Roche-LightCycler-480-中文操作说明

Roche-LightCycler-480- 中文操作说明LightCycler? 480 中文操作说明罗氏医学仪器公司 / 应用科学部门February 2008LightCycler 480 中文操作 明目录启动机器与软件:.软件设定一开启新实验5:.样品编辑94 .结果分析125 .报告186 .数据转移至其它计算机（数据输出与输入）197 .使用者管理193启动机器与软件*启动机器1 .机器主开关位于机器右后方。2 .机器正面两个警示灯代表机器状态。待警示灯（右）由闪烁橘色灯转 变成稳定橘色灯，警示灯（左）由橘色转变成绿色（约三分半钟）， 表示机器已经启动完成。左警示灯右警示灯机器状态橘*闪烁*橘*闪烁*正在初始化绿橘机器启动完成96/384孔盘还未放入绿橘*闪烁*96/384孔盘正在放入中绿绿机器启动完成96/384孔盘已经放入绿*闪烁*绿*闪烁*实验进行中LightCycler 480中文操作明3 .按压机器正面上唯一的按钮，放入已经封膜完成之96或384孔盘。放置完成后，左右两警示灯都呈现绿色。5启动软件1 .开启计算机，并以正确的使用者名称与密码登入WindowsoUser name: OPERATOR Password: LC4802 .开启LightCycler 480软件，并输入正确的使用者与密码。User name:Password:Log on to:二.软件设定一开启新实验设定新实验1 .软件开启后，会进入主画面。点选“New Experiment”。J Lt?httyder® bottware release 1 .Z.U.U6Z32 .出现实验设定窗口。任何时候需要回主画面的话，点选画面右边的 按钮。LF UtMCvcK pftMse 1.2.0.(M2)11Hl严片AJ'I OoW2n|.；，/ sxMa xSymm AxknmRs MotePlus ID JRvttd>«nLl<s>mltla9 aunr«.阿Pioqtaan Nam.Z&f) . ； f ； ?*- l< -2：iAcquit MonHold pit criiBttl Rafvp Rate (X，W Ac<uhitl(m |pe< *Q Sec 1 ，” fQ 5(，p Sue (X) Step DeUy Kycl 1,CE ； glRsH。昌/ ©设定实验若要套用设定好的实验步骤（Template）,请跳至6.。1 .在实验设定画面上方，先选择适当的Detection Format。选项包含:CombinationExcitationFilterEmission FikerSYBR Green 1SYBR Green 1483533SimplePrabeSi niplePtabe483533Mono ColorHydrolysis ProbeEM483533Multi Color HydrolysisProbeCyan 500450500483533Hex523568Red 610558610Cy 5615670Mono Color HybProbeRed 640483640Multi Color HybProbeFluos483533Red 610A83610Red 640483640Cy 5口83670另外可再点选aCustomize勾选所需的滤片组合。2 .输入反应体积：96 well plate 范围为 10-100 ul,而 384 well plate 范 围为5-20 uLLightCycler 480 中文操作 明3.设定实验步骤(Program)点选各个program即可设定详细温度变化步骤，请根据产品说 明书来设定，利用十与 增加或删除步骤。需要设定的参数包含 Target (C)目标温度，Acquisition Mode或光侦测 模式)，Hold (hh:mm:ss)停留时间。Ramp Rate (C/s)为升降温 速度，范围如下：Ramp Rate (C /s)Heating upCooling downrProgiunri Nam.B WJ.二 Uiq CJZVEI k勺 Liacr设定 program,包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR), Melting curve (optional)与 Cooling。利用 十与 一增力口 或删除步骤。设定循环数目(Cycle)与分析模式。通常Amplification (PCR) program 设定成 Quantification，而 Melting Curve program 设定成Melting Curve。96-well Block1.0 4.4 C/s1.0 2.2 C/s384-well Block1.0 4.8 C/s1.0 2.5 C/s若设定温度低于 50c ,请把 Ramp Rate调整成1.5C/s (96 well)或 2.0C/s (384 well)5 .将实验步骤储存成Template以便下次进行套用。点选左下角，Apply 1Template ; Save As 、Template ,Save As Template即可把此步骤储存起来。6 .若要进行套用时，请直接点选窗口左下角Apply Template"，选择欲套用之实验步骤 即可。7 .设定完成后点选Start Run”开始进行实验8 .跳出档案储存窗口，请输入欲储存之文件名称。实验进行中会进入另一个 Data窗口，窗口下方按键功能如下:EndProgram : 结束此 Program,进入下一个 Program。+ 10Cycles :实时增加循环数目。AbortRun:马上结束此实验，请注意，若按此键，则此次实验的结果将不 储存。3LightCycler 480 中文操作 明三.样品编辑将样品分群1 .点选窗口左边的Subset Edit。，。2 .点选 New”新增新的群组，并将其命名。3 .利用鼠标选取此群组之样品位置，点选窗口右下角Apply"，此时被选取的样品位置会呈现实心的蓝色，如下图。4 .以此方式依序将所有样品群组编辑完毕。样品必须分群才能够独立分析，但是样品是否分群并不影响样品 的Cp值。7编辑样品名称1 .点选窗口左边的Sample Editor”。Pfigr4ri N加M2 .输入每个位置之样品名称（Name）与重复lYindw：al|Naw Fjfppirtffwnrrnal-iag ucks! esollag(Repl. Of)。A*pinGnMypki电Subi«< tWFFilKn CoraWnadarii 岫沔:D齿法裔嗝lui a<EKit#Sim,|n i?岫rs CuamFHAinas-Mi.1Id1占山R_口工"EEWIodo'WR | .-一Swnptea 51.r/1孰L dirtorColor 匚。!HQl QuAnETm LallingLot ianpl. UIColor Comp ID!iiinipl« h.nm«V/induw： NeA/ ExperimentLot ID3.若要更快速输入，可直接在左边的图上点选欲编辑之样品:Selected Filter Combinations 433-533GeneralAbs QuantColor C(-Sewo.Test IDPo$ Sample NameAl Sample 1k2 Repl. of Sairfile 1 A3 Repl. of Sairf le 1若 A1, A2与 A3为三重复，在 A2与 A3 Repl. Of字段上都填上A1即为三重复。在编辑过程中，可利用Ctrl+C复制文字，Ctrl+V 贴上文字。4.根据实验分析模式，编辑 Abs Quant (绝对定量)，Rel Quant (相对 定量)，或 Genotyping 分页，设定 Sample Type绝对定量(Abs Quant):相对定量(Rel Quant):Sample Type 1Unknown /UnknounStandardUnknown：未知浓度样品Standard:已知浓度标准品Cone.Sample Type et Unknown工 5 匚 HJ wTrrcnoTarget：目标基因Referenced :参考基因Calibrator：Control 样品Standard:已知浓度的样品 Unknown：未知浓度样品其它分析模式之分页在此不赘述，请自行参考LightCycler 480Instrument Operator ' s Manua5 .若设定成 Standard之样品请输入浓度。6 .若想要将此样品编辑储存成 Template,可点选窗口左下角SaveAs Template”即可，下次实验时可点选Apply Template”进行套LightCycler 480中文操作明 rr-rrr-nasf=i i ! -rrr-raHB-m,s ,:Applyi Templatej.kbnia J isiJ.BHI * ajjajj. b a rSave AsTemplate11四.结果分析点选左边的AnalysiS',选取分析模式，并选择所需分析之群组，如下图：Iii5lriini«int: Na .Ktwe FnHiuinEnrtDjri.ib.i5H： k*v Cinp-iibe-i iTii-ncQ-khllJAll4ilVM5 I :vwu*L*-亡r»-1ia n»w谶山印|心口 gaiaT：F3Hjd5t遐工沁 HtecAb'uant/F Lt. Pa 3 nu CdIdf CcfiijenjEiT Icr<J.n. &CHiJiELiruaOenDT-srinni R>laLlVC QiJAJfiLlf iCALUQ Trt Cali3.分析模式说明Abs Quant / 2nd Derivative MaxAbs Quant / Fit PointsColor CompensationGene ScanningGenotypingRelative QuantificationTm Calling绝对定量（自动法）绝对定量（手动法）色差校正（多色实验校正用）基因扫描（适用于HighResolution Melting Curve, HRM分析）基因分型（适用于HybProbe之基因分型实验）相对定量Tm分析绝对定定(Absolute Quantification)1 .点选下方的Calculate”即可得到样品之 Cp与标准曲线 LivMErclw?4«0 SvIlwdrE rehdrMf L2.0.D625InElrumerit; Virtual LigklC那版 190 394 / Mol ConneclBd制“mw：|)Em0Clii于nl ”ilh 5TQR Gtrm I (1|Dalal加联 My Contpuler (TM)c4ablB)UK 由 r:Syslem AdininAiialysjel粒¥ Qu事n匚/上 nd Dcr ivttlw naie 工01 5r.口口口胃日9.nd unKnovn?际 Posidve O P hleyallwenforin-atiDnSubsehI Illi rrrrri rrrrrr rrrrrrrrrrrr F Uncertain P SlandairdlSainpesInclude Qi lor Pos Nam0 y Al 3awle 1-Resulls-土CP Comc4ritiraEian Soand.16,131.01E5_|End 口僮EllKiency. 1.3CalculstBALj All f JL1 电Apptjr1O2E5-STH canicFiller ConiH 4.B35330mln(匚mp 归附D 24Loq C<mDEiTTtrfflMnStairidard OtirVe苦30有2015 luaLI 31CJJ写加CUF¥V (hi run)High SeiiisIjMiy各彳固檬品之Cp值典渡度重品平均彳爰之Cp值奥渡度，加自勤算襟津差2 .数值之数据输出：在数值分析表上按鼠标右键，点选Export”即可输出成.txt档案格式。可直接以 Microsoft Excel软件开启。3 .图形输出：在图形上按鼠标右键，点选Export”图形档案格式。即可输出成各种4 .标准曲线储存：点选窗口下方 Std Curve之 Save as externa1 ,输入适合档名后即可储存在 数据库中。LightCycler 480 中文操作 明相对定量(Relative Quantification)1 .在选择相对定量分析后，出现下面窗口：Create new ajialysiColor compensation iequiies rnoie than one filtei combinationReference Sample Location: 若 Reference (Housekeeping gene) 之样品在同一盘上请选择 In-Run”，否则请选择 External”可输 入另一次实验的数据一起分析。建议将Auto Pair打勾让计算机自动将样品配对。2 .进入 Target与 Referenced分页，右下角显示 “Eff = 2表 示将目标基因与参考基因的PCR效率以2.0来计算。Efficiency: 2.03 .若需要校正目标基因与参考基因之PCR效率，则需要输入标准曲线。在Target与Referenced分页之右下角，输入(import)标 准曲线。iiLightCycler 480 中文操作 明Use in run：输入(import)同一盘上之标准曲线。Use external输入(import)之前已储存于数据库中之标准曲线4 .点选 Pairing分页，检查计算机自动配对结果是否正确。其中， 红色表示 Unknown样品，绿色表示 Calibrator样品。若欲外加配 对，则可直接以鼠标点选样品后按Add”即可增加配对。5 .点选Resultq分页，点选Calculate”即可得到计算结果 iRhtLyderMHJ tHFtw-Bre reluve IInBlrunkBnt: Virtual HgMCyder 电圆 394 / Not ConnectfidOatdtiKB； I1y Compuler 仃1肌刁射|Difiiiia H.>hI QuuiilH Lte«r:号网om Admlnii6.数值和图形输出与绝对定量相同。(请参考绝对定量)基因分型 (Genotyping)1 .进入基因分型的窗口中。My Cumpuln-r P"r3i：EAblc|Eysl?m Admin 1_晒怔仃匕打8(|专面岬aru resi*七L,2-<iA625ilrtslium倩M Virluail II ighitCyclBn 4fl口 3B4 / INul CimmuctadDalnb HU:Window:IlDEHifl Grnntypinq (1)User；19Analyses 匚工口，丁特 R3恰 1加MiiiiaciOhSulwl:nr严fte内 eptfi皿11O Pl h03 F4Q F5* P6 F Unhnuwm口 Nugai*RequiteGroupsScllingpcS ann|*le&Reau ItsInclude|Color Pob. NameGroup ) Score I ReaKelt St-andard 匕 litpl, 口工 vi* li Kep 1 , at 、已 1 匚 Sc be Kep 1u of Helt Stat Rep 1 a of Helt St-HE HtlX-日*口匚Hep 1. £ 匚 5cae工勰黑；1 空*|上吧二JDfuuqu 口 工小Hl归161B911 1P9Tsfi-rutt加 55 6Q &5 TO T51 Ennp4riiure 倭。Melliny r«3k«0T诃购ijFitter Cem屈、. Co忻. 砌刷电，.(r Comp v St： ada曲 师 "、J MEWF Show Slll»iii>rc = Auto Group 2 I In* ST I L faj LJ 1<S I 8*1 M I K)1 hl M 13 I B*l L4 InB rIn-run | V)ExternalL” 七 i1 ._2 .窗口右下角可设定分类方式s-ESave as extAuto Group:自动分组In-run :标准品包含在本次实验中 External ：标准品在之前已储存之实验中3.点选 Calculate”即可得到分型结果。 Tm 分析(Tm Calling)1 .进入Tm分析窗口toevinneirl: Ho liifiiwHiMa粉JlirfaiiumFHvvtvHiSOpi,615FiH" Gamb、Co|ara4«34>4D|0F|HjihmI Tin MeHi«4*ppirI'Hn CaLLlhQ lor J)u匚口qr口upinqgPW Fhiii.iI'/Jiiidow:帆赢金福京:，fafliin of p 典藤-DisfkyF 5fcHMIm F Tm F 4ieo附理m第嗡ftasdm同八S-MiphxNetting PtdhlucWe匚Hh Pds HmkIMTm2 M anpJe 1MrK回. 加 K-pl. Cd1造-口回 W Eepl. of Xiplu 1以5T回| M*&£,将y|DE 朋pl. oi三到亚 Z通7D回 附加mEa即加2&5rM回.I'T Sui-ple 3£1.73回| Ifl Jitpl. otJ注.咕回 M现PL at共用同 3&M3kiilm2115Melting CTHHEJbJi± iHl2 .确认波峰数目；Max Peaks 网蝮t J3 .选择检测模式HyfcProbe._Fo.nrriait_ii_iiSYBR Green IFormatSirnplePrahe4 .点选 Calculate即可得到每个样品之 Tm值五.报告(Report)1 .将分析后结果储存后即可点选报告键。数据储存2 .勾选想要呈现的报告内容。3 .点选 Generate”即可产生报告。4 .点选PDF”即可将此报告储存成.pdf档案格式加声LurigM； Nn 鼻口Mg i即川rMiitD科ah邨*My Qmpi阿fTwf b|时力憧m dmin即产沁Hinqs31)期：|111 EaiiplBS jFffrrflirrnFfi,rrrrrnriiTrBFFF7：Gtiicidl DalajltdW回击高1H EjperimtriH PruliKal回S岬屉 mirumgM0 R而*on H察叫-Q Ab? Qunrt卧d DqeM 岫H Strings匚 口一加 Biei刖曲 Am pl rf titan CireiI中 gr arHDr! aii|E 5*tlinqc一中¥也 Ripnrl- 昌昌日网1驰* |匠)MM I H ，句LightCycler1 460 Software deport 一 lCalion 值1 电加啊闭下午（Er iiLbsI Modded 1以e2004M 上午 10:307CtrilQrSyflim AdjTin0*wSyitttm AdminSial Tnw刘厕如下午（EE MEnd Trrw20M/VM=¥M 苜 51Run Sl*gCwnpfetEdSaMre Varaiof*LCS烟 1.2.D.1®MkeMacm Own 首M皿豆如|WipiEtHPathe芷到电解侬Ptale ID2SO8013O-1EKptlHTl0IHlRun NmPragm Nmpre向岛成MCy加e1V0I / i& ModeNixkTargel 的Hold|hh mm 甄Ramp Rate j 憎Sec Tsrzel西Step siza 性,Slop 口口叫伸:Acquhrliofi MadeXkll"UEji势nnnPigriiriEiso-®-六.数据转移至其它计算机（数据输出与输入）*数据输由1.点选(navigator)2.点选所要输出的实验档案，点选成.ixo档案Expert即可将档案输出3.将此ixo档案以光盘或随身碟存到另一计算机数据输入1.分析计算机上开启LightCycler 480软件，登入后点选2.点选 " ,选取所要输入的.ixo档案并开启，即可开始进行实验数据分析3.点选将此实验档案储存至数据库中七.使用者管理1 .点选右方工具键。2 .点选 User and Groups 。3 .点选 New”即可新增使用者，并设定使用者名称、密码与权限4.