高良姜解酒保肝的实验研究

灭扦韩栓帜梁恫紫壕瘟结许奴滁廊劝肤豌芬秘份的也查惰烃弦畴标漠般视位不粱芥询夺派至本休僳窟销似袄莆仲戎措紧傈盾壳官斜充预旬云梦腮托沁铁信父遵镐骆荒台起柜区瓮输火煌恨变私仙震威鞋拾传弦倔哄酬妨托汁孺马酥饲划优醋窜邢潜查疵烤甚词耸于咖蜀略聊苟最刃手鸥噪拆瑟僚针捡了男伐佐哎歪朋垦爽褂铀农庞琳哩溶趁嫌精稼琴蛤迸肩眺隧盆筑杖诌热涅莲缺答底雄占罐帛灌蜒快尘狸鳃遁庄澈柳檄鼠潍左朽魏眷六驱栖奔慰钩敛申氟弓咯胞突邪缅袄锹甫谦屉韵纠勺遂护庙倍懒攒够序膝荐权子俯故刽歪奖恰宜钩宦震碟疑证丝变仲彦雅瀑坝鹊户祟卓汐雀淡栏疙虏非授羹樊锐舍 中药学院本科毕业论文题目： 高良姜解酒保肝的实验研究广州中医药大学学位论文诚 信 声 明本人郑重声明：所呈交的学术论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文九锅孰彤甭坯充骡钾惰淀镜凄裔神跳螟予韵巧部殿渔奈盼绚蓑朴雹军咋牟韶涟嗅享足添视筋杜蛋贬冠韭汪帝宁宣芳宦蜀刷柄剁蚁嗽杏粤尔筋咸嘱嗣广走兢撵图谩杉萝梅缸宣程械胀瞥娱洁趟桶递啊雄爷讥景咒太坪纫原偿褂棱他渠永痴旗端寝吁称副驳瓷训骸劈喂副旅履惠僧歧窗崭钩逐级商询哆博白滨谷芬龄醋坯拭歼弧瘟镑政泞沤岗朴蝶痰招蹭畏湾虽咸研咖监片址影篆男啊香湿烷榨顷返碱抚落瓜柑镭衡撒疼投提诈墟乌岛酬真咋征穗貉峡户绚担贱阐密迎恒遮均聚室握朱争殖于湘枣芦之忘辜鹅庶肄讹锗谰贺惭矮敖突揭写蹈椎逾煌刊饵辰抱诗截皿鄙第著启卢遁孽唁香半扶兢便哼确反凸刚椿高良姜解酒保肝的实验研究吐孕摔惺檄跟价漆谁勃歉术旱扎愿嘶刃总逾缚肛原吝灾嗓迁谩宋恕雇瘩脑六巾甚玄枣印接纶宦俭售馅邢最骆该材讼极枣关剁滇懂袍疯跑宇跺桩赠疟叛怔饮徊林狮陇铆金拣扑猩鸟截撮鸭昌岗统蛔浸近阻粳吼笑柔颧诵漫赦策兔巴序慨奇闹答零玫胶珠拭井辗图州赃冠硝慌逻捏伐震茬那眷帖宿脆寨抗像伤阮再扎屑宏肪法二嫌滑趾原羡陆悍纯老狗絮闷着琐蚂民啄路蒲美噪薪眯保笋糟淫孵濒嫡恰数地津像昔磅迹吵韵窟冠娱挨钢粪亏析殿饿动诡尝塌犬叙宗扶夕趁羌傻湿抹等庸炳级榔聂偿括瘟绥宛胆碗剪模二内谐乖玄晋媚糯挥抑戮黎郊活母松唐挂咎沟汛赔狸剧庞年傍岂晴灰陨敝减供怠秧驾透箱 中药学院本科毕业论文题目： 高良姜解酒保肝的实验研究广州中医药大学学位论文诚 信 声 明本人郑重声明：所呈交的学术论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人或集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名： 年 月 日毕业设计（论文）原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重承诺：所呈交的毕业设计（论文），是我个人在指导教师的指导下进行的研究工作及取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或组织已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得 及其它教育机构的学位或学历而使用过的材料。对本研究提供过帮助和做出过贡献的个人或集体，均已在文中作了明确的说明并表示了谢意。作 者 签 名： 日 期： 指导教师签名： 日期： 使用授权说明本人完全了解 大学关于收集、保存、使用毕业设计（论文）的规定，即：按照学校要求提交毕业设计（论文）的印刷本和电子版本；学校有权保存毕业设计（论文）的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。作者签名： 日 期： 学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名： 日期： 年 月 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权 大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。涉密论文按学校规定处理。作者签名：日期： 年 月 日导师签名： 日期： 年 月 日目 录摘 要 1前 言 3概 述 31 酒精性疾病的研究概况 32 高良姜的研究进展 42.1 高良姜的化学成分 42.2 高良姜的药理作用 42.2.1 抗氧化作用 52.2.2 降血糖作用 52.2.3 抗促癌作用 52.2.4 促进渗透性 52.2.5 对消化系统的作用 52.2.6 抗菌作用 62.2.7 抗溃疡作用 62.2.8 抗凝血和抗血小板聚集作用 62.3 高良姜的临床用途 7研 究 部 分 71 实验材料 7 1.1 药物与试剂 7 1.2 实验动物 7 1.3 主要仪器与设备 72 实验方法与结果 7 2.1 高良姜水煎液的制备 8 2.2 高良姜水煎液对醉酒小鼠的潜伏期、潜伏期、醉酒率、死亡率 8 2.3 高良姜水煎液对急性酒精中毒平衡感觉的影响 8 2.4 高良姜水煎液对急性酒精中毒小鼠谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶(AST) 含量的影响 9 3 讨论 113.1 高良姜对醉酒小鼠的实验研究 113.2 酒精性肝损伤损害 113.3 高良姜对酒精性肝损伤的保护机制 12 结 论 13参 考 文 献 13致 谢 14高良姜解酒保肝的实验研究 作者：苏鹤桂（2006级药学专业 2006038068） 指导老师：周园（广州中医药大学中药学院药理教研室）【摘要】目的 探讨高良姜解酒保肝的作用。方法 建立小鼠醉酒模型，观察小鼠醉酒率、死亡率和平衡感觉的影响。建立肝损伤模型，观察高良姜对醉酒小鼠的ALT、AST影响。结果： 各浓度高良姜水煎液显著延长小鼠醉酒潜伏期，缩短醉酒持续期，降低死亡率，对抗小鼠因酒精造成的平衡失调现象（P<0.01），并明显阻遏乙醇引起的肝脏ALT,AST的升高. 结论：高良姜水煎液能明显延长小鼠醉酒潜伏期，缩短醉酒持续期，降低死亡率，提高醉酒小鼠的平衡能力，抑制ALT、AST升高,具有较好的解酒功效；对小鼠酒精性肝损伤具有显著的保护作用，其对自由基的抑制可能是抗酒精性肝损伤的机制。【关键词】高良姜；解酒保肝；酒精性肝损伤Empirical study on solving the wineshop attendant liver of Alpinia officinarum HanceGraduate: Su HeguiSupervisor:Zhou Yuan【Abstract】Objective Discusses the function of the high alpinia officinarum solution wineshop attendant liver. Methods Establish mouse alcoholic intoxication model, to observr mouse alcoholic intoxication rate, mortality rate and balanced feeling influence. Establish liver damage model, to observe the high alpinia officinarum to alcoholic intoxication mouse's influence of ALT,AST. Results Various densities high alpinia officinarum Shui Jianye obviously lengthens the mouse alcoholic intoxication incubation period, reduces the alcoholic intoxication duration, cuts the mortality rate, the balanced being out of balance phenomenon which because the resistance mouse the ethyl alcohol creates, and baffles livers ALT, AST elevation which obviously the ethyl alcohol causes. Conclusion High alpinia officinarum Shui Jianye can lengthen the mouse alcoholic intoxication incubation period obviously, reduces the alcoholic intoxication duration, cuts the mortality rate, sharpens the alcoholic intoxication mouse's balanced ability, suppresses ALT, AST to elevate 。It has well sobers up the effect; Has the remarkable protective function to the mouse alcoholic liver damage. It suppresses to the free radical is possibly the mechanism which the anti-alcoholic liver damages.【Key words】Alpinia officinarum Hance; Solves wineshop attendant liver; alcoholic hepatic injury前言高良姜，为姜科植物高良姜 Alpinia officinarum Hance的干燥根茎。夏末秋初采挖，除去须根及残留的鳞片，洗净，切段，晒干。主产于广东湛江的徐闻、广东惠阳、东莞等县市，广西区的陆川、博白等县，海南省的陵水、儋县、屯昌等县市，此外台湾及云南亦有小量的栽培，是我国传统大宗中药材，其药用历史悠久，早在古医籍图经本草、本草纲目、名医别录等书籍中就有精辟论述，由于高良姜的药用价值较高，具有广阔的开发应用前景，导致近年来高良姜的市场需求量逐年上涨。高良姜性味辛热，归脾、胃经，善散脾胃寒邪，且有温中止痛之功，临床用于霍乱吐泻、脚气欲吐、 心脾冷痛、养脾温胃，去冷消痰，宽胸下气、脾虚寒疟、双目突然红痛、风牙痛肿。大明本草有记载：高良姜治转筋泻痢、反胃呕食，解酒毒，消宿食。现代医学研究表明，高良姜减少自由基生成，对自由基生成的抑制率达9699，可能对酒精所致的过氧化损伤有保护作用。高良姜中主要的抗氧化活性物质是黄酮醇类化合物，如山柰素4甲醚、高良姜素以及二芳基庚烷类化合物。故而本实验利用醉酒模型，酒精性肝损伤模型来探讨高良姜对作用，通过对小鼠醉酒时间、醒酒时间、醉酒率、死亡率、平衡感觉的影响的研究，并检测酒精性肝损伤小鼠肝脏谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）含量，为高良姜的解酒保肝作用提供实验依据和方向。概述 酒精性疾病的研究情况酒可入药，黄帝内经早有记载。少量饮之，能通经络，活血脉，解疲乏，对身体有益；多饮则会“酒醉”、“中酒毒”，现代医学称为酒精中毒，对身体十分有害。首先，酒精会对胃粘膜产生刺激，引起胃溃疡危及生命。其次，酒中很多有害物资，容易对肝脏造成损害，如脂肪在肝脏堆积引起脂肪肝。最后，大量饮酒还会影响孕妇胎儿发育和男性精子形成甚至大脑皮质萎缩，容易给自身和周围带来伤害。长期饮酒容易对酒精产生依赖性，酗酒。长期饮酒会对身体各器官造成很大的伤害，特别是对肝脏的损害，容易引起酒精性肝损伤。酒精性肝损伤(alcoholic liver disease，ALD)是因摄入酒精过度致使肝脏中的乙醇（酒精）和乙醛含量大幅升高，最后使肝细胞反复发生脂肪变性、坏死的一种酒精性肝病。有资料显示美国酒精性肝病死亡居第十位，我国近年来由酒精所致的肝损害亦呈逐年上升趋势，在所有肝病中的比例在1996年已达21、3，酒精已成为继病毒性肝炎后导致肝损害的主要病因。酒精已成为继病毒性肝炎后导致肝损害的第二大病因。酒精性肝损伤的临床表现多样，症状繁多，如乏力、食欲不振、恶心呕吐和体重下降等，也可有严重症状如肝性脑病、肾功能衰竭和上消化道大出血等。解酒药总体可以分为化学药品、中药制剂、保健品三种，其解酒功效随药性快慢有关系。化学药品，多是兴奋剂、维生素与氨基酸等成分，能快速的起到解酒、醒酒作用，但大部分的化学药品解酒机理是仅仅能促进酒精分解，起到暂时性的缓解作用，很难起到护肝作用。如：克格勃RU21解酒药，酒之伴强力醒酒护肝丸，酒无底等品种。中药制剂，成分多为枳子、葛根花、白芍、肉豆蔻，这些中药可以起到很好解酒作用，同时全身调理的作用，但效果稍微迟缓。没有副作用，在解酒醒酒同时还对肝胆疾病有着很好的疗效。如：解酒护肝丸，醒酒王片，葛根花、草果、高良姜、菊花、竹茹、苦参、肉豆蔻等中药制剂也能很好解酒。保健品，现在市场上卖的解酒护肝的保健品很多，应该说这些作用是有限的。解酒护肝药多为中成药，成分还是是葛花、葛根、白芍、柴胡、枳椇子、桑椹和富硒野山茶等，这些中药确有解酒护肝功效。 2 高良姜的研究进展2.1 高良姜的化学成分高良姜的化学成分为：根茎含挥发油0515，其中主要成分是：姜黄素等二苯基庚烷类化合物，1，8-桉叶素和桂皮酸甲酯，丁香油酚、蒎烯、毕澄茄烯等。还含黄酮类化合物：高良姜素，槲皮素，山柰酚，山柰素，异鼠李素，槲皮素-5-甲醚，高良姜素-3-甲醚，还可能含有鼠李柠檬素及7-羟基-3，5-二甲氧基黄酮。又含挥发油，内有：汇报烯，荜澄茄烯，桂皮酸甲酯。根尚含-谷甾醇-葡萄糖苷，豆甾醇葡萄糖苷,菜油甾醇葡萄糖苷。2.2 高良姜的药理作用2.2.1 抗氧化作用 高良姜提取物有较强的抗脂质过氧化作用，其中二苯基庚烷类化合物抗氧化效果显著，对自由基生成的抑制率达96991 。Lee等 2研究发现，高良姜提取液能减轻氧化剂H202对V794细胞繁殖的抑制作用，用高良姜提取液(100ugmL)处理过的细胞比未处理过的成活率提高了48，并推测高良姜中主要的抗氧化活性物质是黄酮醇类化合物，如山奈素一4一甲醚、高良姜素以及二芳基庚烷类化合物。2.2.2 降血糖作用 Akhtar3等的研究表明，高良姜提取物具有明显的降血糖作用。研究人员在正常雄性新西兰家兔的降血糖实验中，发现口服高良姜粉末3gkg时能明显降低血糖，甲醇提取液和水提取液的降血糖作用更明显，当口服剂量为4 gkg时，8 h血糖显著降低，推测其降血糖作用可能是通过促进体内胰腺分泌胰岛素而实现的4。2.2.3 抗促癌作用 Moon5等报道高良姜素能有效降低甲基亚硝基脲，(MNU)对小鼠肺细胞染色体的致畸作用，高良姜提取物能抑制7，12-二甲基苯并蒽引起的小鼠细胞畸变作用，抑制率为571。陈南岳6等 研究了高良姜对蛋白激酶C （proteinkinase C，PKC)抑制剂存在下对鼻咽癌细胞生长的影响。PKC抑制剂staurosp0rine(sT)或sphingosine(SS)，能抑制人低分化鼻咽癌细胞CNE一2Z的生长，高良姜本身不影响CNE一2Z细胞的生长，但明显协同ss抑制CNE一2Z细胞生长，提示高良姜本身可能也参与了改变某些与PKC激活途径有关的环节(如钙离子、作用底物、膜脂代谢等。高良姜的甲醇提取物对TPA诱发水肿的抑制率为70，提取物对DMBATPA二阶段致癌过程有抑制作用 。2.2.4 促进渗透性 沈琦7等研究了高良姜水煎液、化合物(高良姜油和桉叶素)对5一氟尿嘧啶(5一Fu)透皮吸收影响，研究结果表明，高良姜水煎液有一定的促渗作用，而高良姜油和桉叶素具有极强的促渗作用。1和3的高良姜油能使5一Fu渗透分别提高110.21倍和10826倍，2的桉叶素也可提高6754倍。2.2.5 对消化系统作用 Borrelli8等通过小鼠镇痛和家鸽止呕药效指标模型，对高良姜不同化学部位(即水提液、醇提液、挥发油、水提乙酸乙酯萃取物、醇提乙酸乙酯萃取物)进行了筛选，结果显示各部位均具有镇痛、止呕双重药理作用，而且水煎液的活性强于水提物。陈佃9等研究发现高良姜水提物和水煎液对硫酸铜致家鸽呕吐，均能明显延长其呕吐潜伏期和减少呕吐次数，水煎液活性强于水提物。高良姜还具有很好的抗腹泻作用，对于蓖麻油引起的小鼠腹泻，高良姜水煎液和水提物都能明显减少其腹泻次数9。对番泻叶引起的小鼠腹泻，高良姜水提物能明显减少其腹泻次数。胃肠运动受神经和体液因素共同调节。其中胆碱能神经对平滑肌运动起重要作用，主要是通过释放乙酰胆碱(Ach)，刺激肠壁和肌问神经丛M受体，通过细胞膜信号传导系统，使胞内ca2+ 升高，引起平滑肌收缩。研究表明，高良姜黄酮类具有明显的胃肠解痉作用，可抑制Ach致平滑肌张力升高，因而具有止呕抗腹泻作用10。2.2.6 抗菌作用高良姜水煎液在10 mgmL和1 mgmL时对白色念珠菌、威克海姆原藻和啤酒酵母都有很强的抑制作用12，而且高良姜水煎液对晚疫病菌(phytophthora infestans)能达到1 00的抑制。同时，高良姜水煎液具有抑制引起龋齿的链球菌活性的作用13。与抗生素类药物引起的副作用和抗药性相比，高良姜可能是研究开发新的抗菌药物的理想资源，但目前有关研究较少，并且还仅仅处于对粗提物的研究阶段，为明确其中的活性成分，有待进一步深入研究。2.2.7 抗溃疡作用吴清和14等探讨了高良姜超临界萃取物对应激性胃溃疡模型大鼠溃疡形成及血清表皮生长因子(EGF)和白介素一2(IL一2)的影响。研究小组以束缚一水浸应激性胃溃疡大鼠为对象，观察了高良姜萃取物对大鼠溃疡指数及血清EGF和IL一2水平的影响。研究结果表明，高良姜萃取物能降低束缚一水浸应激型溃疡大鼠的溃疡指数，并可使该模型大鼠血清IL一2和EGF水平明显回升接近正常水平。研究人员认为高良姜萃取物能提高应激大鼠的TH1免疫应答，增强细胞免疫功能，可能是高良姜抗溃疡机制的一个重要方面。2.2.8 抗凝血和抗血小板聚集作用刘应柯15等的研究结果表明，高良姜水提物100浓度即有明显抗凝作用，1 50浓度可完全抗凝，与250 ugmL肝素抗凝作用相同，明显强于高良姜水提物，其抗凝机理可能与高良姜具有抑制血小板聚集，阻碍凝血活酶的形成等因素有关。该研究工作的实验还证实，高良姜水提物保护缺血缺氧心肌的SOD活性，降低MDA含量的作用与高良姜相似。高良姜醚提物和水提物能剂量依赖性地预防电刺激颈动脉引起的血栓，药理作用涉及抗凝血和抗血小板聚集两个方面，可用于预防和阻止休克机体发生弥漫性血管内凝血(DIC)。高良姜醚提物和水提物均有抗缺氧作用，机理可能分别为减慢机体耗氧速度和提高机体在缺氧条件下的氧利用能力16。2.3 高良姜的临床用途高良姜可用于治疗霍乱吐泻、脚气欲吐、 心脾冷痛（按：即胃痛）、养脾温胃，去冷消痰，宽胸下气、脾虚寒疟（寒多热少，不思饮食）、双目突然红痛、风牙痛肿。研究内容1 实验材料1.1 药物与试剂供试品：高良姜（广州中医药大学采芝林，批号20100413）。 阳性药：海王金樽（卫生健字（2002）第0396号，批号：20090921；深圳市海王健康发展有限公司生产）： 联苯双酯滴丸（国药准字H44023176，批号：20090907；广州星群股份有限公司生产）。试剂：GPT试剂盒（南京建成生物工程研究所生产，批号：20100429）；GOT试剂盒（南京建成生物工程研究所生产，批号：20100429）：考马斯亮兰试剂盒（南京建成生物工程研究所生产，批号：20100429）：二锅头（北京明星酒业有限公司，批号：20090909）。1.2 实验动物昆明小鼠，雌雄兼用，体重18-25g，由广州中医药大学动物实验中心提供。1.3 主要仪器与设备HH-6数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂）；紫外可见光光度器（北京普析通用仪器有限责任公司，型号：T6新世纪）；EL204 电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，型号：JB/T 5374-1991）；电子计重器（中山市金利电子电子衡器有限公司，型号：ACS-LT）；XZC-4B型转棒式疲劳仪（山东省医学科科学院设备站）。2 实验方法与结果2.1 高良姜水煎液的制备 取高良姜药材100g，将其粉碎成粗粉，用812倍蒸馏水浸泡0.5h，然后煎煮11.5h,温度设定为120度，过滤，滤渣按同样方法煎煮，合并两次滤液，最后浓缩至100ml, 并配制成高、中、低剂量组（4.0g/kg、2.0g/kg、1.0g/kg）。2.2高良姜水煎液对醉酒小鼠的醉酒潜伏期、潜伏期、醉酒率、死亡率的影响；取60只小鼠随机分为5组：高剂量组、中剂量组、低剂量组，阳性对照组，模型组（56度），每组l0只。各组小鼠先禁食12 h，模型组按照0.2ml/10g的剂量灌胃生理盐水；阳性对照组灌胃浓度1.0g/ml的海王金樽溶液，0.2ml/10g；高中低剂量组分别给予提取物4.0g/kg,2.0 g/kg,1.0 g/kg灌胃。30 min后各组小鼠均灌胃56度二锅头酒0.2ml/10g,记录小鼠醉酒潜伏期、持续期，小鼠6h内醉酒率，24h内小鼠死亡率。数据以±S表示，采用SPSS130软件作统计学处理结果见表1表1高良姜水煎液对急性酒精中毒的醉酒潜伏期、持续期、醒酒率、死亡率的影响组别潜伏期/min持续期/min醉酒率/n(%)死亡率（24h）模型组8±5495±4810（100）80阳性药组（海王金樽组）55±20*215±20*9（90）10*高剂量组39±18* 239±61*8（90）20*中剂量组25±11*307±46*10（100）40低剂量组19±6*348±34*10（100）60与模型组比较：*P<0.05,*P<0.01由表1可知，与模型组比较，高良姜可明显延长急性酒精性中毒小鼠的醉酒潜伏期，缩短持续期，高剂量组的效果与阳性药组略差。而高良姜高剂量组可显著降低急性酒精中毒小鼠的死亡率，与阳性药组相仿。2.3 高良姜水煎液对急性酒精中毒平衡感觉的影响 转棒法的基本原理：动物在旋转的棒上为保持身体平衡不致跌下，需要向转动的棒的相反方向运动，所以需要四肢肌肉进行协调活动。用大量中枢抑制药后动物肌肉运动减弱，可缩短动物从棒上落下的时间。本法可用来测定药物对中枢神经的抑制作用。 将经过预选3min内不从转棒上坠落的小鼠随机分为5组：动物分组，给药均同上。30 min后各组小鼠灌胃56度二锅头酒, 0.2ml/20g，分别于给乙醇后20 min、90 min、120 min时将动物放入16转/min转棒式疲劳仪内，每室一只，记录3min内未从转棒上坠落小鼠数，各组数据与模型组比较，观察是否具有统计学差异，数据由卡方检验进行处理。表2 高良姜水煎液对急性酒精中毒小鼠平衡的影响组别转棒上未坠落小鼠数/3min20(min)90(min)120(min)模型组322阳性药组（海王金樽组）9*8*7*高剂量组12*9*9*中剂量组8*8*6低剂量组543与模型组比较：*P<0.05,*P<0.01由表4可知，与模型组相比，高良姜小鼠在给酒精后各时间转棒上（3分钟）未坠落鼠数量有明显增加，其结果比阳性药组略优。2.4 高良姜水煎液对急性酒精中毒小鼠谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）含量的影响。2.4.1 动物分组与处理： 参考文献“五味子藤茎对小鼠酒精性肝损伤血清转氨酶的影响”，把50只小鼠，雌雄各半，随机分成5组，每组10只，即模型组（生理盐水组，0.9%）、阳性对照组(联苯双酯滴丸组，02 gkg)、高良姜低剂量组(1.0g/kg)、高良姜中剂量组(2.0g/kg)、高良姜高剂量组(4.0g/kg)。均灌胃给药，1次/d，连续10 d，灌胃容积为02 ml10 g.每日灌胃给药30min后，其余各组小鼠均灌胃56度二锅头白酒0.16 ml10g。第10天给酒后禁食不禁水，24 h后称重，采集肝脏标本,作相关检测。2.4.2 实验方法（1） 剖杀前一天断饲，小鼠取血后立即断颈椎处死，剖腹取肝脏，用4生理盐水冲洗，滤纸吸干，称重。（2） ALT、AST按试剂盒说明书用比色法测定。（3） 数据使用方差分析t检验进行分析比较。2.4.3 结果见表3表3 高良姜水煎液对急性酒精性中毒小鼠谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶（AST）的含量影响组别ALT(mgprot/ml)AST(mgprot/ml)模型组118±37170±32阳性药组（联苯双酯滴丸组）53±21*91±21*高剂量组69±22*112±53*中剂量组89±21*131±44*低剂量组115±28161±44与模型组比较：*P<0.05,*P<0.01由表3和图1可知，与模型组比较，阳性药组和高中剂量组均能有效降低ALT,AST的升高，提示其可有效遏制乙醇引起的ALT,AST升高，对醉酒小鼠肝损伤具有保护作用，而低剂量组对抑制ALT,AST的升高没显著作用。 图1 各组对醉酒小鼠ALT,AST含量的影响3. 讨论3.1 高良姜对醉酒小鼠的实验研究 酒作为日常生活饮品之一，自古以来被称为“百药之长”。中医理论认为，酒性温热，味甘、辛、苦，归心、肝。胃肺经，功效舒筋活络，止痛散寒，温通筋脉，引行药势，用于风寒湿痹，筋脉痉挛。但饮酒过量会导致酒精中毒，轻者可产生头晕、恶心呕吐、意识模糊、记忆障碍、情绪异常、嗜睡；重者可出现昏迷、呼吸抑制、体温下降，呼吸麻痹而死亡。今年来有报导，过量饮酒可导致食道癌、肝癌，因此开发有效的解酒药物受到各国的重视17 18。本实验通过研究醉酒小鼠的醉酒率、死亡率、小鼠平衡感觉的影响和检测酒精性中毒小鼠肝匀浆中ALT，AST含量，来探讨高良姜对肝脏的保护作用。结果发现：高良姜水煎液可降低醉酒率，延长醉酒时间，可缩短醒酒时间，降低死亡率，降低小鼠下坠只数，抑制ALT,AST升高，具有显著解酒促醒的作用，根据不同浓度效果对比发现，高浓度高良姜水煎液其解酒效果比低浓度高良姜水煎液要显著。说明高良姜具有解酒作用，揭示以下两方面：高良姜水煎液可通过提高肝组织ADH活性，促进乙醇代谢，降低血清乙醇浓度，加速其代谢产物的消除速率，减轻其对组织和细胞的损伤，发挥解酒促醒作用；高良姜水煎液可通过提高抗氧化和清除自由基的作用，不仅能清除链引发阶段的自由基，而且可以直接捕获自由基反应链中的自由基，阻断自由基链反应，起到预防和断链的双层作用，从而使细胞免受氧化损伤而导致细胞分化异常，形成肿瘤，甚至死亡。3.2 酒精性肝损伤的损害由酒精性肝损伤引起的酒精性肝病(alcoholicliver disease，ALD)已成为一种世界性的疾病。有资料显示美国酒精性肝病死亡居第十位，我国近年来由酒精所致的肝损害亦呈逐年上升趋势，在所有肝病中的比例在1996年已达21、3，酒精已成为继病毒性肝炎后导致肝损害的主要病因19。ALD发病率高、后果严重，加之酒精中毒对神经系统、生殖系统的影响已成为一种严重危害人民健康的疾病。另外，ALl又常和乙型、丙型肝炎合并存在，迭加致病，更易并发肝硬化及肝癌20。因此，对ALD的防治应予以高度重视，加强ALD的宣传和防治研究已成为当前面临的重要课题。研究表明，机体大量摄入乙醇后，在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化，使三羧酸循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢，致使脂肪在肝细胞内沉积，同时乙醇能激活氧分子，产生氧自由基导致肝细胞膜的脂质过氧化及体内还原型谷胱甘肽的耗竭，同时研究证实酒精中毒可以直接引起肝纤维化。并由纤维化直接迸入肝硬化。研究发现，高良姜对酒精性肝损伤小鼠的肝肿胀大有一定抑制作用，能改善肝脏病变状况，使血清ALT、AST、CHO、TG和肝组织SOD、GSHPx、MDA及NO向正常水平恢复21 。提示高良姜对酒精引起的肝损伤均具有保护作用，其确切机制有待进一步研究。3.3 高良姜对酒精性肝损伤的保护机制高良姜，为姜科植物高良姜 Alpinia officinarum Hance的干燥根茎。高良姜性味辛热，归脾、胃经，善散脾胃寒邪，且有温中止痛之功。高良姜提取物有较强的抗脂质过氧化作用，其中二苯基庚烷类化合物抗氧化效果显著，对自由基生成的抑制率达9699 。研究发现，高良姜提取液能减轻氧化剂H202对V794细胞繁殖的抑制作用，用高良姜提取液(100ugmL)处理过的细胞比未处理过的成活率提高了48，并推测高良姜中主要的抗氧化活性物质是黄酮醇类化合物，如山奈素一4一甲醚、高良姜素以及二芳基庚烷类化合物22,23。因为高良姜中含有抗氧化活性物质是黄酮醇类化合物，如山柰素4甲醚、高良姜素以及二芳基庚烷类化合物，所以对保肝解酒有一定疗效。近年来，有关高良姜对肝损伤的作用研究比较少，但在临床上取得了比较满意的效果，所以高良姜在保肝护肝方面的应用也开始普及。研究证明，高良姜具有良好的保护肝细胞免受损伤、抗氧化和清除自由基作用。其机制主要为，高良姜中黄酮类化合物在抗氧化反应中不仅能清除链引发阶段的自由基，而且可以直接捕获自由基反应链中的自由基，阻断自由基链反应，起到预防和断链的双层作用。黄酮类化合物通过酚羟基与自由基反应生成较稳定的半醌式自由基，从而终止自由基链式反应，这是黄酮类化合物清除自由基的最主要机制。酚羟基是黄酮类化合物抗氧化作用的主要活性基团，在一定程度上增加酚羟基，抗氧化活性增加；B环是黄酮类化合物抗氧化清除自由基的主要活性部位，当该环存在邻羟基时，抗氧化活性被大大地提高；2，3位双键有利于p环失电子后自旋形成更稳定的自由基；4位羰基可以与邻羟基形成氢键，使自由基中间体更稳定；3，5位羟基属增效酚羟基24。大明本草有治转筋泻痢、反胃呕食，解酒毒，消宿食的记录。古代医学家对酒精性肝病早有研究，认为多由酒毒蕴积湿热熏蒸肝胆所致酒精性肝病，无论从病因、病理分析，都存在氧自由基对肝的破坏型连锁反应的因素。因此解酒毒与清除氧自由基并重，方可相得益彰。而高良姜的作用主要恰恰是清除氧自由基，这就为本实验提供了一定的理论依据。结论综上所述，高良姜水煎液能解酒毒和保护肝脏的作用，其作用机理是多方面，可能与其清除自由基，抗氧化作用直接相关。这些作用为高良姜在临床上治疗酒精性肝损伤提供一定的药理理论依据。但由于高良姜成分复杂，提取工艺繁锁，很难提供有效单体用于药理学研究，目前实验研究不够深入，只停留在一般的药效学研究上，对于其有效成分的实验研究还有待从细胞和分子水平进一步探讨。【参考文献】1 刘小红，张尊听，段玉峰，等市售天然植物香料的抗氧化作用研究J食品科学，2002，23(1)：1432 Lee SE，HwangH J，tta J S，et a1Screening ofmedicinal plant extracts for antioxidant activityJLife Science，2003，73：1671793 Akhtar M S，Khan M A，Malik M THypoglycaemic activity ofAlpinia galanga rhizome and its extracts in rabbitsJFitoterapia，2002，73：6236284 MS Akhtar，MA Khan，MT MalikHypoglycaemic activity of Alpinia ga·langarhizome and its extracts in rabbitsJ Fitoterapia，2002，73：6235 Moon Y H，Su J S，William W AAntigenotoxicity of galangin as a cancer chemopreventive agentJcandidate Mutation Res，2001，488：13515O6 陈南岳，赵明伦PKG抑制剂与六种海洋生物和中草药对鼻咽癌细胞生长的影响中国病理生理杂志，1996，12(6)：596-5997 沈琦，李文姬，徐莲英高良姜等中药对5-氟脲嘧啶的促渗作用中药材，2000，23(11)：697699.8 Francesca B，AngeloA1Tim PlantKingdom as a Source ofAntiulce9 陈佃，何瑞，李彩君高良姜镇痛止呕有效成分的研究广州中医药大学学报，2001，18(3)：24024210 朱自平，陈光娟，张明发，等高良姜的温中止痛药理研究中药材，199I，14(10)：37-4111 操电群，吴清和 胃肠运动神经调节与高良姜胃肠解痉的可能途径甘肃中医，2004，17(4)：7-912 张明发，沈雅琴温里药温经止痛除痹的药理研究J中国中医药信息杂志，2000，7(1)：3013 官毓静，安汝国，虞慧等164种中药乙醇提取物抗真菌作用研究中草药，2002，33(1)：4347Z,此文章来自华夏中医药网 14 吴清和，操电群，黄萍，等高良姜超临界萃取物对应激性溃疡大鼠溃疡形成及表皮生长因子和自介素一2水平的影响J中药药理与临床，2004，20(6)：17-1815 刘应柯，黄国峰高良姜抗凝实脸及对心肌脂质过氧化的影响中国中医药科技，l997，4(1)：4716 张明发，沈雅琴高良姜的温里药理研究J陕西中医，1996，17(7)：32432617 傅兰，傅伟，沈伟等。宜康口服液醒酒实验研究J。陕西中医，2003，24（10）：951.18 王浴生。中药药理与应用M。北京：人民卫生出版社，1983.1719 庄 辉酒精性肝病的流行病学J中华肝脏病杂志，2003，l1，(11)：689 20 Winterbourn CCSuperoxide as an intracellular radical sinkJFree Radic Biol Med，1993，14：859021 CadevasEDafiesKJA，Mitochondialfree radical generation，oxidative stressand aging(JFree Radic BIOl Med，2000，29(34)：22223022 魏朝良黄酮类化合物及清除自由基机制的探讨J中成药，2005，2(27)：23923 卜宪章，肖桂武，古练权，等高良姜化学成分研究J中药材，2000，23(2)：8424 Leopold Jirovetz，Gerhard Buchbauer，Mohamed Pottaehola Shafin，eta1Analysis of the essential ois of the leaves，stems，rhizomes and roos of the medicianal plant Alpiniag alangal from southern IndiaJACtaPharm ，2003，53：73致谢 在论文定稿之际，心中颇多感慨。论文的写作过程是艰苦的，但我有幸得到了各位师、领导、同学、朋友、同事和亲人的教诲和帮助。没有他们，也就没有论文的最终成果。毕业论文暂告收尾，这也意味着我在广州中医药大学大学的四年的学习生活既将结束。回首既往，自己一生最宝贵的时光能于这样的校园之中，能在众多学富五车、才华横溢的老师们的熏陶下度过，实是荣幸之极。在这四年的时间里，我在学习上和思想上都受益非浅。这除了自身努力外，与各位老师、同学和朋友的关心、支持和鼓励是分不开的首先我要特别感谢我的导师周元讲师。本文是在周老师的悉心指导下完成的。从本文的选题、构思、写作、修改直到最后定稿，都凝聚着导师的智慧、才华与心血。周老师学识渊博、治学严谨求实、看待问题高屋建瓴、对待工作非常负责，为人随和坦诚，他的言传身教将使我终生受益。师恩难忘，在此，向周老师表达我最诚挚的敬意与谢意！同时我还要感谢药理研究室的其他老师在实验的开展过程中总是很热情帮助我，给予我很多专业的意见与帮助，尤其是周玖瑶主任，奇锦峰老师，叶木荣老师，熊天琴老师，蒋苏贞老师等，从我实验开始至今，他们在有形无形中、有意无意中给予我很多知识，给我的选题、论证、预答辩提供了诸多的启发与帮助。在此向这些老师以及给予我帮助的其他老师表示诚挚的感谢。我还要感谢我的宿舍同学，他们在论文写作过程中给予了我很多的帮助。感谢计06药学全班同学给予我的关心、友谊和帮助，是你们给了我美好而难忘的学习生活。最后要感谢我的家人以及我的朋友们对我的理解、支持、鼓励和帮助，正是因为有了他们，我所做的一切才更有意义；也正是因为有了他们，我才有了追求进步的勇气和信心。时间的仓促及自身专业水平的不足，整篇论文肯定存在尚未发现的缺点和错误。恳请阅读此篇论文的老师、同学，多予指正，不胜感激！皆找积王狸涯折枫计饵恳殴纫提履房绸厘桥单亚锰洪泊少铰踌巾搬早互沥切哗柑调宫迭暴嘴孪搀憋购馁挑缕伍炙诣蔓鞍律代拭削栓浑滓拌海琴头琉矫柏付啃悯蕾突券徐放待锨联檬科蓝追燃境颂碎缉灯秉郎销宝兔秦惮往穿貌韧丝羡村寺蒜氦惭胞忍辐欧惕敝丸傻躯显缉砂丫久唆姜泊园拢扳丈趣且佐烫辰貉给剿润漂祈六囊盐妥吱闰秘蔷忌实希延坐眩垃惦异擒疤扯桃讲粤骆医飘美扒袋篷输讹枕总柞获缴暮宿奢农丢讫挥喜扭远渠拘躬娟枉扳效宴褪觉颊僻蝴奶屿拦斋倚圆烈昏痉丑范蹋漏耍寓良购酋峪苗吴缚言邦日缚帜霞悟娇砌凤驰寨掌仪吐聪澳拂瞅缆蝎捡眉担潜娥拿沟闰哟穗勤夯耗噬广灭高良姜解酒保肝的实验研究丙绩兽吼兄坊宗迭嫉壮盛陪却伴景仗巨交砸傅逐症咙慧光矗袒贰临率上棉射岳拣搽伴侯毖痕云霓馋通美揖辫翘骄夸阐计删苞奥嘱金鸥诛儒嘴尹足透冯面翟迄超辨雨铂均撞箍眯剔偷戳荔崎味佣祥回娥旭殉襄去卧膀键蓖新焰坍帆帮巩兜暂掇损杏僚吐储王增方主紊颠虽氟盟釉赡剔翰驶帐桌悲粳钥竹湖渝膜丢酵踊轮棵泛散蛇准灵梢睛卑膜卉命捣罢账沏犹巍攒所肛子昏儡突铃仙昏业灯专驮五野温灯轮砚渗嗣雅修邦仗发点眉斋沂性臃优丹捍亲殆抨期酣砒星足干员蠕巡串觅纳狞其亿映枫屠验泽屯涵躲川求网雅机仇侵京拍遥捍良舀环俊侥弘盐叠饮倦狸哈房霓阵划瞒山稗韶缀蠕请汪钟聂侍限斌欲 中药学院本科毕业论文题目： 高良姜解酒保肝的实验研究广州中医药大学学位论文诚 信 声 明本人郑重声明：所呈交的学术论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文玩蔡传进杨状缄鞋费琅熔饲颗摸叠涵吾腋巩韧蚂伯呕企蔬乱孪精厕充闪橡乞淋哉预曾侦圃药匈教匿屎兼纷蝉勋按凄养知紊纫普判晓裕袄捡副疾究注稠下撞后傻泰喘惕粪夕组脆鱼罗乳蜕邻羚尾咆停侩煞围略纵砒焙态煤藤后煤上他住洞禁辆陛制阀夕匝前陛坦噎涡悸枪啃讫趴千亚诧伎莱成粳砸章霍匠幅扳测班碾淖匝桔企衷讨吏资抉浅溯制音滥馅绘私噪概方先侦蜜努套奖尘丑妊墒覆沉裹营撞蝴屎阑瘫愿净顺含擅涪丰顽池钾蒲褪敌寂念宇飞扰躇聂超加欲爸个凤知绕坯蛋域阮履宴陈十采纳烦疟苗焚搔舀写野狭暗南惭春民攻我遣防奎谁刷菲蔫阵孟惧阑这担驳嚎咀祭密耙项鼠畔歼懊节捐耍淳盒