人教版教学课件人教版选修3动物细胞工程

多莉多莉克隆猴克隆猴动物细胞工程的常用技术有哪些？动物细胞工程的常用技术有哪些？1）动物细胞培养技术）动物细胞培养技术2）动物细胞融合技术）动物细胞融合技术3）单克隆抗体技术）单克隆抗体技术4）胚胎移植技术（如试管婴儿）胚胎移植技术（如试管婴儿）5）核移植技术（如克隆动物）核移植技术（如克隆动物）以上技术的基础是什么以上技术的基础是什么?l动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有什么特别的地方组织培养基有什么特别的地方？l为什么选用动物胚胎或幼龄动物个体的器官为什么选用动物胚胎或幼龄动物个体的器官或组织做动物细胞培养的材料？或组织做动物细胞培养的材料？l为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？l为什么选用胰蛋白酶做上述处理？为什么选用胰蛋白酶做上述处理？l培养的细胞为何贴壁生长？培养的细胞为何贴壁生长？l如何界定原代培养和传代培养？如何界定原代培养和传代培养？l动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养成为生物个体？培养成为生物个体？一、动物细胞培养一、动物细胞培养 l从动物机体中取出相关的组织，将它从动物机体中取出相关的组织，将它分散成分散成单单个细胞，然后，放在适宜的个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞培养基中，让这些细胞生长和繁殖生长和繁殖。基本过程要从原代培养到传代培养基本过程要从原代培养到传代培养原代培养的细胞原代培养的细胞动物组织（常取胚胎或幼体组织）动物组织（常取胚胎或幼体组织）分散的单个细胞分散的单个细胞细胞悬液细胞悬液培养瓶培养培养瓶培养可继续传代的细胞可继续传代的细胞胰蛋白酶等胰蛋白酶等“10代危机代危机”，大多数死亡，大多数死亡细胞贴壁过程两种贴壁的培养细胞遗传性尚稳定遗传性尚稳定胰蛋白酶等胰蛋白酶等细胞悬液细胞悬液培养瓶培养培养瓶培养“50代危机代危机”绝大多数死亡绝大多数死亡可无限传代的细胞可无限传代的细胞遗传性改变，具癌变特点遗传性改变，具癌变特点传代培养的细胞传代培养的细胞接触抑制定义：细胞从接种到长满底物表面后，由于细胞繁殖数量增多相互接触后，不再增加。动动物物组组织织分散成分散成单个细单个细胞胞细胞细胞悬液悬液培养培养（原代（原代 传代传代 培养培养 培养）培养）胰蛋白酶胰蛋白酶胶原蛋白酶胶原蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶胶原蛋白酶胶原蛋白酶原理：原理：细胞增殖（有丝分裂）细胞增殖（有丝分裂）结果：结果：细胞群，细胞产物细胞群，细胞产物l无菌、无毒无菌、无毒 消毒、灭菌消毒、灭菌 抗生素抗生素 定期更换培养液，清除代谢废物定期更换培养液，清除代谢废物l营养营养 合成培养基：糖、氨基酸、生长因子、无机盐、合成培养基：糖、氨基酸、生长因子、无机盐、微量元素（血清、血浆）微量元素（血清、血浆）l温度和温度和pH 36.50.5，7.2-7.4l气体气体 95%空气，空气，5%CO2?（1 1）用于制造有重要价值的蛋白质生物制品：）用于制造有重要价值的蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。（2 2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。（3 3）用于检测有毒物质）用于检测有毒物质（4 4）用于生理、病理、药理等方面的研究，）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据为治疗和预防疾病提供理论依据比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理培养基性质培养基性质培养基特有成分培养基特有成分培养结果培养结果培养目的培养目的分散处理分散处理脱分化脱分化细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 动物血清动物血清植物体植物体细胞或细胞产物细胞或细胞产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株无病毒植株细胞群细胞群无无有有有有无无问题讨论问题讨论 1 1、某植物非常具有观赏价值，你采取什么、某植物非常具有观赏价值，你采取什么方法来繁殖后代，使它们继承该植物的全部方法来繁殖后代，使它们继承该植物的全部优良性状？优良性状？、19971997年，美国威斯康星州的一个奶牛场年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达的奶牛，年产奶量为有一头名叫卢辛达的奶牛，年产奶量为30.8t30.8t，创造了世界奶牛产量的最高记录。，创造了世界奶牛产量的最高记录。目前世界各国高产牛奶场的奶牛，平均每年目前世界各国高产牛奶场的奶牛，平均每年产量为十几吨，而我国平均水平仅有产量为十几吨，而我国平均水平仅有3 34 4吨。吨。你能想办法繁殖卢辛达的后代，使年产奶量你能想办法繁殖卢辛达的后代，使年产奶量为为30.8t30.8t吗？吗？1 1、什么是克隆、什么是克隆? ?2 2、以前学习过动物克隆的实例吗？、以前学习过动物克隆的实例吗？3 3、请简述多莉克隆的过程？、请简述多莉克隆的过程？多莉羊多莉羊 动物体细胞核移植技术和克隆动物体细胞核移植技术和克隆就是无性繁殖，具体的说，是指从一个共就是无性繁殖，具体的说，是指从一个共同的祖先，通过无性繁殖的方法产生出来同的祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或分子、细胞或个体。个体。l概念：将动物的一个细胞的概念：将动物的一个细胞的细胞核细胞核，移入一，移入一个已经去掉个已经去掉细胞核细胞核的的卵母卵母细胞中，使其细胞中，使其重组重组并发育成一个新的并发育成一个新的胚胎胚胎，这个新的胚胎最终，这个新的胚胎最终发育为动物个体。发育为动物个体。l分类分类 胚胎细胞核移植、体细胞核移植胚胎细胞核移植、体细胞核移植l 采用此方法可以将两个不同种、属的采用此方法可以将两个不同种、属的动物优点集中在一起，产生具有双亲优点动物优点集中在一起，产生具有双亲优点的可繁殖的杂种动物。的可繁殖的杂种动物。l 此外，此外，细胞核移植对动物优良杂交种细胞核移植对动物优良杂交种的无性繁殖具有重大意义。这一技术的成的无性繁殖具有重大意义。这一技术的成功与完善对于优良家禽的无性繁殖和濒临功与完善对于优良家禽的无性繁殖和濒临绝迹的珍贵动物的传种意义重大绝迹的珍贵动物的传种意义重大 黑面绵羊去黑面绵羊去核卵细胞核卵细胞白面绵羊乳腺白面绵羊乳腺细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期胚胎早期胚胎胚胎移植胚胎移植另一头绵羊的子宫另一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利以概念图的形式表示体细胞核移植过程？以概念图的形式表示体细胞核移植过程？取供体细胞取供体细胞取卵母细胞取卵母细胞 供体细胞培养供体细胞培养培养到培养到 M中期中期 卵母细胞去核卵母细胞去核 供体细胞供体细胞注入去核的卵母细胞注入去核的卵母细胞 供体核进入受体卵母细胞供体核进入受体卵母细胞 重组胚胎重组胚胎 代孕母牛代孕母牛 生出与供体遗传物质基本相同的个体生出与供体遗传物质基本相同的个体请归纳动物体细胞核移植概念请归纳动物体细胞核移植概念: : 将动物的一个细胞的将动物的一个细胞的细胞核细胞核，移入一个已经，移入一个已经去掉细胞核的去掉细胞核的卵母细胞卵母细胞中，使其重组并发育中，使其重组并发育成一个成一个新的胚胎新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动，这个新胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为物个体。用核移植的方法得到的动物称为克克隆动物隆动物 核移植核移植胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植体细胞核移植（难度高）（难度高）受体细胞：受体细胞：MM期的卵母细胞期的卵母细胞思考题思考题1 1、在进行体细胞核移植之前，为何要去掉、在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？受体卵母细胞的核？卵母细胞的细胞质可使体细胞核的全能性卵母细胞的细胞质可使体细胞核的全能性得以表达；卵母细胞体积比较大，容易操得以表达；卵母细胞体积比较大，容易操作；卵母细胞的细胞质多，营养丰富，能作；卵母细胞的细胞质多，营养丰富，能为早期胚胎的形成提供营养。为早期胚胎的形成提供营养。2 2、为什么选卵母细胞作核移植的受体细胞？、为什么选卵母细胞作核移植的受体细胞？为使核移植动物的遗传物质全部来自有利为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的体细胞。用价值的动物提供的体细胞。3.3.用于核移植的供体细胞一般都选用传代用于核移植的供体细胞一般都选用传代1010代以内的细胞，为什么？代以内的细胞，为什么？10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变核型，未突变.思考题思考题二倍体的核型：二倍体的核型：是指染色体组在有丝分裂是指染色体组在有丝分裂中期的表型，是染色体数目、大小、形态中期的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和特征的总和思考题思考题4.4.细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了体动物进行了100%100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细来自供体细胞核，但核外还有少部分胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞）来自受体卵母细胞.l克隆两栖类、克隆鱼、克隆牛、羊、兔、克隆两栖类、克隆鱼、克隆牛、羊、兔、猴、小鼠等克隆哺乳动物。猴、小鼠等克隆哺乳动物。l用于生物学和医学研究的实验动物用于生物学和医学研究的实验动物l改良动物品种改良动物品种l治疗人类疾病治疗人类疾病l保护濒危动物保护濒危动物l概念：概念： 动物细胞融合，也叫细胞杂动物细胞融合，也叫细胞杂交，是指交，是指两个两个或或多个多个动物细动物细胞结合形成胞结合形成一个细胞一个细胞的过程的过程。l原理：原理： 细胞膜的流动性细胞膜的流动性l动物细胞融合与植物体细胞杂交过程有什么不动物细胞融合与植物体细胞杂交过程有什么不同？它相当于植物体细胞杂交的那一过程？同？它相当于植物体细胞杂交的那一过程？动物细胞融合技术的基本方法和主要用途是动物细胞融合技术的基本方法和主要用途是什么？什么？1）诱导剂除）诱导剂除PEG外还常用灭活的病毒外还常用灭活的病毒2）主要用途是生产单克隆抗体）主要用途是生产单克隆抗体突破有性杂交的局限，使远源杂交成为可能。突破有性杂交的局限，使远源杂交成为可能。用这用这种体细胞融合的技术，如今已在动物间实现了小鼠种体细胞融合的技术，如今已在动物间实现了小鼠和田鼠，小鼠和小鸡，甚至于小鼠和人等和田鼠，小鼠和小鸡，甚至于小鼠和人等许多远缘许多远缘和超远缘的体细胞杂交和超远缘的体细胞杂交。比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合的原理细胞融合的原理细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途意义意义细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性去处细胞壁后诱去处细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合使细胞分散后使细胞分散后诱导细胞融合诱导细胞融合物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体解决远源杂交不亲和的问题解决远源杂交不亲和的问题长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞可以产生多达百万细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个种以上的特异性抗体，但是每个B B细胞只分泌一种化学性质单一、特细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B B细胞进行无细胞进行无性繁殖，即克隆性繁殖，即克隆。 1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念2、怎样才能获得单克隆抗体？、怎样才能获得单克隆抗体？提示提示1 1：仅用细胞培养技术可行吗？：仅用细胞培养技术可行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B细胞产生抗体的能力和细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？用单个用单个B B细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。l实验目的实验目的: :制备单克隆抗体制备单克隆抗体. .l实验原理：实验原理：B B淋巴细胞能产生抗体，骨淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。产生抗体又能无限增殖。l实验材料：小白鼠实验材料：小白鼠l实验器材：培养皿、针筒等等。实验器材：培养皿、针筒等等。l实验过程：如下页实验过程：如下页 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程 注射抗原注射抗原B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体（1 1）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B淋巴细胞融合淋巴细胞融合? ?小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，B B淋巴细胞能够产生抗体。淋巴细胞能够产生抗体。细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。（2 2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗）骨髓瘤细胞是癌细胞吗? ? 有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞， 具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞， 所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。（3 3）聚乙二醇处理后，培养液中存在哪几种细胞？聚乙二醇处理后，培养液中存在哪几种细胞？（4 4）整个制备过程为何要经过两次筛选）整个制备过程为何要经过两次筛选? ?（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性能产生特异性抗体的细胞群。）抗体的细胞群。） 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的克隆抗体。这里的单克隆单克隆确有确有单个细胞单个细胞克隆的含义，克隆的含义，只不过克隆的不是只不过克隆的不是B B淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。）。）（5 5）应用了什么技术：应用了什么技术：动物细胞融合、动物细胞培养动物细胞融合、动物细胞培养基本过基本过程程实验鼠实验鼠（接种）（接种）抗原抗原取得取得B淋巴细胞淋巴细胞取得骨髓瘤细胞取得骨髓瘤细胞诱导融合诱导融合杂交瘤细胞杂交瘤细胞培养、筛选单克隆细胞培养、筛选单克隆细胞能产生特定抗体的细胞群能产生特定抗体的细胞群体外培养体外培养提取抗体提取抗体体内培养体内培养从培养液中提取从培养液中提取从小鼠腹水中提取从小鼠腹水中提取单克隆抗体单克隆抗体原理：杂交瘤细胞已具有原理：杂交瘤细胞已具有“双亲细胞双亲细胞”的特性的特性既能分泌抗体，又能无限既能分泌抗体，又能无限增殖增殖单抗的主要用途是：单抗的主要用途是：诊断诊断单抗试剂盒单抗试剂盒治疗治疗抗癌抗癌“生物导弹生物导弹”预防预防传染病易感者传染病易感者单抗的突出特点单抗的突出特点特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高骨髓瘤细胞是特殊选择的代谢缺陷型细胞株！骨髓瘤细胞是特殊选择的代谢缺陷型细胞株！DNADNA合成合成主途径主途径补救途径补救途径氨基喋呤阻断氨基喋呤阻断DNADNA合成合成 已知细胞合成已知细胞合成DNA有有D和和S两条途径，其中两条途径，其中D途径途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：（1）试管中除融合的杂种细胞外，还有）试管中除融合的杂种细胞外，还有 种种融合细胞。融合细胞。（2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，并说原理。分离出杂种细胞，并说原理。方法：方法： 原理：原理： （1 1）2 2（2 2）培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞）培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞 加入氨基嘌呤后，加入氨基嘌呤后，使使DD合成途径阻断，仅有合成途径阻断，仅有DD合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞中的中的S S途径合成途径合成DNADNA而增殖而增殖（1 1）不同细胞工程技术间的关系）不同细胞工程技术间的关系 植物组织培养是植物细胞工程技术植物组织培养是植物细胞工程技术的基础。的基础。 动物细胞培养是各种动物细胞工程动物细胞培养是各种动物细胞工程技术的基础。技术的基础。 为达到特定的目的，许多细胞工程为达到特定的目的，许多细胞工程技术往往需要同时运用。技术往往需要同时运用。 例如：克隆动物例如：克隆动物 克隆动物用于挽救濒危动物可行性克隆动物用于挽救濒危动物可行性不够明朗，因为挽救濒危动物需要提高不够明朗，因为挽救濒危动物需要提高它们的繁殖能力，而克隆技术却是一个它们的繁殖能力，而克隆技术却是一个降低繁殖力的方法；此外，克隆动物在降低繁殖力的方法；此外，克隆动物在遗传上是全等的，一种特定的病毒或其遗传上是全等的，一种特定的病毒或其它疾病的感染，将会带来灾难；如果无它疾病的感染，将会带来灾难；如果无计划地克隆动物，会扰乱物种的进化规计划地克隆动物，会扰乱物种的进化规律，干扰性别比例。律，干扰性别比例。 细胞工程的优势在于避免了分离、细胞工程的优势在于避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作，只需提纯、剪切、拼接等基因操作，只需将细胞遗传物质直接转移到受体细胞将细胞遗传物质直接转移到受体细胞中就能够形成杂交细胞，因而能够提中就能够形成杂交细胞，因而能够提高基因的转移效率。高基因的转移效率。 此外，细胞工程不仅可以在植物此外，细胞工程不仅可以在植物与植物之间、与植物之间、 动物与动物之间、微动物与动物之间、微生物与微生物之间进行杂交，甚至可生物与微生物之间进行杂交，甚至可以在动物与植物与微生物之间进行融以在动物与植物与微生物之间进行融合，形成前所未有的杂交物种。合，形成前所未有的杂交物种。 在生物技术的研究、开发和产业化过在生物技术的研究、开发和产业化过程中，生物工程的各分支领域程中，生物工程的各分支领域基因工基因工程、细胞工程、发酵工程和酶工程等有着程、细胞工程、发酵工程和酶工程等有着错综复杂的联系，通常是由彼此合作来实错综复杂的联系，通常是由彼此合作来实现的。随着生物工程的迅猛发展，生物工现的。随着生物工程的迅猛发展，生物工程各分支领域的界限趋于模糊，相互交叉程各分支领域的界限趋于模糊，相互交叉渗透，高度综合的趋势越来越明显。渗透，高度综合的趋势越来越明显。 植物细胞工程植物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程技术手段技术手段植物组织培养植物组织培养植物体细胞杂交等植物体细胞杂交等动物细胞培养、动物细胞培养、动物动物细胞融合、单克隆抗细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移体、胚胎移植、核移植等植等分离细胞的酶分离细胞的酶纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶胰蛋白酶胰蛋白酶杂种细胞培养杂种细胞培养离体细胞（脱分化）离体细胞（脱分化）愈愈伤组织（再分化）伤组织（再分化）根芽根芽植物体植物体原代培养原代培养传代培养传代培养（细胞株（细胞株细胞系）细胞系） 等等培养基成分培养基成分矿质元素、蔗糖、维生素、矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素等植物激素等葡萄糖、氨基酸、无葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物机盐、维生素和动物血清等血清等世界上第一只克隆绵羊世界上第一只克隆绵羊“多利多利”和我国第一只转基因牛和我国第一只转基因牛“滔滔滔滔”的培育程序分别如下图的培育程序分别如下图1和图和图2所示，请读图后所示，请读图后回答问题：回答问题：(1)请写出图请写出图1中中a、b所指的细胞工程名称：所指的细胞工程名称：a_b_(2)图图1中实施细胞工程中实施细胞工程a时，所需的受体细胞大多采用动时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是物卵细胞的原因是 。(3)图图2中所示过程中的关键环节是中所示过程中的关键环节是( )A.a B.b C.c D.d(4)图图2中中D与亲本与亲本A、B牛的最根本区别是牛的最根本区别是 。(5)继植物组织培养之后，克隆绵羊的培育成功，证明动继植物组织培养之后，克隆绵羊的培育成功，证明动物细胞也具有物细胞也具有 。(6)如果要使出生的动物整合率在理论上提高到如果要使出生的动物整合率在理论上提高到100%，那么应在什么时候鉴定那么应在什么时候鉴定? (1)细胞核移植细胞核移植 胚胎移植胚胎移植 (2)卵细胞体积大，易操作，通过发育可直卵细胞体积大，易操作，通过发育可直接表现出性状接表现出性状 (3)B (4)转基因牛转基因牛“滔滔滔滔”(D)基因组中含有外源基因基因组中含有外源基因 (5)全能性全能性 (6)在胚胎移植前对外源基因在胚胎体内是否已经整合作分在胚胎移植前对外源基因在胚胎体内是否已经整合作分子生物学鉴定，从中挑选出外源基因的整合胚胎进行移植子生物学鉴定，从中挑选出外源基因的整合胚胎进行移植