无菌检查方法验证告报告2015

编号：FAL-YZ-003. 1无菌检查方法验证报告编制/日期审核/日期评审会签部门职务评审意见日期批准/日期科技发展序号容页号1目的12围13依据14职责权限15验证方法26验证结论57附录6无菌检查方法验证报告1. 目的通过对培养基无菌性检查、灵敏度检查，对产品的无菌检查方法适用性进行试 验，证明该方法适用于产品无菌检查日常检测。2. 围适用于本公司产品的无菌检查方法的建立和确认。3. 依据中国药典（2015年版）GB/T14233. 2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学实验方法4. 职责权限部门分工职责组长：组织确认或验证工作，批准方案和报告负责编制方案、实施、总结报告及微生物检测负责设备样品提供，配合实施方案的工作负责澈生物检测5. 验证方法实验前的准备a仪器设备设备名称设备编号证书编号设备状态压力蒸汽灭菌器10-11-53京海字第12004119号未检定己检定在有效期激光尘埃粒子计数器Y09-3016H212C-01040未检定己检定在有效期温湿度计JWS-A3B812Z-A0571号未检定己检定在有效期微压差表B10093624B712C-E0083号未检定己检定在有效期微压差表B10090070B712C-E0076号未检定己检定在有效期细菌培养箱SPX-100B-Z京海字第11042604号未检定己检定在有效期霉菌培养箱MLX-150-1京海字第11042605号未检定己检定在有效期确认人：日期：b操作环境微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空 气区域进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区 域、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉 降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度验证。c稀释液和试剂：PH7.0无菌氯化钠-蛋白脓缓冲液d器具无菌注射器仪液器YT-603集菌仪5.1培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及胰胳大豆淼肉汤培养基等应符合培养基 的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试 品的无菌检查同时进行。培养基：硫乙醇酸盐批号20140408 生产厂家:日水生物技术胰胳大豆脓肉汤培养基批号20151023生产厂家：尼赛欣合生物技术无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支(瓶)，培养14天，应无菌 生长。5. 1.2灵敏度检查菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中心 获得的冷冻干燥菌种为第0代)，试验用菌种应采用适宜的菌种保存技术进行 保存，以保证试验菌株的生物学特性。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) (CMCC(B) 26 003)铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) (CMCC(B) 10 104枯草芽胞杆菌(Bac订lus subtilis) (CMCC (B) 63 501)生抱梭菌(Clostridium sporogenes) (CMCC (B) 64 941)白色念珠菌(Candida albicans) (CMCC(F) 98 001)黑曲霉(Aspergillus niger) (CMCC(F) 98 003)5. 1.3菌液制备金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽匏杆菌、生抱梭菌、白色念珠菌、黑 曲霉微生物培养基质控品，使用前注入1. 51稀释液充分溶解后，在漩涡混合器 上震荡混匀，制成10-100 cfu/0. 1ml菌悬液,3-5天用完。5. 1.4培养基接种取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种 小于100 cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生胞梭菌各2支，另1支不接 种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰胳大豆腺肉汤培养基7支， 分别接种小于100 cfu的枯草芽胞杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支 不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。结果判定空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该 培养基的灵敏度检查符合规定。见附件无菌培养基的适用性检查记录5. 2无菌检查方法验证试验当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适 合于本产品的无菌检查。若本产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法 应重新验证。验证时，按“中国药典2015版四部1101无菌检查法”的规定进行 操作。对每一试验菌应逐一进行验证。菌种及菌液制备 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生胞梭菌、枯草芽胞 杆菌、白色念珠菌、黑曲雾同培养基灵敏度检查。5. 2. 3薄膜过滤法5. 2. 3. 1FAL胶无菌检测：使用YT-603集菌仪，滤膜孔经不大于0. 45p moA样品组：取1ml医用胶缓慢滴入100ml氯化钠蛋白淼缓冲液中，使其固化成白 色胶膜充分冲洗振荡1分钟，制成样品组供试液，取一幅二联式集菌培养器， 将样品组供试液平均通过每只集菌培养器过滤，再用100ml氯化钠蛋白脓缓冲 液冲洗，然后通过集菌仪每只集菌培养器加入100ml胰胳大豆脓肉汤培养基或 硫乙醇酸盐培养基，后每只加入10lOOcfu试验菌，做为样品组。B中和剂对照组：取一幅二联式集菌培养器，将100ml氯化钠蛋白脓缓冲液平均 通过每只集菌培养器过滤，然后通过集菌仪每只集菌培养器加入100ml胰胳大 豆脓肉汤培养基、或硫乙醇酸盐培养基，后每只加入10lOOcfu试验菌，做中 和剂对照组。C阳性对照组（菌液组）：取一幅二联式集菌培养器，通过集菌仪每只集菌培养 器加入100ml胰胳大豆脓肉汤培养基、或硫乙醇酸盐培养基，后每只加入10 lOOcfu试验菌，做为阳性对照组。D阴性对照：另取一幅二联式集菌培养器，通过集菌仪一只通过100ml胰胳大豆 月东肉汤培养基，另一只通过100ml硫乙醇酸盐培养基，作为阴性对照。5. 2.3结果判断 样品组与中和剂对照组微生物生长浓度相似，表明中和剂的中 和方式有效消除了样品的抑菌性（即有效性），如对照组与阳性对照的微生物浓 度相似，表明样品预处理，消除样品抑菌性的方法，检测程序和培养条件等均 不影响微生物生长（即无毒性）。阴性对照无菌生长。否则实验无效。6. 验证结论通过培养基无菌性检查、培养基灵敏度检查、无菌检查方法验证，结果 表明，制定的无菌检查方法适用本公司的产品。无菌检查方法验证试验记录序号：样品批号：样品数量:编号：ZJ/JL-8. 2. 4-4-10样品名称：检测日期：试验方法：依据中国药典2015年版四部1101无菌检查法：方法验证试验薄膜过滤法口直接接种法注：“ + 为生长为不生长胰酪大豆淼豆汤培养基：（2025乜 培养5天）检验者：复核者：复核日期:硫乙醇酸盐流体培养基：（3035乜 培养3天）1样品组2中和剂对照组3菌液组现象描述培养 天数123451234512345金黃色 葡葡球 菌铜绿假单抱菌生抱梭 菌阴性对照无菌培养基的适用性检查记录编号：ZJ/JL-8. 2. 4-4-9检验日期：完成日期：培养基：1.硫乙醇酸盐流体培养基 批号：2.胰酪大豆脓豆汤培养基批号：以上均为符合药典规定的干燥培养基。一. 培养基的无菌性检查二. 培养基的灵敏度检查1.菌液制备：(1) 金黄色葡萄球菌新鲜肉汤培养物CMCC(B) 26003第代(2) 枯草芽胞杆菌新鲜肉汤培养物lmlCMCC(B) 63501第代(3) 铜绿假单胞菌新鲜肉汤培养物lmlCMCC(B) 10104第代(4) 生胞梭菌新鲜硫乙醇酸盐培养物CMCC(B) 64941第代(5) 白色念珠菌新鲜改良马丁培养物lmlCMCC(F) 98001第代注入1. lml稀释液充分深解后，在漩涡 罷合器上震荡逼匀.注入L 51稀释液充分深解后， 在漩涡混合雜上震荡混匀.注入L lml稀释液充分深解后，在漩涡混合器上護荡混匀.注入l.lnil稀释液充分深解后.在漩涡混合器上震荡混匀.注入l.lnil稀释液充分深解后， 在漩涡混合器上震荡混匀.至含菌量CFU/0. lml至含菌量CFU/0. lml至含菌量CFU/0. lml至含菌量CFU/0. lml至含菌量CFU/0. lml培养温度：硫乙醇酸盐流体培养基C胰酪大豆脓豆汤培养基 培养基名称管数培养时间(天)备注1234567891011121314硫乙醇酸盐流体培养基12345胰酪大豆腺豆汤培养基12345结论注：“+”为生长为不生长(6) 黑曲霉新鲜鞄子洗脱液lmlCMCC(F) 98003第代注入1.1ml稀释液充分深解后, 在漩涡混合器上震荡混匀.至含菌量CFU/O. lml2 检查结果细菌培养温度r 3天霉菌及酵母菌培养温度9 5天菌种类型培养基装量(ml)培养基管数 (支)硫乙醇酸盐流体培养基(天)空白对照123金黄色葡萄球菌121122铜绿假单胞菌121122生胞梭菌121122菌种类型培养基装量(ml)培养基管数 (支)胰胳大豆腺肉汤培养基(天)空白对照12345枯草芽砲杆菌9192白色念珠菌9192黑曲霉9192结论注：“ + ”为生长为不生长三. 结论: 本品按中国药典2015年版四部1101无菌检查法培养基的适用性检查，结果检验人:复核人:复核日期: