肝胆病医院碱性磷酸酶ALP测定速率法

肝胆病医院 碱性磷酸酶（ ALP ）测定（速率法）1：概述碱性磷酸酶英文简称 AKP 或 ALP ，是广泛分布于人体各脏 器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎 盘等组织 ,。它不是单一的酶，而是一组同功酶。目前已发现 有 AKP1 、 AKP2 、 AKP3 、 AKP4 、 AKP5 与 AKP6 六 种同功酶。 碱性磷酸酶 （ALP ）：是从牛肠粘膜或大肠杆菌中 提取。 从大肠杆菌提取的 AP 分子量为 80kD ，酶作用的最适 pH 为 8.0；用小牛肠黏膜提取的 AP 分子量为 l00kD ，最适 pH为96 般采用对硝基苯磷酸酯（p-NPP）作为底物。它 可制成片状试剂，使用方便。产物为黄色的对硝基酚，在 405nm 有吸收峰。用 NaOH 终止酶反应后，黄色可稳定一段 时间。 2 标本的收集新鲜无溶血标本， 血清或血浆样本均不溶血。 血浆样本只 能采用肝素或 EDTA 抗凝。样本在 4摄氏度可稳定 7 天。采 血前病人应禁食 12 小时，采集静脉 3ml, 待凝固后（最好放 在 37 摄氏度水浴箱内 45 分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60 分钟凝血析出血清。 3000r/min 离心 5-10 分钟， 分离出 血清备用。不建议采用血浆标本。3：方法原理 样本中的碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚，生成游离的 对硝基苯酚和磷酸，引起 405nm 处的光吸收值升高，通 过检测 405nm 处光吸收值上升的速率，可以测定碱性磷酸 酶的活力。4 剂来源，配置及储存试剂来源：迪瑞 试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使 用。启用后在 2-8 度可稳定 30 天。 若试剂混浊， 或以蒸馏水 为空白在 405nm 处的光吸收值低于 0.8A, 应予丢弃。试剂储存：试剂避光储存 2-8 摄氏度可稳定至标签所示失效期。5 分析仪器CS-600B 全自动生化分析仪分析参数：样品量 4 u/l 试剂量：第一试剂 200 u/l (R1)； 第二试剂 50 u/l测光点 2338 测定模式：速率法 正反应分析波长：405nm/505nm(主波长/副波长)6 计算方法ALP(U/L)=( A/min*Tv*1000)(18.8*Sv*P)式中Tv= 总反应体积Sv=样本体积18.8=NADH 在 405nm 处的毫摩尔消光系数P=比色杯光径(cm)7 线性范围：本实验的线性范围： 0850U/L8 参考范围：男性： 1-12 岁 500 U/L1215 岁750 U/L女性： 1-12 岁500 U/L15 岁40-150 U/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围， 请进行下一步。2：新开一瓶质控品，重测失控项目，如新开的质控血清结 果正常，那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长 而变质，如结果仍不再允许范围，则进行下一步。3：进行仪器维护，重测失控项目。检查仪器状态，查明光 源是否更换，比色杯是否需要清洗或更换？对仪器进行清洗 等维护。另外还要检查试剂，此时可更换试剂已查明原因。 如果结果仍不再允许范围内，则进行下一步。4：重新校准。重测失控项目。用新的校准液校准仪器，排 除校准液的原因。5：请专家帮助。如果前五步都为能得到在控结果，那可能是仪器或试剂已查明原因，只有和仪器或试剂厂家联系请求 他们的技术支援。10 注意事项1:试剂和样本用量可根据不同仪器要求按比例改变。2：如测试结果超出线性范围，样本应稀释后测试，调整因子数或将结果乘以稀释倍数。3：结果的准确性仪器校正和测定温度，时间的控制。4：由医生根据临床症状和其他实验结果做出临床诊断。11：临床意义临床上测定 ALP 主要用于骨骼、 肝胆系统疾病的诊断和鉴别 诊断， 尤其是黄疸的鉴别诊断。 对于不明原因的高 ALP 血清 水平，可测定同工酶以协助明确其器官来源。1. 生理性增高：儿童在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可比正常人高 12倍。处于生长期的青少年，以及孕妇和进食脂肪含量高的食物后均可以升高。2. 病理性升高： （ 1 ）骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性 肿瘤、恶性肿瘤骨转移等； （2）肝胆疾病如肝外胆道阻塞、肝癌、肝硬化、毛细胆管 性肝炎等；（3）其他疾病如甲状旁腺机能亢进。3. 病理性降低 ：见于重症慢性肾炎、 儿童甲状腺机能不全、 贫血等。