教务处审批意见 负责人签章： 年 月 日. z.