不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响可编辑

不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响 中山大学硕士学位论文不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响姓名:陈红雷申请学位级别:硕士专业:食品安全生物学指导教师:李广宏20100530不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响专业:食品安全生物学研究生:陈红雷导师:李广宏副教授摘要本论文基于国内外研究现状,从营养成分、营养价值和对小鼠免疫力的影响三个方面,研究了种方法干燥的蝇蛆蛋白粉的营养价值及免疫功效,以期为今后蝇蛆蛋白的广泛应用及深度加工提供理论和技术支持。通过研究主要取得如下结论:.不同方法干燥的蝇蛆粉营养成分分析蝇蛆经过普通干燥、微波干燥和冷冻干燥后,营养组分不同。结果表明,冷冻干燥的蝇蛆粉中氨基酸总量最高,其次为微波干燥的蝇蛆粉,普通干燥的蝇蛆粉氨基酸含量最低。造成以上结果的原因主要是蝇蛆在普通干燥过程中丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸易被破坏,从而导致氨基酸总含量下降;在脂肪酸方面,微波干燥易造成蝇蛆粉中的脂肪酸降解。通过分析,作者认为,蝇蛆蛋白的氨基酸组成较合理,其第一限制氨基酸为蛋氨酸。.不同方法干燥的蝇蛆蛋白粉对大白鼠生长及消化吸收的影响营养评价的结果表明,用冷冻干燥、普通干燥和微波干燥的蝇蛆粉饲养大白鼠,其表观消化率分别为.%、.%和%,均显著低于酪蛋白。在生物价方面,用冷冻干燥、普通干燥和微波干燥的蝇蛆粉饲喂大白鼠,其生物价分别为.%、.%和.%,均高于用酪蛋白饲养的大白鼠,其中冷冻干燥的蝇蛆粉和普通干燥蝇蛆粉的生物价与酪蛋白相比,差异显著。在蛋白利用率和蛋白效价方面,冷冻干燥的蝇蛆粉,其蛋白利用率和蛋白效价均最高,分别为.%和.%,其次为酪蛋白和普通干燥的蝇蛆粉,微波干燥的蝇蛆粉最低。在大白鼠生长方面,饲喂冷冻干燥蝇蛆粉的大白鼠生长最快,其次是酪蛋白,再次是微波干燥的蝇蛆粉,而普通干燥的蝇蛆粉生长最慢。.不同方法干燥的蝇蛆粉对小鼠免疫力的影响一定剂量的蝇蛆粉可以提高免疫力低下小鼠的非特异性免疫和细胞免疫能力。经测定,以./一./的蝇蛆量饲养小鼠,其免疫效果最好,但不同方法干燥的蝇蛆蛋白粉对小鼠非特异性免疫和细胞免疫的影响程度不同。在三种干燥方法中,冷冻干燥的蝇蛆粉对提高小鼠非特异性免疫和细胞免疫的效果最佳,就普通干燥和微波干燥的蝇蛆粉而言,普通干燥的蝇蛆粉对提高小鼠非特异性免疫的效果要好于微波干燥的蝇蛆粉,但微波干燥的蝇蛆粉却在提高细胞免疫方面要显著好于普通干燥的蝇蛆粉。关键词:蝇蛆;干燥方法;营养价值;免疫;生长 :., . , . . , .,?. ,?, , . ,? /. , .,? . .%、.%.%,. .%、.% .%, . .? ? , .?.? ?./. ., ? .,. ,? .; ; ;:原创性及学位论文使用受权声明原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名.尼红留日期:动年/月日学位论文使用授权声明本人完全了解中山大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版,有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆、院系资料室被查阅,有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索,可以采用复印、缩印或其他方法保存学位论文。?一虢危红留导师躲痞了秀日期:扫/口年月/日中山大学硕士学位论文不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响第章前言.昆虫营养及研究现状昆虫是地球上最大的生物类群,其规模大、分布广,昆虫学家估计现存种类实际在万万种之间;种类最多的目为鞘翅目、鳞翅目、膜翅和双翅目。因为昆虫具有数量大、繁殖速度快、蛋白质含量高、易于饲养等特点,被认为是目前最具开发潜力的动物蛋白源,有巨大的开发和应用潜力【,】。大量研究和营养分析表明,大部分昆虫体内含有丰富的蛋白质、不饱和脂肪酸、微量元素,且具有低胆固醇和低纤维等特点;更重要的是昆虫蛋白质中氨基酸组成比例接近联合国粮食与农业组织简称粮农组织,定的蛋白质必需氨基酸组成模式,易于被机体吸收利用,所以在蛋白资源日渐紧缺的今天,加速研究和开发营养丰富、品质优良的昆虫资源,将具有重要的现实意义。.。黄粉虫黄粉虫的体内含有丰富的蛋白质、氨基酸、脂肪、微量元素和维生素等。研究表明,黄粉虫幼虫、蛹和成虫的蛋白质可达%以上,其中必需氨基酸占总氨基酸的比例达到%以上;三种虫态的脂肪含量均超过%,且近%的脂肪酸为脂肪酸,其中以不饱和脂肪酸为主,油酸和亚油酸分别占%和%以上;黄粉虫幼虫及蛹中含有丰富的矿物质元素锌、铜、铁、钙、镁【,】。以上可以看出,黄粉虫是一种具有极高开发价值的昆虫资源。黄粉虫可以作为饲料,饲喂雏鸡、鹌鹑、乌鸡、斗鸡、鸭、鹅等禽类,用其喂养的雏禽生长发育快、产卵期提前,繁殖率及成活率都有提高,而且可以增强其抗病能力。研究表明,用%鲜黄粉虫代替等量国产鱼粉饲喂肉鸡,其增重率提高%,饲料报酬提高%/。用%黄粉虫虫粉代替鱼粉饲养肉仔鸡,尽中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响管肉仔鸡生长性能与饲喂鱼粉的接近,但经济效益却显著提高。.蚕蛹我国蚕蛹资源丰富,年产蚕蛹万吨以上,约占全世界总产量的%。蚕蛹含有丰富的蛋白质,高于鸡蛋和猪肉,且多为营养价值高的球蛋白和清蛋白,易被动物消化吸收。研究表明,蚕蛹粗脂肪、粗蛋白分别高达.%和.%,种氨基酸总含量大于%,其中种人体所必需的氨基酸均高于大豆,是一种优质的昆虫蛋白源;蚕蛹不仅具有很高的营养价值,还具有促进脂肪代谢、保护肝脏、促进肝细胞再生、增长智力、保护视力、延缓衰老、提高免疫机能、强壮、降血糖和抗癌等多种药理作用【】。研究报道,蚕蛹中铁、锌、铜、锰含量超过牛奶、大豆、猪肝,特别是蚕蛹蛋白中富含锌、钾及低含量的重金属。同时,干蚕蛹中含有%左右的油脂化合物,其中%以上为不饱和脂肪酸,油脂中还含有约%的非皂化物,如谷甾醇、胆固醇及菜油甾醇【。除此之外,蚕蛹中还含有约.%的甲壳素、%左右的多糖类物质、多种维生素以及微量的抗菌肽、溶菌酶和激素等生物活性物质。蚕蛹作为保健品具有很高的利用价值。据报道,用蚕蛹肽喂养小鼠,其可以降低小鼠血清胆固醇,使胆固醇达到正常范围,并具有抗氧化作用【;蚕蛹蛋白对小鼠免疫功能有加强作用】。用发酵蚕蛹、未发酵蚕蛹与鱼粉饲喂鲤鱼,其结果以发酵蚕蛹效果最型。用蚕蛹粉喂猪, 日平均增重比不加蚕蛹粉的高.%,而且可以缩短育肥期,提高猪出栏率。另有研究发现,用酶解蚕蛹配制成的氨基酸饮料,其蛋白质含量达./,种游离状态的必需氨基酸含量占总蛋白质含量的.%”】。.蝗虫蝗虫俗称蚂蚱,种类很多,营养丰富,是一类蛋白质含量很高的昆虫,有的甚至高达%干体。据报道,蝗虫粉的粗蛋白及氨基酸含量和秘鲁鱼粉基本相同。小稻蝗卵中氨基酸、均比鱼粉、肉骨粉、麦麸高,其脂肪、碳水化合物比蝇蛆、鱼粉、肉骨粉高【。有报道中华稻蝗粗蛋白占干体的.中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响%,且氨基酸组成齐全,必需氨基酸占总氨基酸量的.%【】。蝗虫作为一种蛋白质含量高、营养成分丰富的昆虫,可以作为优质蛋白加入饲料。饲喂畜禽时,可用蝗虫代替全部鱼粉或部分鱼粉,其成本低,效益高,也可用活虫直接饲喂。另外,用蝗虫喂养鸡鸭,生长快,产蛋高;用蝗虫作为家禽饲料,所饲养家禽的成活率、体重、产蛋量、产蛋率等均有明显提高或增长【】。.蝇蛆家蝇幼虫具有高效免疫和高速增殖的能力,而且其营养丰富、蛋白质含量高。据测定,鲜蛆含粗蛋白.%,干粉含.%,无论是鲜蛆还是干蛆,其蛋白含量都分别略高于或接近鲜鱼粉及肉骨粉【 ,其氨基酸种类丰富,达种以上,脂肪含量占%,其中多为不饱和脂肪酸,而且家蝇幼虫富含纯度极好的几丁质以及人畜所必需的微量元素铁、铜、锌、锰、钴、硒、碘等。因此,美、英、前苏联、日本等国在世纪年代末就开始研究蝇蛆的大规模人工饲养,以期获得优质的动物性昆虫蛋白。另外,蝇蛆体内含有特殊的抗菌肽、锌等,作为饲料使用有助于提高畜禽的抗病能力【。蝇蛆粉是一种新型、廉价、优质的饲料蛋白质,其作为饲料已被广泛应用于家禽、家畜的养殖过程中。在猪饲粮中添加少量蝇蛆肽后,可显著提高猪的日增重、蛋白质利用率和饲料转化率【 。用蝇蛆蛋白粉作为蛋白源饲喂大白鼠,其营养效价高于酪蛋白【】。在饲粮中添加.%、.%和.%的蝇蛆肽均能显著提高大白鼠的日增重,降低大白鼠饵料系数【】。将鲜蛆添加在配合饲料中饲喂肉鸡,可节省饲料,使日增重和饲料报酬率分别提高.%和.%左右【】。用蝇蛆粉代替等量鱼粉饲养蛋鸡,也取得了理想的效果】。用干蛆粉代替秘鲁鱼粉饲喂一龄草鱼,一个月以后,用蝇蛆粉饲喂的草鱼比用鱼粉饲喂的草鱼,增重多.%。家蝇具有繁殖快、饲养简单、产率高、食性广、抗病力强等特点,是一种极具开发前景的资源昆虫。.其它中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响弯齿琵甲是分布于我国西北东部和华北北部的一个优势种,具有广泛的开发利用前景。据报道幼虫干体含粗蛋白.%,粗脂肪.%,已知蛋白质含有种氨基酸,其中必需氨基酸占氨基酸总量的.%,必需氨基酸与非必需氨基酸之比/为.,且其氨基酸指标均高于年规定的蛋白质参考模式【】。弯齿琵甲有种氨基酸百分含量高于秘鲁鱼粉,其中蛋氨酸含量是秘鲁鱼粉的.倍。据介绍,用稻草、杂木等培育出来的白蚁,约经周便可用作饲料。蚂蚁蛋白质含量达%以上,还含有微量元素等;将白蚂蚁烫死后晒干,拌入饲料中喂养禽畜,不仅生长快,而且可提高免疫力,减少疾病发生。.营养与免疫免疫是一种自我维护功能,其目的就是保护自身分子免受损伤、去除恶化或移位的分子和细胞、防止细胞的过度增殖和保护组织免受病原菌的侵害。动物体内大量的物质和组织都参与了这种机体的自我维护,其中,最明显的就是由肝脏产生白细胞,和免疫系统中的一种辅助蛋白,专门识别外原物质并激起自我修复功能。机体自我修复功能的丧失,会导致生产力的下降、生长停止、加速老化和感染疾病,而适当的膳食可以通过免疫系统来激发机体的自我修复功能。在物种的进化过程中,保留了两种免疫系统:非特异性先天免疫和获得性免疫。进化过程中,物种之所以选择这两种免疫系统是因为他们所消耗的能量最少,产生的效果最好【。非特异性先天免疫系统可以通过淋巴和淋巴细胞库中多样化的抗原受体来检测细菌、病毒和一些自适应系统中几乎不变的分子基序【,从而作出反应。非特异性先天免疫由巨噬细胞、异嗜白细胞和初始淋巴细胞介导,产生天然抗体,来防御、对抗潜在的病原体,且效果非常良好。这种免疫系统容易形成,但每次耗能很高,而且同种病原体每次入侵都会引起同种免疫反应,对于生命周期长,体积大的动物,其耗能将是非常之高,也会浪费很多能量。于是获得性免疫应运而生,获得性免疫是由和淋巴细胞介导的,当病原体第一次入侵时,它不会起到任何作用,机体会感染疾病并产生抗体,但中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响当同种病原再次入侵时就可以迅速激起获得性免疫系统,并持续一周以上。获得性免疫的获得需要机体付出较高的代价,但获得后,再次遇到同种病原入侵就可以迅速激起获得性免疫,且耗能很少。所以对于一些生命周期短、繁殖率高的物种更宜选取非特异性先天免疫,而对于生命周期长的物种,则更多采取获得性免疫【,另外,动物提供肠道菌群植物多糖,以维持共生关系,而宿主也是主要通过获得性免疫来控制这些菌群的。营养均衡对免疫系统正常运转非常重要,充足的矿物质、维生素以及适量的蛋白质、糖类和脂肪,是维持机体良好免疫功能所必需的。当营养失衡时,免疫系统就会遭到破坏,引发免疫功能紊乱。.营养与免疫组织当免疫系统响应病原体时,抗原特异性胸腺细胞迅速扩增并分泌抗体,生发中心从骨髓中招募大量的成熟的免疫球蛋白和替代性吞噬细胞,并由肝脏迅速产生大量的保护性辅助蛋白,而这都需要有营养储备;并且免疫反应所需要的能量是平时代谢的倍,这就需要更多的营养物质【】。最近的研究表明,在这种应激免疫反应中,有几种氨基酸是必需的,尤其是半胱氨酸需要最多,因为产生保护性辅助蛋白需要大量的半胱氨酸,而且肝脏还会产生大量含半胱氨酸的谷胱甘肽【,引。但总体来看,细胞增殖所需要的氨基酸和其它一些酶底物与每天的摄入量相比并不是很多,研究表明:淋巴细胞增殖所需要的氨基酸不到每天所需氨基酸量的%】。就算组织需要大量的营养物质,而机体又无法获得时,某些组织功能也不会大幅下降。因为机体中一些组织拥有优先获得营养的机会,除非营养长期缺乏或极度匮乏,否则机体是不会被损坏的,比如大脑就是一个有优先权的组织,相比较骨骼组织,其在营养获得上不但没有优先权,而且当营养匮乏时,其还首先被分解。研究证明,法氏囊细胞有优先享受葡萄糖、异亮氨酸和赖氨酸的权利,但胸腺细胞则没有,而且面对营养匮乏,法氏囊细胞会增强它获得葡萄糖和赖氨酸的能力,而胸腺细胞会降低它们的吸收,所以胸腺对食物争夺、能量不足和氨基酸缺乏极其敏感,会迅速造成重量和细胞构成的减少【。较少的胸腺细中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响胞会导致减少,较少的胸腺细胞会降低迟发型超敏反应。.营养与病原菌病原菌需要从寄主中获得必需的营养来维持生存和繁殖,可用营养越多它们的平衡能力、增殖能力就会越强,就越有可能跨过免疫防线。微生物的很多重要致病基因会编码能采集营养的大分子。在血清中,铁是很多病原菌生长的第一限制营养元素,在对病原菌的急性反应中,免疫系统迅速地清除体液中的铁元素,从而限制铁元素被病原菌利用,抑制病原菌的生长;如果增加铁元素就滋养了病原菌,增加了它们的毒性。比如鸡蛋中含有丰富的运铁蛋白,这是一种反应蛋白,鸡在生产期,免疫力会下降,当受到细菌攻击时,机体就会通过铁蛋白将细胞液中的铁迅速转移到鸡蛋中,从而达到抑制细菌的作用。在哺乳动物中为乳铁蛋白,当受到细菌感染时,铁元素被从细胞外液中迅速转移,螯合成铁蛋白储存于肝脏内部习。所以说,营养对免疫细胞和病原菌都是重要的,关键是控制量。.营养素与白细胞食物中的一些成分可以调节白细胞的免疫反应,主要通过以下三种方式:影响引起免疫反应的刺激阀值、改变反应类型和变更响应时间。具有免疫调节活性的营养素主要有多不饱和脂肪酸、类胡萝卜素、植物次生化合物如木黄酮,黄酮和许多其它草药、维生素、和【。有趣的是,人们发现白细胞上含有这些调节营养素的受体,包括过氧化物酶体增生物激活受体和维甲酸受体础嫒,所以,免疫调剂营养素主要通过受体介导信号来调节免疫反应,最有特色的列子就是多不饱和脂肪酸通过、影响类花生,.酸的释放,从而调节免疫反应。相对于. 可以增加抗体应答反应、减少淋巴细胞参加细胞介导的反应和减少炎症反应,所以.会对严重的炎症和细胞参与应答的疾病降低其免疫效应,但是,也降低了因过度的炎症反应引起疾病的概率【。物有两面,对于免疫调节营养素来说,对一种疾病有好处,也就意味着对其他疾病可能就有损害【。抗氧化剂也具有免疫调节作用,部分是因为对白细胞自由基的影响。突发性的自由基产生是白细胞转导机制的信号,维生素可以熄灭这个过程,降低过中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响敏反应,而在高剂量时,维生素会通过其他机制来起作用,其中部分机制已被发现。多种机制的出现会导致复杂的剂量应答关系,超过一定需求量会使病原引起的抗体反应增强和增加更多的、争胸腺淋巴细胞来抵抗疾病】。然而,超过太多就会导致全身抗体反应的降低【,。营养素也可以通过影响控制中间代谢的激素来调节免疫系统。白细胞上含有各种激素的受体,比如胰岛素、胰高血糖素、皮质激素、生长激素、类胰岛素生长因子、维生素、雌二醇、和甲状腺素等的受体,白细胞的各种反应会受到这些激素浓度的影响,而这些激素的浓度又受到饮食的摄取量以及饮食中蛋白质、脂肪和糖类比例的影响,所以饮食中的大剂量营养素和微量营养素均具有免疫调节作用【】。适当地限制食量或能量可以加强多方面的免疫反应,但是严重限制就会导致产生很高的皮质激素,降低部分免疫反应嘶螂】。限制食量可使很多先天免疫和抗体反应迅速增强,然而细胞反应则会降低,同样的,摄入过多的食物和能量会使免疫指数降低【。.免疫与生产炎症反应通常伴随着自由基的产生,细胞因子和氧化亚氮的释放。炎症反应是先天免疫所必要的,由巨噬细胞、中性粒细胞核和其它一些细胞来完成,然而在家禽和其它一些动物中,由致炎症细胞因子介导的机体炎症会导致产能的降低,使动物食量降低和减少肌肉蛋白的增加,同时加快动物机体代谢、合成反应蛋白质、增加动物肝脏重量【。营养治疗已被用于临床预防和治疗很多炎症疾可竞病,也可以应用到家禽和家畜上来提高产量和产品质量,比如,争性抑制由一 产生的花生四烯酸的代谢产物、墟,置换细胞膜磷脂中的,竞争环氧合酶和脂氧合酶,从而减少源于的炎性介质,具有抗炎症作用;其可以降低球虫引起的系统急性反应,而对肠上皮细胞的局部免疫反应没有影响,当这种病原菌入侵,引起机体免疫反应时,加入会使机体保持良好的生长和提高食物利用纠。在假性感染激发免疫反应中,共轭不饱和酸亚麻酸、亚油酸和木糖醇同样具有降低系统急性反应、提高饮食量和机体增长的作用。中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响.免疫与肠道微生物肠道菌群包括有益菌群、无害良性菌群和致病菌群,这些菌群可以发酵纤维,合成维生素,被认为是对机体有益的共生菌群,在一些情况下,对免疫系统也可能是有益的。饮食可以明显影响肠道菌群的构成,特别是细胞壁和饲料中的纤维,因为它们是不能被机体消化的,但却是肠道微生物生长的基础物质。虽然微生物免疫调节的机制仍不明了,但有几种机制已被阐述清楚。食品或微生物中的抗原类物质可以促进滤泡中淋巴细胞形成过程中的重新分配,和接下来细胞免疫球蛋白的成分多样化,以及肠道相关免疫组织的扩张,食物或微生物中的抗原类物质可以作用或调解上皮细胞和白细胞所产生的细胞因子。食品或微生物中的不同种抗原具有不同的免疫调节作用,有些可以增强炎症,有些则能减轻炎症,也有的可以诱导分泌。羽。一般将抗原可以诱导分泌的微生物认为是有益的,归为益生菌【】。动物初始暴露的微生物环境和开始的饮食营养成分显著地影响它们的共生菌群及免疫系统的发展【们。一旦肠道共生微生物菌群建立起来,将很难改变,因为免疫系统会阻止新菌群入侵以及已存在菌群的大量繁殖,通过饮食来改变肠道菌群意味着要以降低肠道免疫系统活性作代价来获得机体的生长和健康。.营养与免疫系统很多植物为了避免被吃掉而产生了一系列毒素、抗营养因子和免疫兴奋剂。免疫兴奋剂可以使机体以为受到病原体入侵而使免疫系统进入反应状态,植物防御物质使肠道免疫系统兴奋,从而导致肠道传染,表现为腹泻、消化不良、增长缓慢和食物利用率低。凝集素比如植物血细胞凝集素和刀豆体球蛋白就是典型的免疫兴奋剂,例如,大豆和其它豆类都是用和来保护自己的,和是通过刺激淋巴细胞和巨噬细胞来发挥它们的作用,激活了免疫导致炎症细胞因子的释放,并伴有急性期反应,也就意味着停止生长【】。一般情况下,当机体处于生长期、生产期或比较健康的时候,饮食中引起免疫刺激的成分应该降到最低,在某些有病原菌的环境下,在感染病原菌前,机中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响体可通过食品来激活免疫系统,使其增强对疾病的抵抗,因为通过食物成分增强免疫活性,对刺激病原体反应有一种辅助作用【】。然而,当机体没有被感染时,增强防卫会降低机体的产能【。.昆虫多糖与免疫有关壳聚糖增强免疫、降低血脂的作用已有很多报道。药效学研究结果表明,壳聚糖可用作促进伤口愈合和抑制肿瘤生长的药物。如壳聚糖可使创伤部位的嗜中性白细胞和巨噬细胞活化,刺激多核和单核细胞迁移,加速邻近组织再生和血管形成,从而促进伤口愈合晔】。此外,壳聚糖还具有抗肿瘤作用,它可使巨噬细胞活化,一方面直接吞噬肿瘤细胞,另一方面也可促进巨噬细胞分泌一氧化氮、.、肿瘤坏死因子抑制剂和活性氧等可扩散的细胞毒分子,从而间接溶解肿瘤细胞【】。小鼠实验表明,壳聚糖灌胃处理可使小鼠的胸腺指数和脾脏指数增高,细胞免疫、体液免疫、单核一巨噬细胞功能和自然杀伤吖细胞活性增强【。对壳聚糖等四种日粮纤维对大白鼠肠道免疫功能指标的影响进行研究发现,饲喂壳聚糖的大白鼠与饲喂纤维素的大白鼠相比,其肠系膜淋巴结中淋巴细胞的免疫球蛋白、免疫球蛋白和免疫球蛋白含量较高,而免疫球蛋白含量较低,说明日粮中壳聚糖对大白鼠肠道免疫系统具有免疫调节作用【】。研究也表明,饲喂甲壳素和壳聚糖均可提高绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应能力,增强小鼠的血清溶血素抗体反应和巨噬细胞的吞噬反应。.昆虫免疫学研究现状昆虫可谓是生化合成的先驱,它们之所以能在自然选择面前成功地生存下来,并在千变万化的自然界中占据极大的生存优势,是有很多原因的,其中抗菌防御机制在昆虫的进化中起到了非常重要的作用【。昆虫时常暴露在细菌和真菌中,但却很少被感染,是因为昆虫有一套特殊的免疫系统;昆虫由于生命周期短,自然的能量优势选择,使其主要依赖先天性免疫【】。先天性免疫反应速度中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响快,效果好,当昆虫被感染后个小时就可以检测到抗菌肽【。抗菌肽是先天性免疫产生的一种效应因子,其分子量小,一般只有几个至几十个氨基酸残基,但其对菌类却有很好的抑制作用,一只昆虫一般可以产生一种抗菌肽,每种均有自己独特的抗菌谱,使微生物无法入侵昆虫机体【州。昆虫抗菌肽通常带正电荷,具两亲性,为阳离子多肽,长度为几十个氨基酸,线性或带有环状结构,环状结构是由一对或多对半胱氨酸残基相连而成的。昆虫抗菌肽是由细胞中的核糖体合成的,用聚合酶抑制剂放线菌素注射昆虫后,再用诱导源诱导,发现昆虫不会产生抗菌肽,由此说明抗菌肽是由合成开始的。在完全变态的昆虫中,抗菌肽由脂肪体和各种上皮细胞快速合成并分泌到血淋巴中【。而在非完全变态昆虫中,抗菌肽先是在健康的昆虫血细胞中合成,受到刺激或感染后,才分泌到血淋巴中【】。抗菌肽的具体作用位点仍不清楚,但目前普遍认同的作用机制主要有以下种: 形成细胞膜电势依赖型通道;抑制细胞呼吸作用;抑制细胞外膜蛋白的合成;抑制细胞壁的形成【。.抗菌肽的分类及其功能目前己发现多种昆虫抗菌肽,根据其结构和氨基酸组成,昆虫抗菌肽可分为大类:天蚕素类抗菌肽、富含半胱氨酸的抗菌肽族.、富含脯氨酸的抗菌肽族?和富含甘氨酸的抗菌肽族? 。.天蚕素类抗菌肽天蚕素抗菌肽是最早被发现的昆虫抗菌肽,它对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有较高的抗性,但对霉菌和其它真核细菌无细胞毒性作用【】。目前发现的天蚕素类抗菌肽有多种。它们的分子都具有相似性:均为线型阳离子多肽,由个氨基酸残基组成,分子质量 左右,几乎不含半胱氨酸,没有二硫键,具两亲性的【.螺旋结构;端通常呈碱性,带正电荷,亲水;端酰胺化,中性或微酸性,不带电或带少量负电荷,疏水,等电点为.,耐热,不易被中山大学硕上学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响胰蛋白酶、胃蛋白酶水解【】。该类抗菌肽的典型代表为从惜古比天蚕如却办。厂口中鉴定的天蚕素【。.富含半胱氨酸的抗菌肽富含半胱氨酸的抗菌肽族是昆虫抗菌肽中分布最广泛的一族,已在半翅目、双翅目、鞘翅目、膜翅目、蜻蜒目昆虫中发现了大类、多种【。是此类抗菌肽的代表。该类抗菌肽分子内含个半胱氨酸,对二硫键,二硫键起稳定抗菌肽二级结构的作用。生物防御素的分子量在一左右,是非糖基双亲低分子短肽,有个氨基酸残基组成。目前发现的此类抗菌肽均含有共同的由半胱氨酸残基形成的二硫键,可形成【.螺旋结构。生物防御素对革兰氏阳性菌有较强的抗性,但对革兰氏阴性菌、真菌及真核细胞几乎无效【】。在富含半胱氨酸的抗菌肽中,最小的一个抗菌肽是,它由 个氨基酸残基组成,含个半胱氨酸,个二硫键,是从刺蝽 中分离得到的,其分子小,结构活性容易研究。.富含脯氨酸的抗菌肽这类抗菌肽是等于年从膜翅目的意大利蜂 口血淋巴中首先发现的,目前已在双翅目、膜翅目、半翅目和鞘翅目等中发现。这类肽由个氨基酸残基组成的线性多肽,其中脯氨酸含量在%以上,肽链中的脯氨酸一般以并联或三联的形式与碱性残基排列在一起,主要抑制革兰阴性菌,而对革兰阳性菌无作用。把该类抗菌肽分为无取代基和.糖基化两类【蚓。这两类抗菌肽高度同源,结构上的区别仅在于有.糖基化。抗菌肽有的在苏氨酸的羟基上发生.糖基化,研究表明,不含取代基的抗菌肽的活性明显偏低,如果把原来带有取代基的抗菌肽分子中的取代基去掉,其活性明显下掣】。.富含甘氨酸的抗菌肽中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响.,来自家蚕是此类的代表,包括来自天蚕.的、的,来自麻蝇.的、 、和来自果蝇肌肠聆馏珊饱力的等【。其共同特点是一级结构中富含甘氨酸,有些是全序列中富含甘氨酸,有些是某一区域富含甘氨酸,而不含半胱氨酸,不能形成分子内二硫键,氨基酸残基上也不具有修饰基团。这类抗菌肽的分子大小差别很大,质量范围为,具有广谱抗菌活性。该类抗菌肽的杀菌机理是阻碍细菌肽聚糖和外膜蛋白的合成,从而导致细菌细胞膜通透性增加,抑制细菌生长,但对已形成细胞膜的细菌不起作用。.抗菌肽体外抗菌机制中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响.抗菌肽与细菌细胞壁的作用抗菌肽能够抑制细菌生长并杀死细菌。根据目前的研究,它的作用位点很可能是在细菌内膜,那么很可能是抗菌肽借助于静电引力吸附到细胞壁,从而进入细菌内膜,这与天蚕素的广谱抗菌特性相一致【 。最近通过固态核磁共振光谱证明了天蚕素通过.螺旋这个长轴插入到脂质双层膜中,有实验通过电子显微技术和免疫细胞化学进步证明了天蚕素是作用于细胞膜的【】。昆虫防御素只对革兰氏阳性菌有作用,与其它抗菌肽族对革兰氏阴性菌作用效果更强所不同【。抗菌肽与革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌发生作用的方式有所不同,革兰氏阳性菌比革兰氏阴性菌的细胞壁更简单、更厚,含有丰富的肽聚糖和磷壁酸,其肽聚糖上的大量负电荷恰好与抗菌肽中的大量正电荷相互作用,从而吸附到细胞壁上,同时也可以解释在更强的阳离子作用下,为什么抗菌肽失去效力【。与孑、等天然二价阳离子相比,抗菌肽与脂多糖有更高的亲和力,抗菌肽从带负电的脂多糖处转移阴离子,使此处的细胞壁发生紊乱,形成不稳定区域,从而穿过此区域而接近细胞膜。革兰氏阴性菌的细胞壁比较薄,但是革兰氏阴性菌在肽聚糖外面多一层由脂双层、蛋白和脂多糖组成的外膜,与肽聚糖相比,抗菌肽更容易结合到负电荷聚集的上,所以与革兰氏阳性菌相比,革兰氏阴性菌对带电荷较低的抗菌肽较难通过【吲。实验证明,昆虫防御素的荷重比,与其它族抗菌肽相比是最低的,因而昆虫防御素很难通过革兰氏阴性菌外膜,这就可以解释为什么昆虫防御素对革兰氏阴性菌没有作用。.抗菌肽与细菌细胞膜的作用抗菌肽穿过细胞壁后,与细胞膜发生作用。目前多数研究主要用磷脂膜模型来研究抗菌肽与细胞膜的相互作用,也有些研究者利用膜潜在的敏感染料和荧光标记肽段来研究抗菌肽与细胞的相互作用【。研究证明,所有抗菌肽均能与细胞膜相互作用,抗菌肽通过其正电荷与细胞膜上的负电荷通过静电引力相结合,进而在细胞膜上形成穿膜孔洞,使胞内物质外漏,导致靶细胞死亡【。其主要不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响中山大学硕士学位论文有种模型:桶板模型:该模型中抗菌肽插入质膜中,并垂直于细胞膜定向,在细胞膜上排列开来,因其排列方式与桶上的木板排列相似而得名。形成疏水侧链面向外部的脂质环境,极性侧链向内形成跨膜孔道,这些孔道可以使胞质成分外漏而导致细胞死亡。抗菌肽以单体或多聚体的形式结合到细胞膜上,当以单体形式和细胞膜相结合时,抗菌肽分子之间能够在较低的密度下相互识别,并形成多聚体,最终呈现为桶状结构。以多聚体形式结合时,不会因为受到磷脂膜的影响而解离,某些多聚体还能继续吸引其他的抗菌肽来改变通道的大小。理论上,只要有个相同的抗菌肽分子就可以形成一个这样的通道。采用这种机制的抗菌肽,一般包含双亲性的【.螺旋、疏水性的.螺旋或.折叠片层结构,或同时具备这些结构,这是抗菌肽形成穿膜孔洞发挥作用所必需的。极少量的抗菌肽就会形成穿膜孔道,对靶细胞造成致命伤害,在远远低于微摩尔水平时即可杀死细斟。覆毯模型:抗菌肽的氨基酸始终与磷脂头部相结合,与脂双层并行排列,而不插入到膜内,其疏水侧面朝向磷脂膜而亲水侧面朝向溶液,有效地覆盖于局部区域,这种重新定向使抗菌肽所在处质膜的稳定性降低,形成裂缝,使细胞内容物释放出来,膜电势被消失,从而导致质膜瓦解。当结合的抗菌肽分子达到一定的浓度阈值以后,会以一种类似于变性剂作用的机制穿过磷脂膜,破坏细胞。在这一过程中,会形成短暂的孔洞,导致磷脂膜消解。在这种模式下,抗菌肽不需要有特定的结构,也不需要形成结构性的穿膜通道,但其发挥作用的有效浓度。要高于采用“桶板机制的抗菌肽【胶束模型:抗菌肽在靶细胞表面以非正常的跨膜胶束重新定向或聚集式排列,胶束瓦解后抗菌肽穿过细胞膜进入细胞内】。综上所述,抗菌肽作用的方式虽然有所不同,但最终都是使靶细胞膜快速去极化,导致外流,引起电势消失,从而导致细胞呼吸性死亡。.抗菌肽与细菌胞质内靶目标的作用有研究表明,细胞膜的去极化并不是抗菌肽杀死靶细胞的充分条件,即抗菌。用肽与细胞膜作用,在其表面形成短暂性的通道只是进入细胞的中间步骤【具有不同结构的抗菌肽与及其他一些革兰氏阳性菌作用,对细菌死亡动中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响力学及膜的去极化进行研究。结果表明,早期或在%细菌被杀死时,质膜的去极化都是不完全的,这说明细胞膜的去极化并不是杀死细菌的首要机制,但一定程度的去极化是抗菌肽穿过细胞膜进入细胞内接近靶位点所必需的。用标记的胸腺嘧啶脱氧核苷酸、尿嘧啶核苷酸和亮氨酸对人杀菌机制进行研究,发现在 、和蛋白质的合成,.?时可以抑.表的抗菌作用可能影响.的代谢功能【。用荧光光谱法研究家蝇抗菌肽一与.相互作用的机制,用染色发现.与双螺旋紧密结合,阻止了转录和复制【”】。有实验表明,对革兰氏阳性菌有强烈抑菌活性的抗菌肽通过紧密结合到原核细胞核糖体亚基上,从而抑制蛋白合成起始复合物的形成,引起细胞死亡川。综上所述,抗菌肽对细菌的抑杀作用涉及到多方面的机制,但抗菌肽从穿越细胞膜开始到细胞内的靶标相互作用,均与其结构特点密切相关,而分子带正电荷则是其发挥抗菌作用的基础。目前亦有大量报道,抗菌肽具有抗真菌、病毒和肿瘤等作用,其机理也都与其所带电荷有关。其实机体也无外乎是正电、负电相互作用所产生的一种磁场,但其作用机制仍有待进一步研究。.抗菌肽在机体内的性质任何一种有关抗菌肽的研究,目的只有一个,那就是如何将它应用到人体和动物中。但在现实治疗中,人们面临的首要问题是如何降低抗菌肽对酶的敏感性【。大部分昆虫抗菌肽富含赖氨酸和精氨酸残基,是胰蛋白酶类似的肽酶的,降解目标,同时天蚕素可以被和.产生的专门用来降解天蚕素的酶所降解【啦。为了抵抗细菌感染,天蚕素和防御素可以迅速的表现出其抗菌活性而不被自身的酶所降解,但对于富含脯氨酸的抗菌肽似乎有些困难。研究表明,在感染黑花蝇属:时后,分析其血淋巴,发现有将近一半的富含脯氨酸的抗菌肽并没有酶降解,说明昆虫体内的蛋白水解酶对自身产生的抗菌肽没有威胁【 】。但是抗菌肽在植物细胞液和哺乳动物血清中会被迅速的降解,天蚕抗菌肽在马铃薯细胞液中的半衰期只有分钟,在番茄细胞液中也不超过分钟【】。因为天蚕抗菌肽的衍生物的生物活性中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响受细胞液中蛋白的影响,所以马铃薯和番茄不适合作为转基因抗菌肽的表达载体抗菌肽在机体内的稳定是建立在大量的体外血清和基质稳定的基础上的,抗菌肽在血清中稳定性的研究是筛选抗菌肽的重要一步,通过筛选以除去那些寿命短、在治疗中没有活性的抗菌肽【,比如,饲喂小鼠/的糖基化,根本不能起到抵抗大肠杆菌的作用,因为在血清中抗菌肽已被分解。融合型氨基酸可以提高抗菌肽的血清稳定性,这种方法产生一种抗菌肽变体,既不会失去其抗菌活性,也不会被胰蛋白酶或其他酶降解,但却可能引起溶血现象。在氨基端加上一个赖氨酸类似物可以使抗菌肽在不失活性的同时避免被外切酶降解,并且可以阻止胰蛋白酶的作用,但是要注意,对于和必须在其初始氨基末端保留有一正电荷,以保持活性。研究表明,主链的修饰也可改变其酶抵抗性和抗菌谱引。对于抗菌肽在机体内的作用研究的比较少,主要是包括抗菌性质、细胞毒性和抗肿瘤活性。对于有结肠癌的小鼠,每天以瓜的剂量腹腔注射天蚕抗菌肽,小鼠的生命得到延长,但如果一天内剂量超过/时,就会有致命性的危害【。将表达抗菌肽的结构导入到人体膀胱癌衍生细胞株,形成致肿瘤克隆细胞,然后植入裸鼠中,表达的天蚕抗菌肽使肿瘤诱导作用降低或完全消失【。每天用 多肽饲喂鱼,其存活率会提高,生命周期也会延长。以/的注射正常小鼠不会有毒副作用,但对免疫力低下的动物有毒副作用。在小鼠感染大肠杆菌时后,静脉注射 /或 /天然抗菌肽,有助于小鼠抵抗大肠杆菌 达到高潮,但是/时就会对免疫低下动物产生危害【。.本研究的内容和意义家蝇 .具有生活周期短,繁殖力强,宜于规模化养殖等特点,且幼虫营养丰富,蛋白质含量高,粗蛋白含量达%以上,同时家蝇体内还能够产生一种抗菌物质,这种物质的效力极高,只要万分之一浓度便可杀死多种病菌,其效力远高于目前人类已发现的任何一种抗菌素,因此是国际上重视和不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响中山大学硕士学位论文开发利用较早的资源昆虫。早在世纪年代末期,美、英、前苏联、日本等国就开始研究并建立家蝇工厂,生产饲料和食用蛋白。我国在世纪年代开展家蝇饲养研究,经多年努力,已建立了一套家蝇工厂化无毒饲养技术。但是在蝇蛆大规模生产过程中,如何对生产的蝇蛆蛋白进行有效干燥,这已长期困扰着蝇蛆产业的发展。针对此问题,本文拟从加工方法入手,通过研究不同干燥方法对蝇蛆蛋白粉营养价值的影响及不同方法干燥的蝇蛆蛋白粉对小鼠免疫力的影响,以期找出最佳的方法,从而为今后利用蝇蛆大规模生产具有免疫活性的蝇蛆蛋白粉提供理论与技术支持。研究主要内容如下:三种不同干燥方法对蝇蛆蛋白粉营养成分的影响。从食物消化率、蛋白生物价、蛋白效价三个方面研究三种不同干燥方法对蝇蛆营养价值的影响。三种不同方法干燥的蝇蛆粉对小鼠非特异性免疫功能和细胞免疫功能的影响。中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响.技术路线中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响第章不同方法干燥的蝇蛆粉营养成分分析粮食不足,尤其是蛋白资源的缺乏,是当今世界面临的一个重要问题,而世界能源紧缺所引发的生物燃料开发与使用,则更加剧了世界粮食短缺的局面。我国人口众多,资源有限,蛋白尤为匮乏,仅年一年进口大豆即达万吨以上。可以预计,随着我国人口的继续增长和人民生活水平的不断提高,蛋白的需求量将越来越大,供需缺口必将进一步加大。因此,如何提高现有蛋白质资源利用效率,积极寻找新蛋白源,尤其是开辟新饲料蛋白源,这是缓解我国蛋白质资源短缺的有效途径。家蝇具有生长快、周期短、产量高、易于人工饲养等特点。研究报道,蝇蛆干粉中蛋白含量可达.%,蛋白生物价达.%】。因此,是一种极具开发前景的新型蛋白源。鉴于此,本章拟通过对不同干燥方法干燥的蝇蛆粉作出营养成分分析,以确定不同它们对蝇蛆营养成分的影响,从而为今后简便、高效加工蝇蛆蛋白作食品医药品及饲料蛋白提供理论和技术支持。.材料与方法.家蝇种由本实验室提供。为室内连续饲养年,无有害菌的健康蝇种。.家蝇饲养以麦麸为培养料,于温度。、相对湿度%下饲养天后收取,.。保存使用。中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响.实验器材型电热鼓风干燥箱:上海嘉程仪器设备厂精密电子天平:上海天平仪器厂电子天平.冷冻干燥机:北京博医康实验仪器有限公司匀浆器:德国公司型氧弹式量热仪:北京迪索仪器有限公司凯式定氮仪. :瑞典特卡托公司索氏提取器 淞 :瑞典特卡托公司.干燥方法蝇蛆普通干燥: 将蝇蛆置于下烘 ,然后粉碎、混匀,储存备用。蝇蛆微波干燥: 将蝇蛆置于微波炉中,中火 ,粉碎、混匀,储存备用。蝇蛆冷冻干燥: 用匀浆机将蝇蛆打碎,置.下冷冻,使其完全冰冻结实后,放入冷冻干燥机中冷冻干燥, 后取出,粉碎、混匀,.储存备用。.营养成分测型.水分含量测定取左右精确至. 蝇蛆干粉,置于已干燥、冷却并称至恒重的有盖称量瓶中,移入常压烘箱中,开盖烘 后取出,加盖置于干燥器中冷却半小时,称重。再烘 左右,冷却半小时,称重。如此反复,直至前后两次质量差不超过。水分%:? 公式.。一、不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响中山大学硕士学位论文?干燥前样品与称量瓶质量,干燥后样品与称量瓶质量,称量瓶质量,.蛋白含量测定消化准确称取.左右的样品精确至.,小心放入洁净的管底部勿触壁,每个样品重复次,并设空白对照;同时加入. 、.作为催化剂;然后,每个消化管中加入 浓硫酸。将消化管置于已调好温度的的消化炉上消化约 ,如有触壁可加入少量双氧水氧化,直到管中液体澄清为止;取出置于石棉网上,冷却至室温,加水混匀,冷却 ,然后测值,读出所用盐酸量。公式?蛋白含量%?.?囊?.?一标准摩尔浓度盐酸空白样滴定标准酸含量一样品滴定标准酸含量.脂肪含量测定称取.样品精确至. ,置于圆形滤纸中,放入圆筒滤杯中,取石油醚置于已称至恒重的铝杯中,将圆筒滤杯浸泡于含有石油醚的铝杯中,把滤纸及铝杯置入萃取皿 中,下萃取 ,然后将圆筒滤杯拉起,继续萃取 ,最后抽干石油醚约 ,将铝杯放入烘箱中烘干,取出,放入真空干燥器中冷却至室温,称重。公式?脂肪含量%再焉石虿。铝杯净重,中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响.?由提后铝杯重量,.灰分测定先将瓷坩埚置于高温炉中,下灼烧. ,冷却至以下后取出,放入干燥器中冷却至室温,准确称量,并重复灼烧至恒重;加入样品精确至.后,放于电炉上灼烧,使样品充分炭化至无烟,然后放入马福尔炉中,下灼烧 ,至无炭粒,即灰化完全。冷却至以下后取出,放入干燥器中冷却至室温,称量,重复灼烧至前后两次称量相差不超过.为止。公式灰分含量%砀五石%?坩埚和灰分的质量,坩埚的质量,?坩埚和样品的质量,.能量测定,称取将样品放在下烘左右样品,压饼,然后准确称量样品饼的重量精确至. ,放入坩埚中。将盛有样品的坩埚固定在坩埚架上,再将一根点火线铂丝,长 固定在两个电极上,其中一段与样品接触;把盛有坩埚的坩埚架放入氧弹中,拧紧氧弹盖,然后通过进气管缓慢通入氧气;向量热容器加入蒸馏水至刻度线为止,然后将充入氧气的氧弹放入量热容器中,连接好电源线,盖好盖子,把测温弹头插入内筒,测初温样品未然烧前的温度,并记录下初温。按点火键,样品开始燃烧,观察温度变化,至温度不再上升为止,记录此刻温度;停止观测温度后,按搅拌键停止搅拌,从热量计中取出氧弹,用放气帽缓缓压下放气阀,待气放完后拧开量热容器盖,取出氧弹盖,测量未烧完的铂丝长度;倒去热量计中的水,继续测定下一样品。中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响燃烧热能值的计算:肛鬯坐笫半公北射一苯甲酸的重量,一苯甲酸燃烧后铂丝剩余的长度,一点火后的最终温度,?点火前的初始温度,样品能量的计算:?:?.公式.?燃烧热能,.?样品燃烧后剩余的铂丝长度,点火后的最终温度,?点火前的初始温度,一样品的重量,.氨基酸含量测定氨基酸自动分析仪法采用离子交换法原理:利用各种氨基酸的酸碱性、极性和分子量大小等不同性质,使用阳离子交换树脂在色谱柱上进行分离。当样液加入色谱柱顶端后,采用不同值和离子浓度的缓冲液即可将它们依次洗脱下来,即先是酸性氨基酸和极性较大的氨基酸,其次是非极性和芳香性氨基酸,最后是碱性氨基酸;分子量小的比分子量大的先被洗脱下来,洗脱下来的氨基酸可用茚三酮显色,从而定量各种氨基酸。操作方法:称取干燥的蛋白样品 的盐酸,下,加入水解 ,然后除去过量盐酸,加缓冲溶液稀释到一定体积,摇匀,取定量的水解样品上柱进行分析。如样品中含有杂质,需先除去杂质再进行酸水解处理口。去糖和淀粉:将样品用淀粉酶水解,然后用乙醇溶液洗涤得蛋白沉淀物;中山大学硕士学位论文 不同方法干燥的蝇蛆粉营养价值评价及其对小鼠免疫的影响去脂肪:将干燥的样品经研钵研碎后,加入丙酮或乙醚等有机溶剂离心或过滤抽提,得蛋白质沉淀;去核酸:将样品在%溶液中,加热 ,然后用热水洗涤,过滤后将固形物用丙酮干燥即可。去无机盐:样品经水解后,含有大量无机盐时,必需用阳离子交换树脂进行去盐处理。用国产型树脂,先用/盐酸洗成酸性,然后用水洗成中性,装在一根小柱内。入柱后,将去除盐酸的水解样品用水溶解,并不断用水洗涤,直至洗出液中无氯离子为止用硝酸银溶液检查,此时氨基酸全被交换在树脂上而无机盐类被洗去,最后用 /的氨水溶液把交换的氨基酸洗脱下来。收集洗脱液,浓缩蒸干,然后上柱分析。.结果与分析.不同方法干燥的蝇蛆粉营养成分测定从表.和.可知,冷冻干燥蝇蛆粉蛋白质含量为.%、脂肪.%、灰分.%、能量./;微波干燥蝇蛆粉蛋白质含量.%、脂肪.%、灰分.%、能量./;普通干燥蝇蛆粉蛋白质含量.%、脂肪.%、灰分.%、