中药化学 实验指导 (全套）

实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离与检识（一）目的要求学习羟基蒽醌类化合物的提取分离和检识，通过实验要求：1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。2.掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物。3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法。5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。（二）主要化学成分的结构及性质大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷，总含量约35。1大黄酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。黄色针状结晶（升华法），mp.321322，330分解。能溶于碱水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。2大黄素(emodin) 分子式C15H10O5，分子量270.23。橙色针状结晶(乙醇)，mp.256257，能升华。易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。3芦荟大黄素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5，分子量270.23。橙色针状结晶（甲苯），mp.223224。易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈绯红色。4大黄酚(chrysophanol) 分子式C15H10O4，分子量254.23。橙黄色六方形或单斜结晶（乙醇或苯），mp.196197，能升华。易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极微溶于石油醚、冷乙醇，几不溶于水。大黄酚 R1=CH3 R2=H大黄素 R1=CH3 R2=OH大黄酸 R1=COOH R2=H大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H5大黄素甲醚(physcion) 分子式C16H12O5，分子量284.26。砖红色单斜针状结晶，mp.203207，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。（三）实验原理本实验是根据大黄中的羟基蒽醌苷经酸水解成游离羟基蒽醌，而游离羟基蒽醌不溶于水，可溶于氯仿、乙醚等亲脂性有机溶剂的性质，用氯仿从水解液中将游离羟基蒽醌提取出来，再利用各游离羟基蒽醌的酸性不同，采用pH梯度萃取法将其分离。其中大黄酚和大黄素甲醚的酸性十分近似，用pH梯度萃取法难以分离，可利用两者的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。（四）实验内容1. 提取与分离见书。2检识（1）碱液试验 分别取各蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加1ml乙醇溶解，加数滴10氢氧化钠试剂振摇，观察颜色变化，羟基蒽醌应显红色。（2）醋酸镁试验 分别取各蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加1ml乙醇溶解，加数滴0.5醋酸镁乙醇试剂，观察颜色变化，羟基蒽醌应显橙、红、紫等颜色。（3）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na试 样：自制大黄酸、大黄素、芦荟大黄素的氯仿溶液对照品：上述各成分对照品乙醇溶液展开剂：石油醚（3060）-醋酸乙酯-甲酸（1551）上层溶液显 色：在可见光下观察，记录黄色斑点的位置。然后再用浓氨水熏蒸或喷雾5醋酸镁甲醇溶液，斑点应显红色。（五）实验说明及注意事项1大黄中蒽醌类化合物的种类、含量与大黄的品种、采集季节、炮制方法及贮存时间均有关系，实验用药材应注意。2萃取用pH8缓冲液为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液 ；pH9.9缓冲液为碳酸氢钠-碳酸钠缓冲液。配制好的缓冲液要测pH值。一般萃取大黄酸用pH78范围的，萃取大黄素用pH9.511范围的。3用各缓冲液进行萃取时，采用一次性加入的方法，实验证明，如将缓冲液分次萃取，分离效果不理想。4本实验也适应于以虎杖为原料的提取，但虎杖中不含大黄酸，故直接由大黄素开始分离。5色谱分离大黄酚及大黄素甲醚时，先用氯仿洗脱至出现黄色色带时，改用氯仿醋酸乙酯（82）混合溶剂继续洗脱，并更换收集器，每10ml为一份，按顺序编号，直至色谱柱的第一色带全部洗脱下来为止。各流分经硅胶-CMC-Na板，氯仿醋酸乙酯(82)展开，用大黄酚和大黄素甲醚作对照，合并斑点相同流分，分别浓缩、放置析晶，即可获得大黄酚及大黄素甲醚。（六）思考题1大黄中5种羟基蒽醌化合物的酸性和极性大小应如何排列？为什么？2pH梯度萃取法的原理是什么？适用于哪些中药成分的分离？3蒽醌类化合物及其苷的薄层色谱用什么作吸附剂、展开剂和显色剂？4蒽醌类与醋酸镁显色反应的必要条件是什么？其颜色反应与羟基所在的位置有何关系？实验二 补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识（一）目的要求学习香豆素类化合物的提取分离及检识，通过实验要求：1掌握用溶剂法提取香豆素类化合物的操作技术。2通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱的操作技术。3掌握香豆素类化合物的检识方法。（二）主要化学成分的结构及性质补骨脂 为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，全国各地多有栽培。含有多种呋喃香豆素类成分，主要含补骨脂内酯 （补骨脂素）、异补骨脂内酯 （异补骨脂素）和补骨脂次素等。其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成分，具有光敏性质。1.补骨脂素(psoralen) 又称补骨脂内酯，分子式C11H6O3，分子量186.16。无色针状结晶（乙醇），mp.189190，有挥发性。溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。2.异补骨脂素(isopsoralen) 分子式 C11H6O3，分子量186.16。无色针状结晶，mp.137138，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，难溶于冷石油醚。 补骨脂素 异补骨脂素3.补骨脂乙素(isobavachalcone) 又称补骨脂酮、异补骨脂查耳酮。分子式C20H20O4，分子量324.36。黄色片状结晶（甲醇-水），mp. 166167。4.补骨脂甲素(coryfolin) 又称补骨脂黄酮，分子式C20H20O4，分子量324.36。无色针状结晶，mp.191192。 补骨脂乙素 补骨脂甲素（三）实验原理本实验根据补骨脂素和异补骨脂素等在乙醇中溶解度大，利用乙醇从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素等，并用活性炭吸附脱色，再依据补骨脂素和异补骨脂素的极性差异，利用氧化铝干柱色谱予以分离。（四）实验内容1.提取方法:见书方法:见书2.精制见书3.分离取色谱用中性氧化铝12g，装于直径1.0cm28cm的干柱用色谱柱中。将补骨脂素精制品0.2g溶于少量甲醇，加入0.5g氧化铝拌匀，60烘干，加样，以苯-石油醚（41）并每50ml加入15滴丙酮为洗脱剂，展层至柱底，置紫外灯下观察，用刀片切取两段蓝色荧光色带，分别用甲醇回流提取，滤过，滤液回收溶剂至小体积，静置析晶，抽滤，分别得到补骨脂素和异补骨脂素结晶。4.检识（1）异羟肟酸铁反应 取试样少许于试管中，加入7盐酸羟胺甲醇溶液23滴，再加10氢氧化钠甲醇溶液23滴，于水浴上加热数分钟，冷却后，加盐酸调pH34，加1三氯化铁12滴，观察溶液颜色。（2）开环闭环试验 取试样少许加稀氢氧化钠溶液12ml，加热，观察现象，再加稀盐酸试剂数滴，观察所产生现象。（3）荧光 取试样少许溶于氯仿中，用毛细管点于滤纸上，晾干后在紫外灯下观察荧光。（4）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na板试 样：补骨脂素乙醇液异补骨脂素乙醇液对照品：补骨脂素对照品乙醇液异补骨脂素对照品乙醇液展开剂：苯-醋酸乙酯（91） 苯-石油醚（41）每50ml含丙酮15滴显 色：紫外灯下观察荧光（五）实验说明及注意事项1提取药材应是未炮制过的补骨脂种子,其补骨脂素和异补骨脂素等成分含量较高。2补骨脂素和异补骨脂素含内酯结构，具有内酯类成分的通性，可用碱提酸沉法提取，但因补骨脂种子中含有大量油脂和糖类成分，易与碱水发生皂化反应和形成胶状物，致使难以滤过，降低收得率，故选用50乙醇提取而不用碱溶酸沉法提取。3由补骨脂种子中提取所得的精制品，为补骨脂素和异补骨脂素的混合物结晶，两者含量近于11，但随药材品种、质量等不同而有差异。在进行干柱色谱分离之前，应先进行薄层色谱检查，了解两者含量情况。因两者皆具有光敏作用，均为有效成分，故临床应用时，不必将两者分开。（六）思考题1从中药中提取香豆素类成分还有哪些方法？2异羟肟酸铁反应的机理是什么？实验三 陈皮中橙皮苷的提取分离与检识（一）目的要求学习橙皮苷的提取精制和检识，通过实验要求：1掌握橙皮苷的结构特点和理化性质及一般提取方法。2了解橙皮苷的检识方法。（二）主要化学成分的结构及性质陈皮为芸香科植物福橘Citrus tangerina Hort.et Tanaka、朱橘Citrus erythrosa Tanaka的果皮。含挥发油和黄酮类成分橙皮苷、川陈皮素等。20D橙皮苷(hesperidin) 又称陈皮苷、橘皮苷。分子式C28H34O15，为细树枝状针形结晶，mp.258262， -76（C=2,吡啶）。易溶于稀碱及吡啶，微溶于甲醇及热冰醋酸，几乎不溶于丙酮、苯及氯仿，在60溶于二甲基甲酰胺及甲酰胺。橙皮苷（三）实验原理本实验是根据陈皮中的主要成分是挥发油和橙皮苷，先用石油醚溶除挥发油，再用甲醇提取及用活性炭精制得到橙皮苷。也可利用橙皮苷易溶于稀碱水的性质，进行碱溶酸沉法提取，用甲酰胺精制得橙皮苷。（四）实验内容1提取、精制方法：见书方法：见书2检识（1）Molish反应 取橙皮苷少许置于试管中，加乙醇1ml，在水浴中加热溶解，加-萘酚乙醇溶液23滴振摇，倾斜试管45，沿管壁徐徐滴加1ml浓硫酸，静置，观察二层溶液界面变化，应呈现紫红色环。（2）盐酸-镁粉反应 取橙皮苷少许置于试管中，加乙醇2ml，在水浴中加热溶解，加入镁粉约50mg振摇后，滴加浓盐酸34滴，产生剧烈反应，溶液逐渐由黄色变为红色。（3）锆-枸橼酸反应 取橙皮苷少许置于试管中，加甲醇2ml，在水浴中加热溶解，加2二氯氧锆甲醇试剂3 4滴，呈鲜黄色。再加2枸橼酸甲醇试剂34滴，黄色变浅。（4）三氯化铝反应 取橙皮苷少许置于试管中，加甲醇2ml，在水浴中加热溶解，加1三氯化铝甲醇试剂23滴，呈鲜黄色。（5）四氢硼钠反应 取橙皮苷少许置于试管中，加2ml甲醇溶解，加入等量的2四氢硼钠的甲醇液，一分钟后，再加浓盐酸或浓硫酸数滴，生成紫色紫红色。此反应也可在滤纸上进行。（6）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na板试 样：自制橙皮苷乙醇饱和溶液对照品：橙皮苷对照品乙醇饱和溶液展开剂：醋酸乙酯-甲醇-水（1001713）显色剂：喷雾0.5醋酸镁试剂，在紫外灯下观察显天蓝色荧光（五）实验说明及注意事项1精制橙皮苷粗品时所用活性炭，应事先用稀盐酸处理。2橙皮苷微溶于甲醇，故工业生产中，以甲醇为溶剂提取时，应加热提取多次。实验四 槐花米中芸香苷的提取及槲皮素的制备与检识（一）目的要求学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求：1通过芸香苷提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。2掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识方法。3掌握由芸香苷水解制取槲皮素的方法。（二）主要化学成分的结构及性质槐花米为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾，主要含芸香苷（芦丁），含量高达1220，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖；槐花亦含芸香苷，但含量较槐米为少。芸香苷(rutoside) 分子式C27H30O16，分子量610.51。淡黄色针状结晶，mp.177178，难溶于冷水（18000），略溶于热水（1200），溶于热甲醇（17）、冷甲醇（1100）、热乙醇（130）、冷乙醇（1650），难溶于醋酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。槲皮素(quercetin) 又称槲皮黄素，分子式C15H10O7，分子量302.23。黄色结晶，mp.314（分解）。溶于热乙醇（123）、冷乙醇（1300），可溶于甲醇、丙酮、醋酸乙酯、冰醋酸、吡啶等溶剂，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿中，几不溶于水。 芸香苷 R=葡萄糖鼠李糖 槲皮素 R=H（三）实验原理由槐花米中提取芸香苷的方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制，或根据芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液加酸酸化后则芸香苷游离析出。（四）实验内容1芸香苷的提取方法：水提取法 见书方法 ：碱溶酸沉法见书2芸香苷的精制见书4芸香苷、槲皮素及糖的检识取芸香苷、槲皮素少许，分别用8ml乙醇溶解，制成试样溶液，按下列方法进行实验，比较苷元和苷的反应情况。（1）Molish反应：取试样溶液各2ml，分置于两支试管中，加10-萘酚乙醇溶液1ml，振摇后倾斜试管45，沿管壁滴加1ml浓硫酸，静置，观察并记录两液面交界处颜色变化。（2）盐酸-镁粉反应：取试样溶液各2ml，分别置于两支试管中，各加入镁粉少许，再加入盐酸数滴，观察并记录颜色变化。（3）醋酸镁反应：取两张滤纸条，分别滴加试样溶液后，加1醋酸镁甲醇溶液2滴，于紫外灯下观察荧光变化，并记录现象。（4）三氯化铝反应：取两张滤纸条，分别滴加试样溶液后，加1三氯化铝乙醇溶液2滴，于紫外灯下观察荧光变化，并记录现象。（5）锆-柠檬酸反应：取试样溶液各2ml，分别置于两支试管中，各加2二氯氧锆甲醇溶液34滴，观察颜色，然后加入2柠檬酸甲醇溶液34滴，观察并记录颜色变化。（6）纸色谱检识支持剂：新华层析滤纸(中速,20CM7CM)试 样：自制芸香苷乙醇溶液自制槲皮素乙醇溶液对照品：芸香苷对照品乙醇溶液槲皮素对照品乙醇溶液展开剂：正丁醇-醋酸-水（415上层）或15醋酸溶液显色剂：1）在可见光下观察斑点颜色，再在紫外灯下观察斑点颜色2）喷雾三氯化铝试剂，置日光下及紫外灯下观察并记录斑点的颜色变化。（7）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na试 样：自制1芸香苷乙醇溶液自制1槲皮素乙醇溶液对照品：1芸香苷对照品乙醇溶液1槲皮素对照品乙醇溶液展开剂：氯仿-甲醇-甲酸（1551）显色剂：喷雾1三氯化铁和1铁氰化钾水溶液，临用时等体积混合（8）糖的纸色谱检识取糖的供试液做径向纸色谱，和已知糖液作对照，可得到与葡萄糖、鼠李糖相同Rf值的斑点。支持剂：新华层析滤纸（圆形）试 样：糖的供试液对照品：1葡萄糖对照品水溶液1鼠李糖对照品水溶液展开剂：正丁醇-醋酸-水（415上层）显色剂：喷雾苯胺-邻苯二甲酸试剂，于105加热10分钟或红外灯下加热1015分钟，显棕色或棕红色斑点。（五）实验说明及注意事项1在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷易于被热水溶出。2本实验直接用沸水由槐花米中提取芸香苷，收得率稳定，且操作简便。如用碱溶酸沉法提取，加入石灰乳可以达到碱性溶解的目的，又可除去槐花7米中所含的大量粘液质，但应严格控制其碱性pH89，不可超过pH10。如pH值过高，加热提取过程中芸香苷可被水解破坏，降低收得率。加酸沉淀时，控制pH34,不宜过低，否则芸香苷可生成yang盐而溶于水，也降低收得率。3在提取过程中，加入硼砂的目的是使其与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既保护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻二酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不溶于水），使芸香苷不受损失，提高收得率。（六）思考题1 黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷的提取还可用什么方法？2 酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐酸水解后处理更方便？3 本试验中各种色谱的原理是什么？解释化合物结构与Rf值的关系。4 试讨论苷类成分的检识程序。实验五 穿心莲内酯的提取分离与检识（一）目的要求学习中药中内酯类成分的提取分离及检识，通过实验要求：1掌握从穿心莲中提取、分离穿心莲内酯的操作方法。2学习穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物的制备。3熟悉穿心莲内酯类成分的性质和检识方法。4了解去除叶绿素的方法。（二）、主要化学成分的结构及性质穿心莲为爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees的全草。穿心莲中含有多种二萜类化合物，主要为穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱氧穿心莲内酯等。1穿心莲内酯(andrographolide) 又称穿心莲乙素。分子式C20H30O5，分子量350.44。无色方形或长方形结晶，味极苦。mp.230231，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶中，微溶于氯仿、乙醚、难溶于水、石油醚、苯。2新穿心莲内酯(neoandrographolide) 又称穿心莲丙素、穿心莲新苷。分子式C26H40O8，分子量480.58。无色柱状结晶，无苦味。mp.167168，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶中，微溶于水，较难溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚。22.5D3去氧穿心莲内酯(deoxyandrographolide) 又称穿心莲甲素。分子式C20H30O4，分子量334.44。无色片状（丙酮、乙醇或氯仿）或无色针状结晶（醋酸乙酯），味稍苦。mp.174175， -40（C=1,无水乙醇）。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶、氯仿，可溶于乙醚、苯中，微溶于水。4脱水穿心莲内酯(dehydroandrographolide) 分子式C20H28O4,分子量332.42。无色针状结晶（30或50乙醇），mp.204。易溶于乙醇、丙酮，可溶于氯仿，微溶于苯，几不溶于水。穿心莲内酯 去氧穿心莲内酯 新穿心莲内酯 脱水穿心莲内酯（三）实验原理本实验是利用穿心莲内酯类成分易溶于甲醇、乙醇、丙酮等溶剂的性质，选用乙醇为提取溶剂进行提取。穿心莲中含有大量叶绿素，故用活性炭吸附，除去叶绿素等脂溶性杂质。又根据穿心莲内酯与去氧穿心莲内酯在氯仿中溶解度不同而进行分离。也可利用穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯及新穿心莲内酯结构上的差异所表现的极性不同，用氧化铝柱色谱分离。（四）实验内容1 提取方法：略方法：略2 精制 略3 分离 略4穿心莲内酯类成分的检识（1）异羟肟酸铁反应 取穿心莲内酯结晶数毫克，加乙醇1ml溶解，加7盐酸羟胺甲醇溶液23滴，加10氢氧化钾甲醇溶液12滴使呈碱性，于水浴上加热2分钟，放冷后，加稀盐酸使呈酸性，加1三氯化铁溶液12滴，混匀，呈紫红色。（2）Legal反应 取穿心莲内酯结晶少许，加乙醇1ml溶解，加0.3亚硝酰铁氰化钠溶液24滴，加10氢氧化钠溶液12滴，呈紫色。（3）Kedde反应 取穿心莲内酯结晶少许，加乙醇1ml溶解，加碱性3,5-二硝基苯甲酸试剂2滴，呈紫色。（4）穿心莲内酯类成分的薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na试 样：自制穿心莲内酯乙醇溶液对照品：穿心莲内酯对照品乙醇溶液展开剂：氯仿-甲醇（91）氯仿-正丁醇-甲醇（212）显色剂：喷雾Kedde试剂，加热显色（五）实验说明及注意事项1穿心莲内酯类化合物为二萜类内酯，性质极不稳定，易氧化、聚合而树脂化。因此提取所用的穿心莲应是当年产的新药材，并且要未受潮变质的茎叶部分，否则内酯含量明显下降至极低，难以提取得到。2提取时，如用热乙醇加热回流提取穿心莲总内酯，能同时提出大量穿心莲中的叶绿素、树脂以及无机盐等杂质。使析晶和精制较为困难，因此本实验用冷浸法和超声波振荡法提取。3以超声波振荡法提取省时，浓缩析晶时脂溶性杂质少，易得到黄色结晶，得率高。4穿心莲内酯的析晶宜在含乙醇量稍高的情况下进行，此时晶形与结晶的纯度都较好。当溶液的含水量较高，或粘稠度太大时，往往不易析出结晶。（六）思考与练习1叶绿素除用活性炭吸附法去除外，还可采用哪些方法去除？2穿心莲总内酯的分离可采用哪些方法？试比较各种方法的优缺点。3根据穿心莲内酯类成分的结构，试判断其极性的强弱，在进行吸附薄层色谱时其Rf值大小如何？4Legal反应和Kedde反应的机理是什么？什么样的结构才有阳性反应？实验六 八角茴香油的提取分离与检识（一）目的要求学习挥发油的提取和各类组成成分的检识，通过实验要求：1掌握挥发油的水蒸气蒸馏提取法。2学习挥发油的一般检识及挥发油中固体成分的分离。3掌握挥发油中化学成分的薄层点滴定性检识。4了解挥发油单向二次薄层色谱检识。（二）主要化学成分的结构及性质八角茴香为木兰科植物八角茴香Illicium verum Hook.f.的干燥成熟果实。分布于福建、广东、广西、贵州、云南等省区。含挥发油49，一般约5（果皮中较多）、脂肪油约22（主要存在于种子中）及蛋白质、树胶、树脂等。挥发油中主要成分是茴香醚，约为总挥发油的8090，冷时常自油中析出，故称茴香脑。此外，尚含莽草酸及少量甲基胡椒酚、茴香醛、茴香酸等。 茴香醚（脑） 甲基胡椒酚 茴香醛 莽草酸 茴香酸1茴香脑(anethole) 又称大茴香醚、茴香烯、茴香醚。分子式C10H12O，分子量148.21。为白色结晶，mp.21.4，bp.235。与乙醚、氯仿混溶，溶于苯、醋酸乙酯、丙酮、二硫化碳及石油醚，几不溶于水。2莽草酸(shikimic acid) 又称毒八角酸。分子式C7H10O5,分子量174.15。无色针状结晶（甲醇醋酸乙酯），mp.190191。在100ml水中可溶解18g，100ml无水乙醇中可溶解2.5g，几乎不溶于氯仿、苯、石油醚。3甲基胡椒酚(methylchavicol) 分子式C10H12O，为无色液体，bp.215216。4茴香醛 (anisaldehyde) 分子式C8H8O2，有两种状态：棱晶，mp.36.3，bp.236；液体，mp.0，bp.248。5.茴香酸 (anisic acid) 分子式C8H8O3，为针状结晶，mp.184，bp.275280。（三）实验原理本实验是水蒸气蒸馏法提取挥发油的通法。挥发油的组成成分较复杂，常含有烷烃、烯烃、醇、酚、醛、酮、酸、醚等官能团。因此可以用一些检出试剂在薄层板上进行点滴试验，从而了解组成挥发油的成分类型。挥发油中各类成分的极性互不相同，一般不含氧的烃类和萜类化合物极性较小，在薄层色谱板上可被石油醚较好的展开；而含氧的烃类和萜类化合物极性较大，不易被石油醚展开，但可被石油醚与醋酸乙酯的混合溶剂较好的展开。为了使挥发油中各成分能在一块薄层色谱板上进行分离，常采用单向二次色谱法展开。（四）实验内容1茴香脑的提取分离取八角茴香50g，捣碎，置圆底烧瓶中，加适量水浸泡湿润，按一般水蒸气蒸馏法进行蒸馏提取。也可将捣碎的八角茴香置于挥发油测定器的烧瓶中，加蒸馏水500ml与数粒玻璃珠，连接挥发油测定器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并使溢流入烧瓶时为止。缓缓加热至沸，至测定器中油量不再增加，停止加热，放冷，分取油层（见图）。实图-1 挥发油测定器将所得的八角茴香油置冰箱中冷却1小时，即有白色结晶析出，趁冷滤过，用滤纸压干。结晶为茴香脑，滤液为析出茴香脑后的八角茴香油。2检识（1）油斑试验 取八角茴香油适量，滴于滤纸片上，常温下（或加热烘烤），观察油斑是否消失。（2）薄层色谱板点滴反应 取硅胶G薄层色谱板1块，用铅笔按表画线。将挥发油试样用510倍量乙醇稀释后，用毛细管分别滴加于每排小方格中，再将各种检识试剂用滴管分别滴于各挥发油试样斑点上，观察颜色变化。初步推测每种挥发油中可能含有化学成分的类型。实-表1 挥发油薄层板点滴反应 试剂试样试剂1三氯化铁试剂22,4-二硝基苯肼试剂3碱性高锰酸钾试剂4香草醛-浓硫酸试剂50.05溴酚蓝试剂6硝酸铈铵试剂1 2 3 4 5 6八角茴香油柠檬油丁香油薄荷油樟脑油桉叶油松节油空白对照（3）挥发油薄层色谱单向二次展开检识 取硅胶G-CMC-Na薄层板（6cm15cm）一块，在距底边1.5cm及8cm处分别用铅笔画起始线和中线。将八角茴香油溶于丙酮，用毛细管点于起始线上呈一长条形，先用石油醚（3060）-醋酸乙酯（8515）为展开剂展开至薄层板中线处取出，挥去展开剂，再放入石油醚（3060）中展开至接近薄层板顶端时取出，挥去展开剂后，分别用下列几种显色剂喷雾显色。1香草醛-硫酸试剂：可与挥发油产生紫色、红色等。荧光素-溴试剂：如产生黄色斑点，表明含有不饱和化合物。2,4-二硝基苯肼试剂：如产生黄色斑点，表明含有醛或酮类化合物。0.05溴甲酚绿乙醇试剂：如产生黄色斑点，表明含有酸性化合物。观察斑点的数量、位置及颜色，推测每种挥发油中可能含有化学成分的种类及数量。（五）实验说明及注意事项1通过观察馏出液的混浊程度来判断挥发油是否提取完全。最初的馏出液中含油量较多，明显混浊，随着馏出液中油量的减少，混浊度也随着降低，至馏出液变为澄清甚至无挥发油气味时，停止蒸馏。2提取完毕，须放冷，待油水完全分层后，再将油层放出，尽量不带出水分。3进行单向二次展开时，先用极性较大的展开剂展开至中线，然后再用极性较小的展开剂展开。在第一次展开后，应将展开剂完全挥干，再进行第二次展开，否则将影响第二次展开剂的极性，从而影响分离效果。4挥发油易挥发逸失，因此进行层析检识时，操作应迅速及时，不宜久放。5喷洒香草醛-浓硫酸显色剂时，应于通风橱内进行；用溴甲酚绿试剂显色时，应避免在酸性条件下进行。（六）思考题1从八角茴香中提取分离茴香脑的原理是什么？2利用点滴反应检识挥发油的组成优点是什么？3单向二次展开薄层色谱法检识挥发油中各成分时，为什么第一次展开所用的展开剂极性最好大于第二次展开所用的展开剂的极性？单向二次展开薄层色谱法有什么优点？ 实验七 丁香中挥发油的提取分离与检识（一）目的要求1掌握挥发油的一般化学检识及薄层色谱检识方法。2熟悉挥发油中酸性成分的分离方法。3学会应用挥发油含量测定器提取药材中挥发油及含量测定的操作方法。（二）主要化学成分的结构及性质丁香 别名：公丁香（花蕾）、母丁香（果实）。为桃金娘科植物丁香Eugenia caryophyllata Thunb.的干燥花蕾及果实。原产于非洲摩洛哥，现我国广东亦有种植。丁香花蕾含挥发油（即丁香油）1420，油中主要成分丁香酚，约7895，乙酰丁香酚约3及少量的丁香烯、甲基正戊酮、甲基正庚酮、香荚兰醛等。另尚含齐墩果酸、鞣质、脂肪油及蜡。果实含丁香油29。丁香酚(eugenol) 分子式C10H12O2，分子量164.20。无色或苍黄色液体，bp.225。几不溶于水，与乙醇、乙醚、氯仿可混溶。 丁香酚（三）实验原理本实验用水蒸气蒸馏法提取丁香挥发油。利用丁香酚为苯丙素类衍生物，具有酚羟基，遇到氢氧化钠水溶液即转为钠盐而溶解，酸化时又可游离的性质将丁香酚从挥发油中分离出来。并利用可与三氯化铁试剂发生反应的性质进行检识，也可进行薄层色谱检识。（四）实验内容1丁香油的提取 取丁香50g，捣碎，置于烧瓶中，加适量水浸泡湿润，按一般水蒸气蒸馏法进行蒸馏提取。也可将捣碎的丁香置于挥发油测定器的烧瓶中，加蒸馏水300ml与数粒玻璃珠，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，精确加入1ml二甲苯，然后连接回流冷凝管。加热蒸馏30分钟后，停止加热，放置15分钟以上，读取测定器中二甲苯油层容积，减去开始蒸馏前加入二甲苯的量，即为挥发油的量，再计算出丁香中挥发油的含量。2丁香酚的分离 将所得的丁香油置于分液漏斗中，加10氢氧化钠溶液80ml提取，并加150ml蒸馏水稀释，分取下层水溶液，用10盐酸酸化使丁香酚呈油状液体，分取油层，用无水硫酸钠脱水干燥，得纯品丁香酚。3检识 取少许丁香酚置于试管中，加1ml乙醇溶解，加23滴三氯化铁试剂，显蓝色。4薄层色谱检识 将提取得到的丁香油用乙醚配制成每1ml含0.02ml丁香油的供试液。另取丁香酚对照品，加乙醚制成每1ml含20微升的对照品溶液，吸取上述两种溶液各5微升，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以石油醚（6090）醋酸乙酯（91）为展开剂，展开，取出，晾干，喷洒5香草醛硫酸溶液，于105加热烘干。在供试品色谱与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。（五）实验说明及注意事项1采用挥发油含量测定器提取挥发油，可以初步了解该药材中挥发油的含量，但所用的药材量应使蒸出的挥发油量不少于0.5ml为宜。2挥发油含量测定装置一般分为两种，一种适用于相对密度小于1.0的挥发油测定。另一种适用于测定相对密度大于1.0的挥发油。药典规定，测定相对密度大于1.0的挥发油，也在相对密度小于1.0的测定器中进行，其作法是在加热前，预先加入1ml二甲苯于测定器内，然后进行水蒸气蒸馏，使蒸出的相对密度大于1.0的挥发油溶于二甲苯中。由于二甲苯的相对密度为0.8969，一般能使挥发油与二甲苯的混合溶液浮于水面。由测定器刻度部分读取油层的量时，扣除加入二甲苯的体积即为挥发油的量。3用挥发油测定器提取挥发油，以测定器刻度管中的油量不再增加作为判断是否提取完全的标准。（六）思考题1从丁香中提取分离丁香酚的原理是什么？2除可利用水蒸气蒸馏法提取挥发油外，还可采用什么方法提取挥发油？原理是什么？实验八 甾体皂苷元的提取分离与检识（一）目的要求学习从药材中提取、精制和检识甾体皂苷元，通过实验要求：1掌握用酸水解，有机溶剂提取和精制皂苷元的方法。2熟悉皂苷及皂苷元的性质和检识方法。（二）主要化学成分的结构及性质甾体皂苷主要存在于百合科、薯蓣科、龙舌兰科等植物中。某些甾体皂苷元如薯蓣皂苷元、替告皂苷元及海可皂苷元等是制药工业中合成甾体激素类药物及甾体避孕药的重要原料。穿山龙为薯蓣科植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponica Mak.的干燥根茎。具有舒筋活血、消食利水、祛痰截疟的功效。主治风寒湿痹、慢性气管炎、消化不良、劳损扭伤、疟疾、痈肿。常被作为提取薯蓣皂苷元的原料，穿山龙总皂苷水解可得1.52.6薯蓣皂苷元。1薯蓣皂苷(dioscin) 分子式C45H72O16，分子量869.08，针状结晶，mp.275277（分解），可溶于甲醇、乙醇、醋酸，微溶于丙酮、戊醇，难溶于石油醚、苯，不溶于水。 薯蓣皂苷 2薯蓣皂苷元(diosgenin) 又称薯蓣皂素,分子式C27H42O3，分子量414.61。为白色结晶性粉末（乙醇），mp.206208，可溶于常用的有机溶剂及醋酸中，不溶于水。（三）实验原理本实验是根据药材中的薯蓣皂苷，经酸加热水解可产生薯蓣皂苷元和糖。因甾体皂苷元不溶于水，可溶于有机溶剂的性质，用石油醚连续回流提取总皂苷元，再用活性炭吸附脱色精制，得到精制薯蓣皂苷元。（四）实验内容1薯蓣皂苷元的提取、精制略2薯蓣皂苷与皂苷元的检识（1）泡沫试验：取穿山龙的水浸液2ml，置于小试管中，用力振摇1分钟，应产生多量泡沫，放置10分钟，泡沫量应无显著变化。（2）溶血试验：取清洁试管二支，一支加入穿山龙的水浸液0.5ml，另一支加入蒸馏水0.5ml作对照，然后各加入0.8氯化钠水溶液0.5ml，摇匀，再向每支试管中加入红细胞悬浮液1ml，充分摇匀，静置，观察溶血现象。如试管中溶液为透明的鲜红色，管底无红色沉淀物为全部溶血；如试管中溶液透明但无色，管底沉着大量红细胞，振摇立即发生混浊为不溶血。（3）醋酐-浓硫酸反应：取薯蓣皂苷元结晶少许，置白瓷板上，加醋酐数滴溶解后，加浓硫酸1滴，观察颜色变化。（4）三氯醋酸反应：取薯蓣皂苷元结晶少许，置于干燥试管中，加等量固体三氯醋酸，于6070恒温水浴中加热数分钟后，观察颜色变化。（5）磷钼酸试验：取薯蓣皂苷元结晶少许，溶于乙醇中，用毛细管点于滤纸片或硅胶薄层板上，滴加磷钼酸试剂于斑点上，110加热，观察颜色变化，并与空白试剂作对照。（6）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na板试 样：薯蓣皂苷元精制品乙醇溶液对照品：薯蓣皂苷元对照品乙醇溶液展开剂：氯仿-丙酮（937）显 色：喷5磷钼酸乙醇溶液，110加热10分钟显色。（五）实验说明及注意事项1穿山龙经酸水解后应充分洗涤呈中性，以免烘干时被碳化。2在干燥水解后的原料时，应注意经常翻动，以缩短干燥时间。3石油醚极易挥发和燃烧，必须用水浴加热且水浴温度不宜过高，以能使石油醚微沸即可，并应加大冷凝水流速，以便冷凝完全。4本实验也可用石蒜科龙舌兰属植物剑麻Agaue sisalana Perrine为原料提取甾体皂苷元，此植物南方各省有种植，将剑麻叶片刮去纤维，残渣压榨取汁，将汁液自然发酵2周（酶水解得其次生苷），布袋滤过收集沉淀，晒干，以干渣为原料，用硫酸水解，再用石油醚提取得甾体皂苷元。（六）思考题1从植物中提取甾体皂苷元可用什么方法？要注意什么问题？2请设计从其他含甾体皂苷的药材中提取分离皂苷元的方法，并说明原理。实验九 防己中粉防己碱的提取分离与检识（一）目的要求学习生物碱类成分的一般提取分离法，通过实验要求：1掌握生物碱的溶剂提取法和粉防己碱与防己诺林碱的分离方法。2熟悉生物碱的一般理化性质。3熟悉粉防己碱和防己诺林碱的检识方法。4掌握连续回流法（索氏提取器）、萃取法、结晶法等的基本操作过程及注意事项。（二）主要化学成分的结构及性质防己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore的干燥根。总生物碱含量约为1.52.3，主要为粉防己碱和防己诺林碱。1粉防己碱(tetrandrine) 又称粉防己甲素，分子式C38H42N2O6，在防己中的含量约为1，为无色针状结晶（乙醚），mp.217218。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有机溶剂，几乎不溶于水和石油醚。 粉防己碱 R=CH3防己诺林碱 R=H2防己诺林碱(fangchinoline) 又称粉防己乙素，分子式C37H40N2O6，在防己中的含量约为0.5，六面体粒状结晶（丙酮），mp.237238。溶解度与粉防己碱相似，但因较粉防己碱多一个酚羟基，故极性较粉防己碱稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己碱，可利用此性质相互分离。（三）实验原理本实验是根据粉防己碱和防己诺林碱游离时难溶于水，易溶于氯仿，成盐后易溶于水，难溶于氯仿的性质提取得到总生物碱。再利用两者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分离。（四）实验内容1防己总生物碱的提取 略2防己总生物碱的精制 略3粉防己碱和防己诺林碱的分离 略4防己生物碱的检识（1）生物碱沉淀反应 取粉防己碱的盐酸水溶液8 ml分置于4支试管中，分别滴加下列试剂23滴，观察并记录有无沉淀产生及颜色变化。碘化铋钾试剂 碘化汞钾试剂 碘碘化钾试剂 硅钨酸试剂（2）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na板试 样：自制粉防己碱乙醇溶液 自制防己诺林碱乙醇溶液对照品：粉防己碱标准品乙醇溶液 防己诺林碱标准品乙醇溶液展开剂：氯仿-丙酮-甲醇（611）氨气饱和显色剂：喷雾改良碘化铋钾试剂（五）实验说明及注意事项1提取总生物碱时，回收乙醇至稀浸膏状即可，不宜过干，否则当加入1盐酸水溶液后，易结成胶状团块，影响提取效果。2两相溶剂萃取时，应注意不可用力振摇，应将分液漏斗轻轻旋转摇动，以免产生乳化现象，影响分层，但萃取振摇的时间需适当延长。且不可因怕产生乳化现象而不敢振摇或为预防乳化现象产生而减少振摇的程度和时间，从而造成萃取分离不完全。要力求萃取完全，提尽生物碱，防止生物碱丢失过多而影响收得率。倘若发生严重乳化现象难以分层时，可用以下方法解决：将难以分层的乳化液置于三角烧瓶中，取定性滤纸少许揉成蓬松的团块，放入乳化液中，用玻璃棒搅拌片刻后，乳化液中的粘稠物质被吸附在滤纸团的周围，从而削弱和破坏了乳化液的稳定性，克服了乳化现象，因而得到澄清溶液。然后滤过，必要时可再加入适量溶剂洗涤滤纸团，滤过，合并滤液即可。3检查生物碱是否萃取完全的方法，通常采用薄层色谱、纸上斑点试验或生物碱沉淀反应。取最后一次氯仿萃取液数滴，水浴上蒸去溶剂，残留物加5盐酸溶液0.5ml溶解后，傾入试管中，加碘化铋钾试剂12滴，如无沉淀或无明显混浊，则表示生物碱已提取完全或基本被提取完全，否则应继续萃取。也可取最后一次氯仿萃取液1滴，滴于一薄层板或滤纸片上，干燥后，喷洒改良碘化铋钾试剂，观察有无红棕色斑点出现，若无红棕色斑点，表示已萃取完全。（六）思考题1粉防己碱、防己诺林碱在结构与性质上有何异同点？实验过程中，应怎样利用它们的共性及个性进行提取及分离？请设计方案。2分离水溶性与脂溶性生物碱的常用方法有哪些？3萃取过程中怎样防止和消除乳化？实验十 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与检识（一）目的要求学习提取精制和检识黄连中的小檗碱，通过实验要求：1掌握小檗碱的结构特点和理化性质。2熟悉浸渍法、盐析法、结晶法和薄层色谱法的基本操作过程及注意事项。3了解盐酸小檗碱的检识方法。（二）主要化学成分的结构及性质黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao、峨嵋野连Coptis omeiensis(Chen)C.Y.Cheng或云连Coptis teeta Wall.的根茎。黄连的根状茎含多种生物碱，主要为小檗碱（黄连素），约58，其次为黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱、药根碱、木兰碱等。叶含小檗碱1.49。小檗碱(berberine)：分子式(C20H18NO4)，分子量336.37。系季铵生物碱。游离小檗碱为黄色针状结晶（乙醚），mp.145，能缓缓溶于冷水（120），可溶于冷乙醇（1100），易溶于热水或热乙醇，难溶于丙酮、氯仿、苯，几乎不溶于石油醚。盐酸小檗碱(C20H17NO4HCl2H2O)，为黄色结晶，微溶于冷水（1500），易溶于沸水，几乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。硫酸小檗碱( (C20H18NO4)2SO43H2O)，溶于水（130），溶于乙醇。重硫酸小檗碱(C20H18NO4HSO4)为黄色结晶或粉末，溶于水（1150），微溶于乙醚。 小檗碱 木兰碱（三）实验原理根据小檗碱的盐酸盐在水中溶解度小，而小檗碱的硫酸盐水中溶解度较大。因此，从植物原料中提取小檗碱时常用稀硫酸水溶液浸泡或渗漉，然后向提取液中加入10的食盐，在盐析的同时，也提供了氯离子，使其硫酸盐转变为氯化小檗碱（即盐酸小檗碱）而析出。（四）实验内容1盐酸小檗碱的提取、精制 略2盐酸小檗碱的检识（1）浓硝酸或漂白粉试验：取盐酸小檗碱少许，加4ml稀硫酸溶解，分置于两支试管中。一支试管滴加浓硝酸数滴，即显樱红色。另一支试管加少许漂白粉，也立即显樱红色。（2）丙酮试验：取盐酸小檗碱约50mg，加蒸馏水3ml缓缓加热溶解后，加氢氧化钠试剂2滴，显橙色。溶液放冷后，加丙酮4滴振摇，即发生混浊。放置后析出黄色丙酮小檗碱沉淀。（3）没食子酸试验：取盐酸小檗碱约20mg，置白瓷皿中，加硫酸1ml溶解后，加5没食子酸的乙醇溶液5滴，置水浴上加热，即显翠绿色。（4）薄层色谱检识薄层板：中性氧化铝（软板）试 样：自制盐酸小檗碱乙醇溶液对照品：盐酸小檗碱对照品乙醇溶液展开剂：氯仿甲醇（91）显 色：自然光下观察黄色斑点或紫外灯下观察荧光（5）纸色谱检识支持剂：新华层析滤纸（中速、20cm7cm）试 样：自制盐酸小檗碱乙醇溶液对照品：盐酸小檗碱对照品乙醇溶液展开剂：正丁醇-醋酸-水（411）显 色：紫外灯下观察荧光（五）实验说明及注意事项1浸泡黄连粗粉的硫酸水溶液，一般为0.20.3为宜。若硫酸水溶液浓度过高，小檗碱可成为重硫酸小檗碱，其溶解度（1150）明显较硫酸小檗碱（130）小，从而影响提取效果。硫酸水溶液浸出效果与浸渍时间有关，有报道，浸渍12小时约可浸出小檗碱80，浸渍24小时，可浸出92。常规提取应浸渍多次，使小檗碱提取完全，本实验中只收集第一次浸出液。2进行盐析时，加入氯化钠的量，以提取液量的10（g/v）计算，即可达到析出盐酸小檗碱的目的。氯化钠的用量不可过多，否则溶液的相对密度增大，造成析出的盐酸小檗碱结晶呈悬浮状态难以下沉。盐析用的氯化钠用市售的精制食盐，因粗制食盐混有较多泥沙等杂质，影响产品质量。3在精制盐酸小檗碱过程中，因盐酸小檗碱放冷极易析出结晶，所以加热煮沸后，应迅速抽滤或保温滤过，防止溶液在滤过过程中冷却，析出盐酸小檗碱结晶阻塞滤材，造成滤过困难，减低提取率。4本实验流程也适用于以三棵针、黄柏为原料提取小檗碱，但因其小檗碱含量较低，应加大药材量，以150g以上为宜。（六）思考题1怎样从黄连中提取分离盐酸小檗碱？原理是什么？2试述小檗碱的检识方法。3用薄层色谱法检识小檗碱时，为什么常选用氧化铝为吸附剂？如果选用硅胶作吸附剂，怎样操作才能达到较准确的结果。实验十一 应用薄层色谱法检识中药制剂（一）目的要求学习中药制剂的鉴别方法，通过实验要求：1掌握薄层色谱法的操作技术及分离原理。2掌握中药制剂鉴别的一般程序及定性检识的原理。3熟悉检识其所含化学成分的方法与实验技术。（二）实验原理本实验是根据中药制剂牛黄解毒片中的主要成分或特征成分的性质，选用适当的溶剂和方法对试样进行预处理，尽量排除干扰物质，达到提高待测成分或特征成分的相对浓度，以利在进行薄层色谱鉴别时提高色谱清晰度，实现应用薄层色谱检测技术鉴别和控制中药制剂质量。（三）实验内容牛黄解毒片为包衣片。处方为：牛黄50g，雄黄50g，石膏200g，大黄200g，黄芩150g，桔梗100g，冰片25g，甘草50g。以上八味药，雄黄水飞或粉碎成极细粉；大黄粉碎成细粉；牛黄、冰片研细；其余黄芩等四味加水煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入大黄、雄黄粉末，制成颗粒，干燥，再加入牛黄、冰片粉末，混匀，压制成1000片，包衣即得。1牛黄的鉴别（1）供试液制备；取本品10片，刮去包衣，研碎，加10ml氯仿研磨，滤过，再用10ml氯仿浸洗滤渣，合并滤液，浓缩至1ml为供试液。（2）对照液制备：取胆酸0.001g溶于1ml氯仿中，作为对照品溶液。取缺牛黄的模拟牛黄解毒片（相当于10片），按供试液制备法处理，得阴性对照液。（3）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na样 品：牛黄解毒片供试液对照品：胆酸对照液模拟牛黄解毒片对照液展开剂：正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（63211）显色剂：喷雾5磷钼酸乙酸溶液，110加热10分钟2冰片的鉴别（1）供试液制备：取本品2片，刮去包衣，研碎，加4ml甲醇-氯仿（11），室温下浸渍30min，时加振摇，滤过，滤液使成5ml，作为供试液。（2）对照液制备：取冰片适量，加甲醇-氯仿（11）溶解，制成1ml含4mg的溶液。取缺冰片的模拟牛黄解毒片（相当于2片），按供试液制备法处理，得阴性对照液。（3）薄层色谱检识薄层板：硅胶G试 样：牛黄解毒片供试液对照品：冰片对照液，模拟牛黄解毒片对照液展开剂：石油醚-醋酸乙酯-苯（1824）显色剂：喷雾5磷钼酸乙醇溶液，110加热显色3大黄的鉴别（1）供试液制备：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml甲醇回流提取15分钟，冷后滤过，滤液使成5ml，作为供试液。（2）对照液制备：取1g大黄药材，同供试液制备法制成对照液。分别取大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量，加乙醇溶解成1ml对照品溶液。取缺大黄的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法制得阴性对照液。（3）薄层色谱检识薄层板：硅胶CMC-Na试 样：牛黄解毒片供试液、对照品：大黄药材对照液，模拟牛黄解毒片对照液大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照液展开剂：石油醚（6090）-甲酸乙酯-甲酸（1551）上层溶液显色剂：显色前后置日光及紫外光（365nm）下观察，再喷雾0.5醋酸镁乙醇溶液显色。4黄芩的鉴别（1）供试液的制备：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml甲醇回流提取15分钟，放冷后滤过，滤液使成5ml，作为供试液。（2）对照液的制备：取1g黄芩，同供试液制备法处理，得对照液。取黄芩苷对照品适量，加乙醇溶液1ml含1mg的对照品溶液。取缺黄芩的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法制