紫杉醇注射液

新增 紫杉醇注射液Zishanchun zhusheyePaclitaxel Injection本品为紫杉醇加适量助溶剂和稳定剂制成的灭菌溶液。含紫杉醇（G7H51NO4 ）应为标示量的 %。【性状 】本品为无色或淡黄色的澄明粘稠的液体。【鉴别】 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶 液主峰的保留时间一致。【检查】pH值 取本品1ml，加生理盐水稀释至 20ml，依法测定（附录 VI H），pH值应 为 。有关物质 取本品， 加乙醇制成每 1ml 中约含的溶液， 作为供试品溶液； 精密量取适量， 分别加乙醇稀释成每 1ml中约含 冯、的溶液，作为对照溶液和对照溶液；另取紫杉 醇、紫杉醇杂质 A（三杉尖宁碱）、紫杉醇杂质 B（7-表10-去乙酰基紫杉醇）与紫杉醇杂质 C（7-表-紫杉醇）对照品适量，用乙醇溶解并稀释制成每1ml含紫杉醇、紫杉醇杂质 A、紫杉醇杂质B各 冯与紫杉醇杂质 C为25%的溶液作为系统适用性溶液。照高效液相色谱法（附录V D）测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为 250mm；以乙腈-水为流动 相进行梯度洗脱，初始流动相为乙腈 -水（ 40：60），洗脱至主峰出完（约 35分钟），然后以 每分钟 %的速度增加乙腈的比例，25分钟后，乙腈的比例增至 80%，再以每分钟 4%的速度降低乙腈的比例，10分钟后，乙腈的比例降至 40%保持此比例10分钟；流速为 min；柱温 为30C ;检测波长为227nm。取系统适用性溶液和对照溶液各101注入液相色谱仪，紫杉醇峰与紫杉醇杂质 B峰之间的分离度应大于，对照溶液信噪比应大于10。取对照溶液10 %注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%20%精密量取供试品溶液和对照溶液各10%l ，分别注入液相色谱仪，供试品溶液色谱图中相对保留时间分钟以前的色谱峰不计，保留时间在紫杉醇杂质 C之后的色谱峰不积分， 供试品溶液色谱图中如有杂质峰，紫杉醇杂质A （校正因子为）及其他单个杂质峰面积均不得大于4倍对照溶液的主峰面积（），各杂质的峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积的%）。细菌内毒素 取本品，以细菌内毒素检查用水至少稀释至每 1ml 中含紫杉醇的浓度后， 依法检查（附录 XI E ）,每1mg紫杉醇中含内毒素的量应小于 。其他 应符合注射剂项下有关的各项规定（附录 I B ）。【含量测定】照高效液相色谱法（附录 V D）测定色谱条件和系统适用性试验 用十八烷基硅烷为填充剂；以甲醇 -水-乙腈（ 23：41 ：36 ） 为流动相，检测波长为 227nm。取有关物质项下系统适用性溶液10止注入液相色谱仪，紫杉醇峰与紫杉醇杂质 A B峰的分离度应测定法用内容量移液管，精密量取本品2ml，置100ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10 U注入液相色谱仪，记录色谱图；另取紫杉醇对照品适量，精密称定， 同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。【 类别 】 同紫杉醇。【规格】（1） 5ml：30mg（2） 10ml：60mg ：100mg【贮藏】遮光，密闭，25C以下保存。关于中国药典2010年版紫杉醇注射液质量标准修订的说明紫杉醇注射液为抗肿瘤药，用于转移性卵巢癌和乳腺癌。研究表明对肺癌、食管癌也有一定疗效。本品为紫杉醇加适量的助溶剂和稳定剂制成的灭菌溶液。国家局网站上查询紫杉醇的生产企业见表 1。表1:紫杉醇生产企业编号批准文号生产企业1国药准字H山东鲁抗辰欣药业有限公司国药准字H国药准字H2国药准字H浙江九旭药业有限公司3国药准字H哈尔滨博莱制药有限公司4国药准字H江苏康希制药有限公司国药准字H5国药准字H河北医科大学生物医学工程中心6国药准字H南开允公药业有限公司国药准字H国药准字H7国药准字H北京双鹭药业股份有限公司8国药准字H海南豪创药业有限公司9国药准字H黑龙江福和华星制药集团股份有限公司10国药准字H海南新世通制药有限公司国药准字H11国药准字H重庆华立控股股份有限公司药业分公司12国药准字H湖北华源世纪药业有限公司13国药准字H海口康力元制药有限公司国药准字H14国药准字H扬州奥赛康药业有限公司国药准字H国药准字H国药准字H15国药准字H悦康药业集团有限公司16国药准字H北京华素制药股份有限公司国药准字H17国药准字H海口奇力制药有限公司18国药准字H哈药集团生物工程有限公司19国药准字H北京世桥生物制药有限公司20国药准字H山西泰盛制药有限公司21国药准字H浙江海正药业股份有限公司22国药准字H扬子江药业集团有限公司国药准字H23国药准字H山西振东金晶药业有限公司24国药准字H哈尔滨三联药业有限公司国药准字H25国药准字H黄石李时珍药业集团武汉李时珍药业有限公司国药准字H26国药准字H贵州汉方制药有限公司27国药准字H海南中化联合制药工业有限公司28国药准字H深圳万乐药业有限公司29国药准字H黄石飞云制药有限公司30国药准字H湘北威尔曼制药有限公司31国药准字H重庆莱美药业有限公司32国药准字H安徽大东方药业有限责任公司33国药准字H山西普德药业有限公司国药准字H34国药准字H四川三精升和制药有限公司35国药准字H深圳海王药业有限公司36国药准字H海口市制药厂有限公司国药准字H37国药准字H四川康益生物技术制药有限责任公司38国药准字H北京协和药厂39国药准字H太极集团四川太极制药有限公司40国药准字H上海医药（集团）有限公司华联制药厂一、样品和资料收集情况：我们对各企业均用特快专递发了文，个别企业无反馈信息，部分企业长期不生产，无样品。提供样品和资料情况见表 2：表2:各企业资料和样品提供情况编号生产企业规格批号资料与样品5ml:30mg08022611北京华素5ml:30mg0802271均有10ml:60mg08022815ml:30mg0604072北京协和5ml:30mg070605均有5ml:30mg0801013哈药集团5ml:30mg均有5ml:30mg4贵州汉方5ml:30mg080101均有5ml:30mg080201:100mg0710015江苏奥赛康均有:100mg0712015ml:30mg0610016重庆莱美均有5ml:30mg080101:100mg0801087海口制药:100mg061201均有5ml:30mg0801248山西振东5ml:30mg均有9河北医科大学5ml:30mg050201均有10湘北威尔曼5ml:30mg071102均有5ml:30mg06120111湖北华源5ml:30mg070603均有5ml:30mg07060212四川三升精和5ml:30mg080101均有5ml:30mg080105015ml:30mg0712310113扬子江均有5ml:30mg08011301:100mg0801250114海南新世通5ml:30mg均有5ml:30mg15深圳海王药业有限公司均有5ml:30mg16海南中化联合无样品，有资料17南开公允药业无样品，有资料18黑龙江福和华星无样品，有资料19浙江九旭无样品，有资料20山西泰盛无样品，有资料21江苏康希有对照品和敷料，无样品22重庆华立品种注销23山东鲁抗晨欣无样品和资料24哈尔滨三联无样品和资料25黄石李时珍药业无样品和资料无制剂，有资料，敷料，原26深圳万乐药业有限公司料27悦康药业集团有限公司有工艺，无样品28哈尔滨博莱制药有限公司5ml:30mg无样品，有资料二、质量标准修订说明(见表3)，均由紫杉醇加辅料聚共收集到15个厂家的样品。各企业的生产工艺基本相冋氧乙基蓖麻油和乙醇制成，投料比例也基本相同，其中乙醇为助溶剂，聚氧乙基蓖麻油为助 溶剂和稳定剂，部分企业还加入了枸橼酸作为保护剂，抗氧化，或作为pH调节剂。值的注意的是有文献报道1聚氧乙烯蓖麻油(Cremphor EL):无水乙醇(V : V = 50 : 50)溶液,稀释 至g L1静脉注射，处方中的 Cremphor EL会引起体内组织胺释放,给药后数分钟,造成 部分病人出现药物性皮疹、呼吸急促、支气管痉挛、低血压等过敏反应。所以同时需要注射激素类药物降低不良反应。此外注射液中的Cremphor EL与聚氯乙烯塑料管和输液袋接触可浸提出大量的塑化剂邻苯二甲酸二乙基乙酯(DEHP),引起毒性。所以各企业对所使用的辅料聚氧乙基蓖麻油的质量应给予关注，建议药典委员会组织专家针对辅料聚氧乙烯蓖麻油的质量控制问题，制定方案。目前中国药典2005版二部没有收载辅料聚氧乙基蓖麻油，本拟订标准暂不对此项进行研究。本品有三种规格：30mg/5ml、100mg/、60mg/10ml。表3:各企业工艺及产品规格12345678910编号企业标准编号工艺规格紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油:2457ml，无水乙5ml: 30mg北京华WS1-(X-026)-2001Z素北京协WS(X-026)-2001Z和哈药集团生物 YBH工程贵州汉WS-(X-026)-2001Z方江苏WS-(X-026)-2001Z奥赛康醇2500ml，乳酸:。紫杉醇：60g，聚氧乙烯蓖麻油：醇5000ml，乳酸:。紫杉醇：30mgg聚氧乙烯蓖麻油酸：10mg无水乙醇加至 5ml。紫杉醇：60g，聚氧乙烯蓖麻油：4970g ，总量 10000ml。紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油：10g，加乙醇至5000ml o紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油：10g，无水乙醇加至 5000mlo紫杉醇：100g,聚氧乙烯蓖麻油：无水乙醇加至16700mlo4913ml，无水乙:100mg2625mg,枸橼5ml: 30mg5270g，无水乙醇5ml: 30mg2635g，枸橼酸：5ml: 30mg2635g，枸橼酸：5ml: 30mg8800g，枸橼酸：，:100mg重庆莱紫杉醇：6g，聚氧乙烯蓖麻油：2g，加无水乙醇至 1000ml。500ml，枸橼酸：5ml:30mg美WS(X-026)-2001Z海口制WS(X-026)-2001Z-药山西振紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油:，加无水乙醇，制WS-(X-026)-2001Z5ml:30mg东成 5000mlo河北紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油:2485g，枸橼酸：医科大WS-(X-026)-2001Z5ml:30mg适量，无水乙醇2485g，总量5000ml o学湘北WS-(X-026)-2001Z紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油:2635g，枸橼酸：5ml:30mg11121314威尔曼10g，无水乙醇加至5000ml。安徽华紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油YBH源10g，无水乙醇加至5000ml。四川2635g,枸橼酸:没有提供升三精WS(X-026)-2001Z紫杉醇：30g，聚氧乙烯蓖麻油：2500ml，无水乙醇2500ml，制成1000支。以枸橼酸做为 pH调节扬子江药业海南新世通剂。5ml: 30mg5ml: 30mgWS-(X-026)-2001ZYBH紫杉醇：100g，聚氧乙烯蓖麻油：8350ml，无水乙醇8350ml，制成1000支。以枸橼酸做为 pH调节:100mg剂。紫杉醇:5000ml，紫杉醇:5000ml，30g，50%聚氧乙烯蓖麻油乙醇溶液加至制成1000瓶。100g，50%聚氧乙烯蓖麻油乙醇溶液加至制成1000瓶。5ml: 30mg:100mg深 圳 海紫杉醇：330g，聚氧乙烯蓖麻油：，无水乙醇:;12%15WS(X-026)-2001Z5ml: 30mg55L。王盐酸：适量；药用炭：适量。制成目前，收载紫杉醇注射液的标准有国家标准W$(X-026)-2001Z 、USP3Q各企业标准基本同国家标准 WS(X-026)-2001Z 。企业反馈意见归纳为四点，按照WS(X-026)-2001Z但标准没有明确如标准测定有关物质，辅料聚氧乙基蓖麻油和枸橼酸均会出现较大色谱峰,何扣除。建议增加对已知杂质的检测。WS(X-026)-2001Z 标准中含量测定主峰保留时间较长，并建议将内标法改为外标法。本品用甲醇溶解易发生浑浊现象，建议在有关物质 和含量测定中将溶剂甲醇改为乙醇。本次拟定标准以国家标准W$(X-026)-2001Z 为依据，参考 USP30标准、重庆所拟订提高标准、各企业标准和企业修改建议进行，修订部分说明如下:1、有关物质大部分企业标准同国家标准WS(X-026)-2001Z 的有关物质检测方法，部分企业增加了对已知杂质的控制。注射液国家标准WS(X-026)-2001Z 有关物质的检测方法与原料的标准 WS-(X-025)-2001Z 相同。因目前紫杉醇原料拟定标准工作已完成，其有关物质检查方法保 留了 WS(X-025)-2001Z方法，因此注射液将对国家标准WS(X-026)-2001Z ，结合重庆所标准提高拟订方法及USP30进行方法考察(见表 4)。表4: W$(X-026)-2001Z 标准与USP30重庆所标准提高拟订方法方法比较WS-(X-026)-2001Z标准USP30重庆所标准提高拟订方法流动相梯度洗脱；A相：乙腈梯度洗脱；初始流动相为乙腈-水(40:B相：水A相：乙腈:水(2：3)60),出主峰后以每分钟10%勺B相：乙腈速度增加乙腈比例，5分钟后，时间(min)A%B%时 间A%B%乙腈比例增至90%保持5分(min)钟，再以每分钟 10%的速度降0406001000低乙腈比例，5分钟后，乙腈354060261000比例降为40%保持此比例10608020661783分钟。704060671000804060751000流速minminmin检测波长227nm227nm227nm色谱柱GsC8 ( 150X,5耐制备甲醇乙腈乙醇样品溶剂柱温30 C35 C30 C、样品溶液的制备溶剂的考察可能由于辅料聚氧乙基蓖经实验，有些企业的样品，用甲醇溶解后，会出现浑浊现象,麻油甲醇的溶解度较小所引起，改为乙醇后，溶液澄清。另重庆所标准提高拟订方法中也已将甲醇改为乙醇。故拟订标准采用乙醇作溶剂。系统适用性溶液的配制：量取扬子江样品适量，紫杉醇杂质A（三杉尖宁碱）（以下简称杂质A）、紫杉醇杂质B（7-表10-去乙酰基紫杉醇）（以下简称杂质B）与紫杉醇杂质C（7-表-紫杉醇）（以下简称杂质 C）用乙醇溶解并稀释制成每 1ml含本品、杂质 A,杂质B,杂 质C分别为 用的溶液。（杂质A B、C各相当于主成分的 %作为系统适用性溶液。自身稀释对照：配制自身稀释供试品对溶液作为对照溶液。有关物质检查结果色谱柱：Agilent Eclipse C 個，250 X ,5 jim使用仪器：Agile nt 1100 液相色谱仪采用 WS（X-026）-2001Z标准，用自身稀释对照法计算测定各企业生产的紫杉醇注射液有关物质检查结果，见表5表5:采用 WS（X-026）-2001Z 标准测定各企业紫杉醇注射液有关物质检查结果编号 企业批号单个最大杂质含量（）总杂质含量（）1扬子江080113012北京协和0604073四川三精0801014湘北威尔曼0711025山西振东6江苏奥康赛0710017哈药工程8贵州汉方0801019重庆莱美06100110湖北华源06120111河北医大05020112海口制药06120313北京华素080226114海南新世通15深圳海王分别采用W$(X-026)-2001Z标准及重庆所标准提高拟订方法测定其中两家企业紫杉醇注射液有关物质，结果见表6表6： W$(X-026)-2001Z标准及重庆所标准提高拟订方法测定紫杉醇注射液有关物质结果厂家方法最大单个杂质峰面积最大单个杂质含量(%总杂质含量(%北京协和重庆所拟订方法WS(X-026)-2001Z四川三精重庆所拟订方法WS(X-026)-2001Z用重庆所拟订方法与用国家标准WS(X-026)-2001Z测定的有关物质结果基本一致，重庆所认为主峰出来后梯度变化过于剧烈，影响杂质的检出，在主峰出来后，为使梯度变缓， 以每分钟1%勺速度增加乙腈至 80% WS(X-026)-2001Z 标准则是在主峰出来之后，以每分 钟勺速度增加乙腈至 80%经比较，WS-(X-026)-2001Z 方法基线变化不影响杂质的检出， 且检出时间比重庆所拟订方法短10分钟，故采用 WS(X-026)-2001Z 方法较为适宜。分别采用WS(X-026)-2001Z标准及USP30紫杉醇注射液的方法测定紫杉醇注射液有 关物质，结果见表 7表7测定结果最大单个杂质含量(%总杂质含量(%USP30方 法扬子江药业 WS-(X-026)-2001Z两个方法检测结果基本一致。综合上述色谱条件的比较，本拟订标准中采用 WS(X-026)-2001Z 的有关物质检查色谱条件测定。杂质及限度各标准对杂质的规定a国内标准 WS（X-026）-2001Z未考察已知杂质，采用 的自身稀释对照法计算杂质,规定单个未知杂质的限度为不得过%总杂质不得过。b USP30采用以配制一定浓度的杂质B溶液为对照溶液，加校正因子方法计算其他已知和未知杂质的含量。对已知杂质的规定如下:表8 USP30杂质的规定相对保留时间校正因子F 杂质限度（%Baccati nlllEthyl ester side cha in10-Deacetylpaclitaxel10-Deacetyl-7-epipaclitaxel(paclitaxelcompou nd B)related7-Epipaclitaxel其他单个杂质不得过%总杂质不得过%c部分企业标准增加了分离度的考察，对单个已知杂质和未知杂质的控制。主要控制的杂质为杂质 A、杂质 B 杂质 C Baccatinlll 。小结：从企业的有关物质检查结果来看（见表5），大部分企业（共13家）的有关物质检查结果单个杂质含量均低于%有三个企业样品的最大单个杂质超过了%其中海南新世通提供的稳定性数据表明最大单个杂质含量均低于%河北医大提供的为申报时的留样，样品没有外包装，保存不好，杂质有可能增加了，USP3 0中分别规定了已知杂质和未知杂质的限度（如表8），因色谱条件为梯度洗脱基线容易波动，色谱峰的保留时间也易发生变化， 所以不采用相对保留时间确定已知杂质的方法，经与厂家联系，无法得到除杂质B和杂质C以外的另三个已知杂质， 且实际测定中，样品中有些未知杂质高于 USP3 0规定的单个未知杂质限度%故在本拟订标准中单个杂质（包括已知和未知）的限度规定为不得过，其中杂 质A的校正因子为(USP30规定)，测得的各企业样品的总杂质基本在之内，本拟订方法 规定总杂质限度和 USP3L致，为不得过。有关物质检查方法学考察系统适用性的考察在分离度色谱图中(见图 1)，杂质B和紫杉醇主峰相邻，需要考察两者之间的分离度， USP30规定为不得小于，经实验，大部分色谱柱能够达到的分离，但是有些色谱柱分离度只 能达到，考虑到当紫杉醇杂质 B和紫杉醇主峰在大于时， 已基本能保证分离，故将两者分离 度规定为不得小于。杂质 A的校正因子为，因此在系统适用性溶液中加入杂质A,起到定位的作用。此外，辅料聚氧乙烯蓖麻油及枸橼酸对测定有干扰，在梯度洗脱时候会出现较大的干扰峰，参照USP30及各企业样品色谱图， 杂质C为保留时间最长的杂质， 在杂质C后出的 色谱峰基本为聚氧乙烯蓖麻油的色谱峰，故拟订杂质C后出现的色谱峰不积分，所以拟订后标准中的，系统适用性溶液的为用乙醇溶解并稀释制成每1ml含本品、杂质A、杂质B和杂质C分别为用的溶液。图1 :有关物质检查分离度图谱色谱柱适用性的考察a采用其他厂家的色谱柱采用色谱柱为 Thermo ODSHypersil C8 (250mmX ,5 g),其他条件同 WS(X-026)-2001Z标准，测定紫杉醇注射液有关物质检查结果如表10:表10:测定结果色谱柱峰面积含量(%量(%北京Thermo ODS Hypersil C18 ,250 X,5 gm协和Agile nt Eclipse C18 ,250 X ,5 gm江苏Thermo ODS Hypersil C18 ,250 X,5 gm奥康赛Agile nt Eclipse C18 ,250 X ,5 gmb采用150mm柱长的色谱柱采用色谱柱为 SHIMADZUD8(150mmX ,5 g),其他条件同 WS(X-026)-2001Z 标准，测定紫杉醇注射液有关物质检查结果如表11:表11:测定结果最大单个杂最大单个杂总杂质含量色谱柱质峰面积质含量(%( %SHIMADZUU ,250 X ,5 艸四川三精 Agile nt Eclipse C18,250 X ,5(im采用不同厂家的色谱柱，有关物质检查结果基本一致，但250mm的色谱柱较长，梯度变化时基线较为平稳，推荐用250mm的色谱柱。线性考察对照溶液的浓度为相当于有关物质检查主峰浓度的%因此，精密称取紫杉醇，配制了相当于有关物质检查主峰浓度的% % % % %的溶液，考察有关物质检查的线性，结果如下：表12：线性考察结果百分含量浓度(mg/ml)峰面积%浓度线性方程为y = x- , r=,线性关系良好。检出限和定量限的考察%供试品自身稀释溶液的的信噪比大于10，做为定量限溶液。%的供试品自身稀释溶液的信噪比大于3,做为检出限溶液。辅料峰的扣除各企业的生产工艺中用到的辅料均含有乙醇和聚氧乙烯蓖麻油，部分生产企业使用了枸橼酸。紫杉醇在水中难溶，在乙醇、甲醇、氯仿、乙醚中溶解，其中乙醇为溶剂，聚氧乙烯 蓖麻油为增溶剂及稳定剂，枸橼酸为抗氧化剂。在有关物质检查中，能看到明显的辅料峰， 按照工艺的比例，配制了相当于有关物质检查浓度的枸橼酸和聚氧乙烯蓖麻油供试品溶液， 空白溶液（乙醇）的色谱峰如图2,枸橼酸在相对保留时间前出峰，如图3所示，聚氧乙烯蓖麻油的图谱如图4所示，各厂家提供的聚氧乙烯蓖麻油的图谱基本一致，在杂质C之前有两个色谱峰，其中一个和主峰重叠，最大的峰面积不超过紫杉醇主峰面积%因此可以忽略不计，但考虑到聚氧乙烯蓖麻油杂质C之后出峰峰面积很大，干扰较大，且杂质 C为USP30中控制的保留时间最晚的一个已知杂质，经实验表明，在杂质C后面一般没有杂质出现了，故拟订标准中规定，在紫杉醇有关物质考察中， 保留时间在紫杉醇杂质 C后的色谱峰不积分。图2:乙醇的色谱图图3:枸橼酸的色谱图图4:聚氧乙烯蓖麻油的色谱图溶液稳定性的考察对江苏奥康赛提供的样品进行了供试品溶液稳定性的考察，样品制备好后，立即进样,结果如表13:表13:溶液稳定性的考察进样时间（min）单个最大杂质含量（%总杂质含量（1021603240432054006480756086409720供试品溶液在12小时内有关物质没有明显变化，溶液稳定性良好。2、不溶性微粒按中国药典2005版二部附录I B规定，不溶性微粒检查在注射剂其他项下。本品比较粘稠，经实验不宜直接测定，需稀释后再测定。因不溶性微粒检测仪型号、性能都存在差异，检查时供试品需稀释多少倍合适，因不同仪器而异，所有对稀释倍数未作明确规定，试验人员将按照附录进行操作，酌情处理。在本实验室操作时，取本品3瓶（注：规格为：30mg/5ml，当规格为100mg/样品取1瓶即可），将内容物倾入取样杯内，加入微粒检查用水60ml （共75ml）,搅拌后，超声处理30秒后脱气，测定3次，每次抽取5ml，弃去第一次数据，求出后2次测定的平均值。例：取扬子江的样品（规格为：30mg/5ml），照拟订后方法测定，结果为每瓶供试品中含10口以上的微粒为 718粒（不得过6000粒），含25 以上的微粒为 60粒（不得过600 粒）。3含量测定USP30中含量测定的方法见表 14 ,考虑到此方法使用较为特殊的五氟苯基色谱柱，故在拟订方法中没有考察USP30的含量测定方法，WS（X-026）-2001Z 标准使用的流动相为甲醇-水-乙腈（20： 50: 30）,计算方法为内标法，各企业基本采用此方法，部分企业对流动 相比例进行了调整，或把内标法改成了外标法。重庆所标准提高方法，采用了梯度洗脱的方法（见表14）:表14： WS（X-026）-2001Z 标准与USP30重庆所标准提高拟订方法对比WS(X-026)-2001Z 标准USP30重庆所标准提高拟订方法流动相甲醇-水-乙腈（20： 50: 30）水：乙腈（11： 9）初始流动相为乙腈-水（40:60），出主峰后以每分钟 10% 的速度增加乙腈比例，5分钟 后，乙腈比例增至90%保持流速minmin5分钟，再以每分钟10%的速度降低乙腈比例，5分钟后， 乙腈比例降为40%保持此比 例10分钟。min检测波长227nm227nm227nm色谱柱Cl8五氟苯基C18制备甲醇甲醇：冰醋酸=200: 1乙醇样品溶剂供试品mlmlml溶液浓度内标溶液取炔诺酮适量，加甲醇溶解制成无无每1ml中约含的溶液。样品的制备供试品溶液的制备 取本品，加乙醇溶解制成 ml的溶液，作为供试品溶液。系统适用性溶液的制备取紫杉醇有关物质检查项下(1)配制系统适用性溶液进样，各成分之间的分离度符合 规定(见图5)。因杂质C与主峰和杂质 A、B保留时间相差较大，故拟订后标准系统适用性溶液不加入杂质 Co考虑到该色谱条件下杂质B与紫杉醇色谱峰比较接近，故将系统适用性溶液的分离度规定为液相色谱条件的考察：考虑到采用重庆所拟订的和有关物质类似的梯度洗脱的色谱条件，出峰时间较长，故采用等度洗脱条件，企业反映采用 WS(X-026)-2001Z 标准即流动相为甲醇-水-乙腈(20: 50: 30),出峰时间较晚，参照原料药紫杉醇拟订后的含量测定方法，本品拟订后的流动相为甲 醇-水-乙腈(23: 41 : 36),主峰的出峰时间在 20分钟内。取适量系统适用性溶液，分离度 均符合规定。r-sET-tt,.T-joyLad sac I nor mid 14. or koc ifi do jch 呀啦 ittd xtr uod图5:含量测定分离度图谱(使用色谱柱： Agilent Eclipse C 個,250 x ,5供试品溶液配制浓度的考察：WS(X-026)-2001Z 标准、重庆所标准提高拟订方法及部分企业标准中供试品的浓度均 为含紫杉醇 ml，即吸取本品2ml，用溶剂稀释至25ml。经实验表明，本品的辅料中的蓖麻油和枸橼酸出峰，对基线有干扰，其中枸橼酸在3分钟之前出峰，而蓖麻油则会在主峰后面 出峰，为了减少测定时间及辅料的干扰，我们将供试品溶液稀释至ml，则蓖麻油浓度变稀后不出峰，测定时间缩短。测定结果各企业含量测定结果见表15表15:各企业含量测定结果1北京协和0604072贵州汉方0610013重庆莱美0801014北京华素08022615江苏奥赛康0710016湖北威尔曼0711027哈药生物工程8扬子江080113019海口制药06120310河北医大05020111山西振东12湖北华源06120113四川三精08010114深圳海王15海南新世通WS(X-026)-2001Z 标准中规定：本品含紫杉醇(G7H51NO4)应为标示量的 %各企业含量测定结果均符合规定，本拟订标准未对此限度进行修订。4、细菌内毒素国家标准细菌内毒素标准为：“取本品，以细菌内毒素检查用水稀释 40倍后，依法检查， 本品每1ml中含内毒素量应小于。”如此表达容易产生歧义，可理解为原液中内毒素含量应小于ml，也可理解为稀释40倍后的溶液内毒素含量应小于ml。由于内毒素限值的计算公式为L=K/M( K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂K=5 EU/kg/h ； M为人用每公斤体重每小时最大剂量)。根据紫杉醇注射液的说明书，其使用最大剂量为“250mg/nt”因此紫杉醇限值宜以EU/mg表示。按公式计算得到限值为L=5 EU/kg/h *( 250mg/m x m2+ 60kg) =mg,根据从严原则,因此建议紫杉醇注射液的内毒素标准修改为“每1mg紫杉醇中含内毒素的量应小于”对其中11个厂家的11批样品进行了内毒素的检查，结果表明均符合拟订后标准。5、无菌 照中国药典2005版附录XI H操作检测。6、其他项目未做修订。潘邻霖等沈阳药科大学学报备注：文献：1紫杉醇注射液的制备及其物理稳定性的初步评价2004， 21 (2)，101104紫杉醇杂质Oa、紫杉醇杂质A3英文名：Cephaloma nnineb、紫杉醇杂质B中文名：7-表10-去乙酰基紫杉醇英文名：10-Deacetyl-7-epipaclitaxelc、紫杉醇杂质C中文名：7-表-紫杉醇英文名：7-Epipaclitaxel另对广西壮族自治区食品药品检验所复核以及那种所提问题说明如下：1、有关物质复核单位提出“对照溶液（ 2）（检出限溶液）要求达到信噪比为 10：1，较 难达到”。检出限溶液为 %供试品溶液，规定检出限溶液的信噪比达到10： 1，可以确保对相当于主成分 %浓度的杂质进行定量。拟定标准中没有规定柱效，而采用检 出线溶液保证色谱的检测灵敏度。 而经与复核单位沟通， 复核单位认可通过提高 进样量可以达到检出限溶液的要求。复核单位提出“系统适用性溶液中，杂质 A、B、C的浓度均为冯/ml，其 中杂质C是作为积分终止的参照物，由于杂质C浓度较低，相邻保留时间处如有 其他色谱峰则不易识别，建议适当提高杂质 C的浓度到25 Mg/ml。”考虑到提高杂质C的浓度确实可以方便对杂质 C的指认，故将系统适用性溶 液中杂质C的浓度提高到25 Mg/ml。2、含量测定复核单位提出含量测定项下要求的系统适用性溶液的分离度（规定）较难达到。在含量测定色谱条件下，紫杉醇与紫杉醇杂质 A和B相邻（见图1），对系 统适用性溶液的分离度的考察能够保证色谱条件的适用性， 考虑到该色谱条件下 杂质B与紫杉醇色谱峰比较接近，故将系统适用性溶液的分离度规定改为24 C330 Otf2EEf0EOOK- na.sajL ?IU-a辰o m图1含量测定色谱条件下系统适用性溶液的色谱图复核单位提出紫杉醇注射液较为粘稠，建议含量测定取样时采用内容量移液管。在国家标准和USP30等国外标准中均未使用内容量移液管，本所在起草标准 中采用了移液管，并缓慢释放样品的方法，测得含量结果符合规定。但考虑到由 于个人操作的方法不同，易导致含量测定结果有差异，故采纳复核单位的意见， 改用内容量移液管取样。3、无菌无菌检查收载在中国药典2005版二部其他检查项下，不需在正文中写出操 作方法，按照中国药典2005版二部对紫杉醇注射液进行无菌检查，方法可行， 结果符合规定。检查操作方法如下：【检查】无菌 取本品，照中国药典2005年版二部附录XI H薄膜过滤法， 滤过，以45C含%吐温80的无菌氯化钠溶液为冲洗液，约冲洗 300ml/膜，依 法检查，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，应符合规定。4、细菌内毒素同意广西所对紫杉醇注射液内毒素标准的修改，但建议将“稀释至每1ml中含紫杉醇的溶液”改为“稀释至每 1ml中含紫杉醇的浓度”。最终标准为：细菌内毒素取本品，以细菌内毒素检查用水至少稀释至每1ml中含紫杉醇的浓度后，依法检查(附录XI E ),每1mg紫杉醇中含内毒素的量应小于。将起草说明中限值计算改为L=5 EU/kg/h *( 250mg/nnX m2宁60kg)=EU/mg，