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午餐肉罐头亚硝酸钠检验方案午餐肉罐头中亚硝酸钠测定引用国标：GB 5009.33-2010 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定一、原理亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定。试样经沉淀蛋白质、 除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮 化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。二、实验试剂（除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。水为 GB/T 6682 规定的二级水或 去离子水。亚铁氰化钾（K4Fe（CN63H2O、乙酸锌（Zn（CH3COO2 2H2O、冰醋酸（CH3COOH、硼酸钠（Na2B4O710H2O、盐酸（p=1.19g/m、_ 氨水（25 %、对氨基苯 磺酸（C6H7NO3S、盐酸萘乙二胺（C12H14N22HCI、亚硝酸钠（NaNO2、硝酸钠 （NaNO3、锌皮或锌棒、硫酸镉亚铁氰化钾溶液（106 g/L:称取 106.0 g 亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至 1000mL乙酸锌溶液（220 g/L:称取 220.0 g 乙酸锌，先加 30mL 冰醋酸（9.3 溶解，用水稀释 至 1000mL饱和硼砂溶液（50 g/L:称取 5.0 g 硼酸钠，溶于 100mL 热水中，冷却后备用氨缓冲溶液（pH 9.69.7 量取 30mL 盐酸加 100mL 水,混匀后加 65mL 氨水,再加 水稀释至 1000mL，混匀。调节 pH 至 9.69.7氨缓冲液的稀释液：量取 50mL 氨缓冲溶液，加水稀释至 500mL,混匀盐酸（0.1 mol/L:量取 5mL 盐酸，用水稀释至 600mL对氨基苯磺酸溶液（4 g/L:称取 0.4g 对氨基苯磺酸，溶于 100mL20 %（V/V 盐酸中,置棕色瓶中混匀，避光保存盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L:称取 0.2 g 盐酸萘乙二胺，溶于 100mL 水中,混匀后，置棕色瓶中，避光保存亚硝酸钠标准溶液 （200 卩 g/mL 准确称取 0.1000g 于 110C120C干燥恒重的亚 硝酸钠，加水溶解移入 500mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀亚硝酸钠标准使用液（5.0 卩 g/m 临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液 5.00mL,置于200mL 容量瓶中，加水稀释至刻度硝酸钠标准溶液（200 卩 g/mL 以亚硝酸钠计：准确称取 0.1232g 于 110C 120C干燥恒重的硝酸钠，加水溶解,移于入 500mL 容量瓶中，并稀释至刻度硝酸钠标准使用液 （5 卩 g/mL 临用时吸取硝酸钠标准溶液 2.50mL,置于 100mL 容 量瓶中，加水稀释至刻度三、实验仪器天平（感量为 0.1mg 和 1mg、组织捣碎机、超声波清洗器、恒温干燥箱、分光 光度计、镉柱；四、实验步骤（一试样的预处理用四分法取适量或取全部，用食物粉碎机制成匀浆备用匚提取称取 5g（精确至 0.01 g 制成匀浆的试样（如制备过程中加水,应按加水量折算，置于 50mL 烧杯中,加 12.5mL 饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以 70C左右的水约 300mL 将 试样洗入 500mL 容量瓶中，于沸水浴中加热 15min,取出置冷水浴中冷却，并放置至室（三提取液净化在振荡上述提取液时加入 5mL 亚铁氰化钾溶液。摇匀。再加入 5mL 乙酸锌溶 液,以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀。放置 30min,除去上层脂肪。上清液用滤纸过 滤,弃去初滤液 30mL,滤液备用。（四亚硝酸钠总量的测定吸取 10mL20mL 还原后的样液于 50mL 比色管中。另吸取 0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL 亚硝酸 钠标准使用液（相当于 0.0 卩、1.0 卩、2.0 卩、3.0 卩、4.0 卩、5.0 卩、7.5 卩、10.0 帆 12.5 卩亚硝酸钠，分别置于 50mL 带塞比色管中。于标准管与试样管中分别 加入 2mL 对氨基苯磺酸溶液，混匀,静置 3 min5 min 后各加入 1mL 盐酸萘乙二胺溶 液，加水至刻度,混匀，静置 15 min,用 2 cm 比色杯,以零管调节零点，于波长 538 nm 处 测吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。五、亚硝酸盐含量计算亚硝酸盐（以亚硝酸钠计的含量按下面的公式进行计算。X 仁 A1X1000/m1/V0X1000式中：X1 试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克（mg/kg;A1 测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为微克（卩 g;m试样质量，单位为克（g;V1 测定用样液体积，单位为毫升（mL;VO试样处理液总体积，单位为毫升（mL。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示效数字。，结果
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