生物生物技术实践 第2讲 微生物的培养与应用 新人教版选修1

第第2讲微生物的培养与应用讲微生物的培养与应用 最新考纲最新考纲 1.微生物的分离和培养微生物的分离和培养2.某种微生物数量的测定某种微生物数量的测定3.培养基对培养基对微生物的选择作用微生物的选择作用4.利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用应用1无菌操作技术包括消毒和灭菌。消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化学药剂无菌操作技术包括消毒和灭菌。消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化学药剂消毒和紫外线消毒等；灭菌包括灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。消毒和紫外线消毒等；灭菌包括灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。2培养基的制备包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板等步骤，倒置平板的培养基的制备包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板等步骤，倒置平板的目的是防止培养皿盖上的水滴滴入培养基造成污染。目的是防止培养皿盖上的水滴滴入培养基造成污染。3大肠杆菌的纯化包括平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法要求多次大肠杆菌的纯化包括平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法要求多次划线，稀释涂布平板法要求菌液要充分地稀释。划线，稀释涂布平板法要求菌液要充分地稀释。4微生物的计数要求制作多个平板，且选择能长出微生物的计数要求制作多个平板，且选择能长出30300个菌落的平板进个菌落的平板进行计数。行计数。5尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都运用了选择培养基，前者所用的培养尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都运用了选择培养基，前者所用的培养基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培养基中纤维素是唯一的碳源。基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培养基中纤维素是唯一的碳源。课前导学课前导学1培养基的概念：培养基的概念：人们按照微生物对人们按照微生物对_的不同需求，配制出供其的不同需求，配制出供其生长繁殖的生长繁殖的_。知识点一微生物的实验室培养知识点一微生物的实验室培养营养物质营养物质营养基质营养基质 2方法与步骤方法与步骤【答案【答案】固体氮源无固体氮源无机盐称量灭菌温和强机盐称量灭菌温和强烈所有芽孢平板划线烈所有芽孢平板划线稀释涂布平板稀释涂布平板3无菌技术的方法、类型和对象无菌技术的方法、类型和对象 连一连连一连 【答案【答案】b、a、4大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基过程：计算制备牛肉膏蛋白胨固体培养基过程：计算_溶化溶化灭菌灭菌倒平倒平板。板。(2)纯化大肠杆菌的原理：在培养基上将细菌稀释或分散成纯化大肠杆菌的原理：在培养基上将细菌稀释或分散成_，形，形成单个菌落，此菌落是由一个细胞繁殖而来的子细胞群体。成单个菌落，此菌落是由一个细胞繁殖而来的子细胞群体。(3)微生物的常用接种方法：微生物的常用接种方法：_和稀释涂布平板法，接种过程仍然和稀释涂布平板法，接种过程仍然是是_操作。操作。称量称量单个细胞单个细胞平板划线法平板划线法细胞群体细胞群体 【答案【答案】B【解析【解析】分析表中成分可知，该培养基中没有凝固剂，为液体培养基，该培分析表中成分可知，该培养基中没有凝固剂，为液体培养基，该培养基的营养成分齐全，但存在伊红、美蓝等鉴别物质，属于鉴别培养基，养基的营养成分齐全，但存在伊红、美蓝等鉴别物质，属于鉴别培养基，A错误；错误；该培养基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是绝大多数生物最常该培养基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源，利用的碳源，B正确；该培养基中存在的无机盐和蛋白胨中的某些物质可以看作是正确；该培养基中存在的无机盐和蛋白胨中的某些物质可以看作是生长因子，生长因子，C错误；培养基调节完错误；培养基调节完pH还要进行灭菌等操作后才能使用，还要进行灭菌等操作后才能使用，D错误。错误。2下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是()A获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法C培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌D倒置平板防止培养皿盖上的冷凝水滴落倒置平板防止培养皿盖上的冷凝水滴落【答案【答案】C【解析【解析】微生物培养中获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，通常可以采微生物培养中获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，通常可以采用稀释涂布平板法和平板划线法进行单菌落的分离，以消除污染杂菌；培养基都用稀释涂布平板法和平板划线法进行单菌落的分离，以消除污染杂菌；培养基都需要灭菌，但要根据实际情况选择灭菌的方法，如果培养基的营养物质在高温条需要灭菌，但要根据实际情况选择灭菌的方法，如果培养基的营养物质在高温条件下易分解，则不能使用高压蒸汽灭菌法；倒平板后需将培养皿倒置，以防止培件下易分解，则不能使用高压蒸汽灭菌法；倒平板后需将培养皿倒置，以防止培养基蒸气冷凝成的水滴入培养基而污染。养基蒸气冷凝成的水滴入培养基而污染。课前导学课前导学1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识点二微生物的筛选和计数知识点二微生物的筛选和计数菌种筛选菌种筛选使用以尿素为唯一使用以尿素为唯一_的选择培养基的选择培养基分离方法分离方法_法法实验流程实验流程土壤取样土壤取样_培养与观察培养与观察菌种鉴定菌种鉴定以尿素为唯一氮源的培养基中加入以尿素为唯一氮源的培养基中加入_指示剂指示剂氮源氮源稀释涂布平板稀释涂布平板样品稀释样品稀释酚红酚红 2分离原理：分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成_，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起_作用。作用。脲酶脲酶催化催化 3分解纤维素的微生物分解纤维素的微生物的分离的分离【答案【答案】复合纤维二复合纤维二糖刚果红透明圈刚果糖刚果红透明圈刚果红纤维素梯度透明圈红纤维素梯度透明圈 小题通关小题通关 1某学者欲从被石油污染过的土壤中分离出能分解石油的细菌，并从中筛选某学者欲从被石油污染过的土壤中分离出能分解石油的细菌，并从中筛选出分解石油能力较强的菌株，基本操作过程为采集菌种出分解石油能力较强的菌株，基本操作过程为采集菌种选择培养选择培养纯种分离纯种分离性能测定。下列叙述错误的是性能测定。下列叙述错误的是()A应选用以石油为唯一碳源的选择培养基应选用以石油为唯一碳源的选择培养基B可通过多次选择培养的方式来达到分离和纯化目的菌的目的可通过多次选择培养的方式来达到分离和纯化目的菌的目的C单菌落周围分解圈小的菌株的降解能力强单菌落周围分解圈小的菌株的降解能力强D接种后需将平板倒置且需一个未接种的培养基作对照接种后需将平板倒置且需一个未接种的培养基作对照【答案【答案】C【解析【解析】降解石油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。降解石油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。2使用液体选择培养基培养纤维素分解菌的目的是使用液体选择培养基培养纤维素分解菌的目的是()用液体选择培养基可获得大量纤维素分解菌用液体选择培养基可获得大量纤维素分解菌用液体培养基便于稀释涂布平板用液体培养基便于稀释涂布平板纤维素分解菌只能在液体培养基中生长纤维素分解菌只能在液体培养基中生长用液体培养基可鉴别纤维素分解菌用液体培养基可鉴别纤维素分解菌ABCD【答案【答案】A【解析【解析】使用液体选择培养基培养纤维素分解菌，一方面可以获得大量纤维使用液体选择培养基培养纤维素分解菌，一方面可以获得大量纤维素分解菌，另一方面便于稀释涂布平板。纤维素分解菌也可以在固体培养基上生素分解菌，另一方面便于稀释涂布平板。纤维素分解菌也可以在固体培养基上生长；鉴别纤维素分解菌使用的是固体培养基。长；鉴别纤维素分解菌使用的是固体培养基。1培养基中的营养成分：培养基一般都含有水、无机盐、碳源、氮源和生长培养基中的营养成分：培养基一般都含有水、无机盐、碳源、氮源和生长因子，此外，还要满足微生物生长对因子，此外，还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。、特殊营养物质以及氧气的要求。微生物的实验室培养微生物的实验室培养营养要素营养要素来源来源功能功能碳源碳源无机碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物等含碳无机物构成细胞中的物质和构成细胞中的物质和一些代谢产物；一些代谢产物；有些既是碳源又是能有些既是碳源又是能源源有机碳源有机碳源糖类、脂质、蛋白质、糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉有机酸、石油、花生粉饼等饼等营养要素营养要素来源来源功能功能氮源氮源无机氮源无机氮源NH3、铵盐、硝酸盐、铵盐、硝酸盐、N2等等将无机氮合成含氮的代谢将无机氮合成含氮的代谢产物产物有机氮源有机氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸等尿素、氨基酸等合成蛋白质、核酸及含氮合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物的代谢产物生长因子生长因子维生素、氨基酸、碱基维生素、氨基酸、碱基酶和核酸的组成成分；酶和核酸的组成成分；参与代谢过程中的酶促参与代谢过程中的酶促反应反应2培养基的种类及应用培养基的种类及应用划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点应用应用按物理性按物理性质分质分液体培养基液体培养基不加凝固剂不加凝固剂工业生产工业生产半固体培养基半固体培养基加凝固剂加凝固剂(如琼脂如琼脂)观察微生物的运动、分类鉴定观察微生物的运动、分类鉴定固体培养基固体培养基微生物的分离、鉴定、活菌计微生物的分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏数、菌种保藏按用途分按用途分选择培养基选择培养基培养基中加入某种化学培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所微生物的生长，促进所需的微生物的生长需的微生物的生长培养、分离出特定微生物培养、分离出特定微生物(如培如培养酵母菌和霉菌，可在培养基养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；以尿素为唯一中加入青霉素；以尿素为唯一氮源的培养基用于分离分解尿氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌素的细菌)鉴别培养基鉴别培养基根据微生物的代谢特根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类的微生物(如可用如可用伊红伊红美蓝培养基鉴别饮用水或美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌乳制品中是否有大肠杆菌)划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点应用应用按化学成按化学成份分份分天然培养基天然培养基含化学成分不明确含化学成分不明确的天然物质的天然物质工业生产工业生产合成培养基合成培养基培养基成分明确培养基成分明确(用用化学成分已知的化化学成分已知的化学物质配成学物质配成)分类、鉴别分类、鉴别3微生物的纯化培养微生物的纯化培养方法方法平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法操作操作平板划线法中细胞的分离和平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的划线和移动体平板表面上的划线和移动过程中。在线的开始部分，过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单少，最后可能形成纯种的单个菌落个菌落将分别盛有将分别盛有9 mL水的水的6支试管灭菌，支试管灭菌，并按并按101106的顺序编号；的顺序编号；用移液管吸用移液管吸取取1 mL培养的菌液，注入培养的菌液，注入101倍稀释的试倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸吹吸3次，使菌液与水充分混匀；次，使菌液与水充分混匀；从从101倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注稀释液，注入入102倍稀释的试管中，重复倍稀释的试管中，重复步混匀操步混匀操作。依次类推，直到完成最后作。依次类推，直到完成最后1支试管的支试管的稀释稀释方法方法平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法注意注意事项事项(1)接种环的灼烧：接种环的灼烧：第一次划线前灼烧：杀灭接种环第一次划线前灼烧：杀灭接种环上的微生物，避免污染培养物；上的微生物，避免污染培养物；每次划线前灼烧：杀死残留菌种，每次划线前灼烧：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末保证每次划线菌种来自上次划线末端；端；划线结束后灼烧：杀死残留划线结束后灼烧：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者菌种，避免污染环境和感染操作者(2)灼烧接种环之后，要冷却后再进灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种行操作，以免温度太高杀死菌种(3)划线时最后一区域不要与第一区划线时最后一区域不要与第一区域相连域相连(4)划线用力要大小适当，防止用力划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破过大将培养基划破(1)稀释操作时：每支试管及其中的稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌；操作水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰时，试管口和移液管应在离火焰12 cm处处(2)涂布平板时：涂布平板时：涂布器用体积分涂布器用体积分数为数为70%酒精消毒，取出时，让多酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃；引燃；不要将过热的涂布器放在不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精；的酒精；酒精灯与培养皿距离要酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物合适，移液管管头不要接触任何物体体方法方法平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法目的目的在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体菌落菌落培养培养平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染上的水珠落入培养基造成污染消毒和灭菌的比较消毒和灭菌的比较项目项目条件条件结果结果常用方法常用方法应用范围应用范围消毒消毒较为温和的较为温和的物理或化学物理或化学方法方法仅杀死物体表仅杀死物体表面或内部对人面或内部对人体有害的微生体有害的微生物物煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高温的液体不耐高温的液体化学药剂消毒法化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源氯气消毒水源灭菌灭菌强烈的理化强烈的理化因素因素杀死物体内外杀死物体内外所有的微生所有的微生物，包括芽孢物，包括芽孢和孢子和孢子灼烧灭菌法灼烧灭菌法接种工具接种工具干热灭菌法干热灭菌法玻璃器皿、金属工具玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌培养基及容器的灭菌1回答下列有关微生物培养的问回答下列有关微生物培养的问题：题：(1)如表是某培养液成分含量表，该培如表是某培养液成分含量表，该培养液培养的微生物的同化作用类型是养液培养的微生物的同化作用类型是_；若用此培养液培养固氮微生；若用此培养液培养固氮微生物，则应除去的成分是物，则应除去的成分是_，应加入的物质是应加入的物质是_。考查微生物的营养成分考查微生物的营养成分编号编号成分成分含量含量(NH4)HCO30.5 gKH2PO43.0 gCaSO40.5 gFeCl20.5 g维生素维生素少许少许水水1 000 mL培养基配制好后，分装前应进行的工作是培养基配制好后，分装前应进行的工作是_。 从 配 制 培 养 基 直 到 培 养 完 成 ， 所 采 用 的 预 防 杂 菌 污 染 的 方 法 是从 配 制 培 养 基 直 到 培 养 完 成 ， 所 采 用 的 预 防 杂 菌 污 染 的 方 法 是_、_、_等。等。(3)微生物接种的方法很多，最常用的是微生物接种的方法很多，最常用的是_和和_。【答案【答案】(1)自养型自养型(NH4)HCO3(或或)有机物有机物(2)碳源氮源维生素碳源氮源维生素(或磷酸盐等或磷酸盐等)琼脂琼脂(凝固剂凝固剂)所培养微生物对所培养微生物对各营养成分的需求量各营养成分的需求量调节调节pH高压蒸汽灭菌烧灼接种环酒精棉擦手高压蒸汽灭菌烧灼接种环酒精棉擦手(或或棉塞塞试管口、在火焰旁接种棉塞塞试管口、在火焰旁接种)(3)平板划线法稀释涂布平板法平板划线法稀释涂布平板法【解析【解析】(1)由该培养液中不含有机碳源，可判断培养的生物同化类型为自养由该培养液中不含有机碳源，可判断培养的生物同化类型为自养型；若用此培养液培养固氮微生物，则应除去氮源型；若用此培养液培养固氮微生物，则应除去氮源NH4HCO3，但需加入有机物提，但需加入有机物提供碳源。供碳源。(2)根据所培养微生物对各营养成分的需求量配制培养基的成分，若需观根据所培养微生物对各营养成分的需求量配制培养基的成分，若需观察细菌菌落状况需用固体培养基，还需添加琼脂察细菌菌落状况需用固体培养基，还需添加琼脂(凝固剂凝固剂)；微生物培养时需对培养；微生物培养时需对培养基、接种工具进行无菌处理，并进行严格的无菌操作。基、接种工具进行无菌处理，并进行严格的无菌操作。(3)常用的微生物接种方法常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。有平板划线法和稀释涂布平板法。2金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类患肺炎、肠金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类患肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板(培养基中添加适量血液培养基中添加适量血液)上生长时，可破坏菌上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌落周围的红细胞，使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答相关问题：的操作流程，请回答相关问题：考查微生物的纯化培养考查微生物的纯化培养(1)按细胞结构分类，金黄色葡萄球菌属于按细胞结构分类，金黄色葡萄球菌属于_生物；从培养过程分析，生物；从培养过程分析，金黄色葡萄球菌可进行金黄色葡萄球菌可进行_呼吸。呼吸。(2)7.5% NaCl肉汤培养基为微生物提供的营养成分包括肉汤培养基为微生物提供的营养成分包括_，用，用7.5% NaCl肉汤培养基进行选择培养的主要目的是肉汤培养基进行选择培养的主要目的是_。(3)操作中在血平板上的接种方法是操作中在血平板上的接种方法是_，接种操作前后需要对接种，接种操作前后需要对接种工具进行工具进行_灭菌。灭菌。(4)在制备血平板时需将在制备血平板时需将pH调节至调节至_(填填“微酸性微酸性”或或“微碱性微碱性”)后灭后灭菌，待培养基菌，待培养基_后，再加入适量血液。按培养基功能分类，血平板属于后，再加入适量血液。按培养基功能分类，血平板属于_培养基。培养基。(5)经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现_的菌落，的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带，因此，要对本操作进行完善，完善的方案是所携带，因此，要对本操作进行完善，完善的方案是_。【答案【答案】(1)原核有氧原核有氧(2)碳源、氮源、水和无机盐增加金黄色葡萄球菌的数量碳源、氮源、水和无机盐增加金黄色葡萄球菌的数量(3)平板划线法灼烧平板划线法灼烧(4)微碱性冷却鉴别微碱性冷却鉴别(5)周围存在透明圈设置不加鲜牛奶但其他操作均相同的对照组周围存在透明圈设置不加鲜牛奶但其他操作均相同的对照组【解析【解析】(1)金黄色葡萄球菌是一种细菌，属于原核生物；培养过程无密闭处金黄色葡萄球菌是一种细菌，属于原核生物；培养过程无密闭处理，故它进行有氧呼吸。理，故它进行有氧呼吸。(2)7.5%NaCl肉汤培养基可为微生物提供生长所需要的碳肉汤培养基可为微生物提供生长所需要的碳源、氮源、水和无机盐。用源、氮源、水和无机盐。用7.5%NaCl肉汤培养基进行选择培养是为了增加高度耐肉汤培养基进行选择培养是为了增加高度耐盐性的金黄色葡萄球菌的数量。盐性的金黄色葡萄球菌的数量。(3)图示用的接种工具是接种环，说明在血平板上图示用的接种工具是接种环，说明在血平板上接种的方法是平板划线法；接种工具在接种前后都要进行灭菌处理。接种的方法是平板划线法；接种工具在接种前后都要进行灭菌处理。(4)金黄色葡金黄色葡萄球菌的生长环境为弱碱性，培养基在灭菌前要先调节萄球菌的生长环境为弱碱性，培养基在灭菌前要先调节pH，因金黄色葡萄球菌能，因金黄色葡萄球菌能破坏红细胞，使其褪色，血平板上出现周围存在透明圈的菌落，说明有金黄色葡破坏红细胞，使其褪色，血平板上出现周围存在透明圈的菌落，说明有金黄色葡萄球菌，故血平板是鉴别培养基。萄球菌，故血平板是鉴别培养基。(5)为增强实验结论的严谨性，应增加空白对照为增强实验结论的严谨性，应增加空白对照组。组。微生物纯化的三种途径微生物纯化的三种途径(1)单菌落挑取法：利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基单菌落挑取法：利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法来获得目的微生物。表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法来获得目的微生物。(2)选择培养法：利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生选择培养法：利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物。物。(3)鉴定培养法：利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛鉴定培养法：利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物。选目的微生物。1鉴定分解尿素细菌和分解纤维素细菌的方法鉴定分解尿素细菌和分解纤维素细菌的方法微生物的分离与计数微生物的分离与计数项目项目土壤中尿素分解菌的分离实验土壤中尿素分解菌的分离实验土壤中纤维素分解菌的分离实验土壤中纤维素分解菌的分离实验土壤土壤采样采样采集的土壤应该选择含有尿素的土采集的土壤应该选择含有尿素的土壤壤采集土样应选择富含纤维素的环境采集土样应选择富含纤维素的环境选择选择培养培养选择土样，将土样放在含有尿素作选择土样，将土样放在含有尿素作为唯一氮源的培养基上进行选择培为唯一氮源的培养基上进行选择培养养取土样，在无菌条件下装入锥形取土样，在无菌条件下装入锥形瓶，在一定条件下振荡培养瓶，在一定条件下振荡培养12 d，直到培养液浑浊；选择培养的，直到培养液浑浊；选择培养的目的是增加纤维素分解菌的纯度，目的是增加纤维素分解菌的纯度，确保分离得到所需的微生物确保分离得到所需的微生物项目项目土壤中尿素分解菌的分离实验土壤中尿素分解菌的分离实验土壤中纤维素分解菌的分离实验土壤中纤维素分解菌的分离实验梯度梯度稀释稀释选用一定稀释范围的样品液进行选用一定稀释范围的样品液进行培养以保证菌落数在培养以保证菌落数在30300依次将培养液稀释依次将培养液稀释101107倍倍鉴定鉴定方法方法在以尿素为唯一氮源的培养基中在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，则菌，若指示剂变红，则pH升高，升高，说明该种菌能分解尿素说明该种菌能分解尿素刚果红染色法，即在含有纤维素刚果红染色法，即在含有纤维素的培养基中，加入刚果红时，刚的培养基中，加入刚果红时，刚果红与培养基中的纤维素形成红果红与培养基中的纤维素形成红色复合物；当纤维素被分解后，色复合物；当纤维素被分解后，该复合物不能形成，培养基中出该复合物不能形成，培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明现以纤维素分解菌为中心的透明圈圈2选择培养基的制作方法选择培养基的制作方法(1)在培养基全部营养成分具备的前提下，依据某些微生物对某些物质的抗在培养基全部营养成分具备的前提下，依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而可分离得到酵母菌和霉菌。细菌、放线菌的生长，从而可分离得到酵母菌和霉菌。(2)通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造制造有机物得以生存。有机物得以生存。(3)利用培养基的特定化学成分分离特定微生物。如当石油是唯一碳源时，可利用培养基的特定化学成分分离特定微生物。如当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物。能消除石油污染的微生物。(4)通过某些特殊环境分离微生物。如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在通过某些特殊环境分离微生物。如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用对照组对照组作用作用现象现象结论结论未接种培养基未接种培养基有无杂菌污染的判有无杂菌污染的判断断未接种的培养皿中未接种的培养皿中无菌落生长无菌落生长未被杂菌污染未被杂菌污染接种的牛肉膏蛋白接种的牛肉膏蛋白胨培养基胨培养基选择培养基筛选作选择培养基筛选作用的确认用的确认牛肉膏培养基上的牛肉膏培养基上的菌落数大于选择培菌落数大于选择培养基上的菌落数养基上的菌落数选择培养基具有筛选择培养基具有筛选作用选作用3统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。样品中微生物的数量。缺点：不能区分死菌与活菌。缺点：不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法间接计数法(活菌计数法活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。多少活菌。操作：操作：a设置重复组，增强实验的说服力及准确性。设置重复组，增强实验的说服力及准确性。b为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300 之间的平板进行计数。之间的平板进行计数。计算公式：每克样品中的菌株数计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M，其中，其中C代表某一稀释度下平代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释代表稀释倍数。注意：统计的菌落数往往比活菌的实际数目小。这是因为当两个或多个细倍数。注意：统计的菌落数往往比活菌的实际数目小。这是因为当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。1研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图图A所示的实验。所示的实验。考查微生物的分离与计数考查微生物的分离与计数图图A 图图B (3)步骤步骤后取样测定石油含量的目的是后取样测定石油含量的目的是_。对步骤对步骤中某瓶中细菌计数的方法有两种，一种方法是中某瓶中细菌计数的方法有两种，一种方法是_，其菌落数可代表活菌数；另一种方法是其菌落数可代表活菌数；另一种方法是_，该方法需要借助一块，该方法需要借助一块特殊的载玻片，其名称为特殊的载玻片，其名称为_。【答案【答案】(1)高压蒸汽灭菌石油是唯一碳源高压蒸汽灭菌石油是唯一碳源(2)平板划线法和稀释涂布平板法甲平板划线法和稀释涂布平板法甲(3)筛选出分解石油能力最好的细菌稀释涂布平板法显微镜直接计数筛选出分解石油能力最好的细菌稀释涂布平板法显微镜直接计数(血细血细胞计数板计数法胞计数板计数法)血细胞计数板血细胞计数板【解析【解析】(1)培养基灭菌用高压蒸汽灭菌，为筛选出能分解石油的细菌，所以培养基灭菌用高压蒸汽灭菌，为筛选出能分解石油的细菌，所以石油是唯一碳源。石油是唯一碳源。(2)接种细菌常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。图接种细菌常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。图B为为平板划线法，如图甲所示。平板划线法，如图甲所示。(3)步骤步骤进一步操作是为筛选出分解石油能力最好的进一步操作是为筛选出分解石油能力最好的细菌，微生物计数可用稀释涂布平板法和血细胞计数板计数法。细菌，微生物计数可用稀释涂布平板法和血细胞计数板计数法。2急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌、病毒通过消化道进入人体导致的。急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌、病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水有关的问题：下列与检验饮用水有关的问题：(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，稀释度的水样用涂布器分别涂布到固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为这种方法称为_。如图所示的四种菌落分布图中，不可能是用。如图所示的四种菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是该方法得到的是_。(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？_。为什么？。为什么？_。(3)如分别取如分别取0.1 mL已稀释已稀释103倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中，则每升原水样中大肠杆菌数为大肠杆菌数为_个。个。【答案【答案】(1)稀释涂布平板法稀释涂布平板法D(2)需要因为需要判断培养基是否被杂菌污染需要因为需要判断培养基是否被杂菌污染(或培养基灭菌是否合格或培养基灭菌是否合格)(3)5.6108