益生菌的检测方法

v1.0可编辑可修改益生菌的检测方法一：主题内容与适用范围本标准规定了益生菌的检测方法。二：原理细菌经过一定倍数的稀释后，能在典型的培养基上培养长成，典型的菌落，通过计数，可以得到每1ml本产品中活菌数的量。三：设备和器材分析天平（）100g架盘天平震荡器恒温培养箱高压灭菌锅 超净工作台 平皿（直径为9cm） 试管（18*180mm 吸管（容量为1ml）三角瓶（容量为250ml）酒精灯 试管架 移液枪（量程为1000口）四：试剂与溶液%灭菌生理盐水，营养琼脂，纯化水。五：操作步骤：1:采样采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具。采样后应尽快检验，否则将样品放在低温干燥处保存。2:试样的稀释及培养准确称取本产品1.0g （精确至0.0002g）,加入内装99ml的灭菌生理盐水和几棵玻璃珠的三角瓶中，在震荡器上以（200r/min ）震荡30min,使样品充分混匀，制成1: 100 的均匀稀释液。吸取上述的稀释液1ml,加入装有9ml无菌生理盐水的试管中，（注意管尖端不要触 及管内稀释液）振荡摇匀，制成1: 1000稀释液。按操作至样品溶液稀释到1*10-6备用。每一次操作必须用无菌吸管，吸管不可重复使用。准确吸取上述1*10-6样品溶液，接种在事先制成的营养琼脂平板培养基上，再用无菌接种环在平板上涂抹均匀。做 3个平行样和一个空白对照样。将涂抹好的平板放与超净工做台上30分钟，使菌液渗透于培养基内，然后将平板倒置，在37c培养箱内培养24小时至长出典型菌落即可计数。2:菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必需时借助放大镜检查，以防遗漏。在计数出各平板菌数后，求出同一稀释级的平板的平均数。3 :菌落计数的报告以三个重复的菌落数相差不悬殊，每个平皿菌落数在30-300之间来确定此操作的准 确性，否则需要重新操作。最终菌落总数取三个平皿中的菌落总数的平均数。以上均在 无菌条件下操作。4 :稀释度的选择应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。如果有两个稀释度，其生长的菌落数都在 30-300之间，视两者的比值来确定，如果其比值小于2,应报告其平均数；如果小于 2,则报告其中较小的数字。如果所有的稀释度平均菌落数均大于 300,则应按照稀释度最高的平均菌落数乘以 稀释倍数报告。如果所有的稀释度平均菌落数均小于 30,则应按照稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告。如所有稀释度均无菌落生长，则以小于 1乘以最低稀释倍数报告之。如所有稀释度平均菌落数均不在 30-300之间，其中一大部分大于300或小于30时，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。5:结果报告菌落在100以内时，按其实有数报告；大于100时，采用两位有效数字，其后面数值, 以四舍五入的方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可采用10的指数来表示。六：计算公式X=A X10B其中：X-每毫升样品中益生菌落数A-最终计数的菌落总数B稀释倍数耐酸试验：你可以模拟机体内环境。控制一定的温度和酸度，让菌液在水浴中作用一定时间，检测前后的菌落数。可作抑菌、杀菌试验。和药敏试验和消毒剂的试验差不多。 3