样品采集及注意事项课件

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,1,样品采集,及注意事项,益阳市兽医局,样 品,益阳市兽医局,益阳市兽医局,一、样品存在的问题,样品的真实性（假样品，一个,或几个,样品分开,、混合,）,，浪费检测试剂。,样品的质量（溶血，腐败，反复冻融）,。,采样单填写的信息不全（畜禽日龄，免疫情况等）,组织样品采集的太,少,，不,具有代表性,。,各,种类的样品用一个采样单,填写,。,样品编号不能追溯回去。,样品编号没有标准，经常是从,1,开始，时间久了无法区分。,样品采集后没有及时处理，导致溶血等。,益阳市兽医局,溶血程度不一的血清样,益阳市兽医局,二、样品的种类,血液样品：血清，全血抗凝血，血浆,组织样品：心肝脾肺肾脑，淋巴结，扁桃体,粪便样品：新鲜，湿润的,生殖道和精液样品,皮肤样品：皮屑,分泌液和渗出液样品：舌面或蹄部的水泡液,益阳市兽医局,血液样品,血液：最常用的样品，可以做血清学试验的样品，也可以作为病原学试验的样品。,全血（抗凝血）：抗凝剂有肝素，阿氏液，枸橼酸钠和,4%EDTA,，或者用玻璃珠，脱纤维蛋白。,血清：不加抗凝剂的血液，在室温静置,24h,（或,371h,）待血液完全凝固后，析出上清即为血清。,血浆：抗凝血混匀后，静置，上清即为血浆。,益阳市兽医局,检测样品的分类,细菌学检测样品：采集发病典型或刚死亡的整体动物送实验室为最好。无菌采集，冷藏，保存液中不加任何抗生素。,病毒学检测样品：病毒检测应在动物病初、体温升高期间采集。以组织脏器、血液、粪便等样品为主。冷藏或冷冻，保存液中加抗生素。,血清学检测样品：静脉采血,3 ml,左右，注射器内留一定空间，静置过程或已凝固的血液应低温冷冻，以免溶血。短时间内，可在,4,度左右保存；如时间较长应冻结保存，注意不能反复冻融,.,病理学检测样品：保证样品新鲜，应选择病变最典型最明显的部位，且连同部分健康组织一并采集。浸泡于酒精或福尔马林溶液中，冷藏保存和运输。,益阳市兽医局,几种重要疫病的采样时机,禽流感、新城疫：发病初期采全血，泄殖腔,咽喉棉拭子；后期采集新鲜粪便；剖剪后的气管，肺脏，肾脏等,口蹄疫：全血，水泡皮，水泡液，,O/P,液及口腔分泌物和咽喉棉拭子,猪瘟，猪伪狂犬，蓝耳病：全血，血清，组织病料：肺脏，脾脏，淋巴结，扁桃体，流产胎衣等，新鲜精液或冷冻精液,猪流感：在发热期采集鼻咽棉拭子和肺组织病料。,益阳市兽医局,三、高品质样品的特征,样品标记明确,样品新鲜,采样单填写规范,样本,样品数量适当,益阳市兽医局,四、如何得到高质量的样品,高质量样品,采样前准备,采样的时效性,样本的数量,样品的标记,样品的保存,和运输,益阳市兽医局,1,、采样前的准备,-,器具,采样工具：一次性注射器，解剖刀，剪刀，镊子，酒精灯，酒精棉，棉签，保定动物专用工具,样品存放用具：塑料离心管（,1.5,，,2,，,5ml,），自封口样品袋，试管架，塑料样品盒，胶布，封口膜，冰袋。,防护用具：一次性手套，鞋套，口罩，隔离衣等。,记录用具：不干胶标签、圆珠笔、油性记号笔、采样单、记录本等,益阳市兽医局,2,、采样前准备,采样技术,血液样品：牛、马、羊从颈静脉或尾静脉采血；猪从前腔静脉采血，用量少时也可从耳静脉抽取；家禽从翅静脉抽取。,棉拭子样品：泄殖腔，咽喉，鼻腔,水泡皮及水泡液：,O/P,液：保定，左手拉出舌头或从嘴的一侧按住舌头，右手缓慢放入探杯。,组织样品：解剖，洁净取样。,益阳市兽医局,血液样品的分离方法,抗凝血：采血前在试管或注射器内按比例加抗凝剂，运输时必须减少震荡以免溶血。,非抗凝血：分离血清,血清析出好的因素：,容器：,玻璃试管优于塑料离心管；,斜面：,与空气接触面要大。,温度：,最佳温度是体温；,时间：,室温静置最短,2,小时；,离心：,转速要低，,2000,转。,胶冻状血清的成因：采血前刚喂食,(,没有空腹,),；凝血时间不够；脂肪血（营养过剩）,益阳市兽医局,粪便、棉拭子和,O/P,液样品的采集,泄殖腔拭子的采集：将棉拭子插入泄殖腔内约,1.5-2cm,旋转后沾上粪便。,咽喉拭子、鼻腔拭子的采集：将灭菌的干棉拭子插入口腔至咽的后部或鼻腔，轻轻擦拭并慢慢旋转将拭子拔出，将棉拭子放入缓冲液内。,O/P,液是从动物食道,/,咽喉刮取的黏膜样品，用特制的食道探环刮取黏膜，放入样品保存液中。,益阳市兽医局,水泡液及水泡皮的采集,用,75%,酒精消毒水泡表皮，用灭菌生理盐水擦去酒精，用注射器穿刺吸取水泡液，置于含抗生素的,PBS,缓冲液中；然后用剪刀将水泡皮剪下，放入含抗生素的,PBS,缓冲液中。,益阳市兽医局,3,、采样的准确性和时效性,代表性：应该考虑到整个监测区域的地理分布，选取有代表性的点。如动物品种分布、日龄、饲养密度、地势特点、交通特点、动物迁徙习性等因素。如禽流感采样时，疫区交接处，野鸟迁徙途径，水禽家禽混合饲养处等。,时效性：如抗体监测，免疫后,14,天左右才可以采集；监测病原时，注意排毒时间和病原的易嗜细胞和组织，在监测时要根据不同时期，采集不同部位的组织进行检测。如口蹄疫病毒首先是在咽喉部和肺上皮细胞扩增，然后进入血液，通过分泌物、水泡排毒。,益阳市兽医局,样本,样品的数量,样本：总体中的一部分代表；样品：检测的原始材料。,概率抽样（随机抽样）：是按照随机原则进行抽样，不加主观因素，组成总体的每个单位都有被抽中的概率（非零概率）,比例抽样：按养殖规模成比例抽样。,多阶段抽样：全市分区，每个区随机选县，每个县选乡镇，每个乡镇选养殖场。,样本量，符合统计学要求，决定因素：疫病在群体中的发生率，可信水平，检测方法 的敏感性和特异性。,样品的量要足够检测使用。,益阳市兽医局,4.1,样品的包装和编号,单个样品的包装,动物血清、全血、棉拭子、水泡液，加有,PBS,的粪便等液体样品用用,1.5ml,，,2ml,，,5ml,带盖的塑料离心管；,组织病料等固体样品用自封口样品袋，或放入,1.5ml,及,2ml,塑料离心管；,每次送样的同一种样品进行编号，每个样品都要有唯一编号，标识清楚，不易丢失。,每组样品的包装,以镇或每个采样点为单位分组，每组一个大包装，用自封口样品袋包装，并贴有标签，注明样品名、样品编号、采样日期等。,益阳市兽医局,4.2,样品的记录,单个样品的小塑料离心管外用油性记号笔标记,每组样品自封袋外用钢笔填写样品标签和封条,编号与采样单一致，具有唯一性和可追溯性。,填写采样单：被采样畜主的联系方式和采样人的联系方式；被采样动物的健康状况和免疫状况；被采样动物的联系方式（畜种，日龄，标识号等）；样品运输方式；日期，签名（采样人，畜主）。,每类样品要求填写一份采样单。,益阳市兽医局,5,、样品追溯,样品编号和填写采样单目的是对检测结果的追溯。,动物防疫法,规定动物免疫抗体监测、动物疫病病原监测、动物疫病应急流行病学调查等均实行可追溯制度。,追溯内容：家禽来源、饲养周期、防疫情况、免疫程序、疫苗及兽药的使用情况。,抗体监测要求追溯到每栋，每舍。,病原学监测必须追溯到每只，每头。,益阳市兽医局,6.1,样品的保存,血清：,4-8,冷藏，不超过,2,周；,抗凝血：,4-8,冷藏，不超过,1,周；,病毒检验材料：短时间可冷藏，否则须,-20,或,-70,以下保存，无条件的可置灭菌,50%,甘油,-PBS,液中冷藏，不宜反复冻融。,细菌检验病料：冷藏，不宜冷冻，可置灭菌的,30%,甘油,-PBS,液,/,盐水中冷藏。,所有冻存样品忌反复冻融,益阳市兽医局,6.2,样品的运输,关键是：容器（密闭）温度（低温）时间（越快越好）,容器：密封容器，防止渗漏，造成环境污染或疫情扩散。,温度：样品应在低温下保存和运输（放置冰块）。,（拭子样品和组织样品应作暂时的冷藏或冷冻处理，然后运送。血清样品，若,24h,内运达实验室，冷藏运输；若超过,24h,，要先冷冻后，再冷藏运输，途中不能超过,48h,。）,时间：若能在,4h,内送到实验室，可用冰袋冷藏运输。如果超过,4h,，应置于,-30,冷冻处理，再在保温箱内加冰袋运输，在,24h,内送到。若,24h,不能送到实验室，则运输过程中环境温度应保持在,-20,以下（干冰）。,益阳市兽医局,五、采样时注意事项,注意人畜共患病：做好自身防护，不直接接触动物样品。,注意人为的传播疫病：采样工具和防护用品，随身带走，统一消毒。,采样动物的健康状况（饮食，免疫，用药等）,采集的病料应该包装好，防止污染环境，防止无意的传播疾病，做好环境消毒和病害肉的处理。,对于突发事件中急性死亡的动物，如怀疑是炭疽，不能随意解剖，可以采血，或局部解剖做触片。,采 血 方 法,益阳市兽医局,益阳市兽医局,一、禽的采血方法,1.,雏鸡心脏采血,左手抓鸡，术者手持采血针，平行颈椎从胸腔前口插入回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。,2.,成年禽心脏采血,成年禽只采血可取侧卧或仰卧保定。,(1),侧卧保定采血 助手抓住禽两翅及两腿，右侧卧保定，在触及心搏动明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的,1,2,处消毒，垂直或稍向前方刺人,2,3,厘米，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。,(2),仰卧保定采血 胸骨朝上，用手指压离嗉囊，露出胸前口，用装有长针头的注射器，将针头沿其锁骨俯角刺入，顺着体中线方向水平穿行，直到刺入心脏。,益阳市兽医局,3.,翅静脉采血,在翅下静脉处消毒，手持采血针，从无血管处向翅静脉丛刺入，见有血液回流，即把针芯向外拉使血液流入采血针。,也可保定禽只，使翅膀展开，露出腋窝部，用消毒棉消毒。拇指压近心端，待血管怒张后，用装有细针头的注射器，由翼根向翅方向平行刺入静脉，方向反了？放松对近心端的按压，缓慢抽取血液。采血完毕用棉球按压止血。,益阳市兽医局,益阳市兽医局,二、猪的采血方法,1.,耳缘静脉采血,站立保定，助手用力在耳根捏压静脉的近心端，手指轻弹后，用酒精棉球反复涂擦耳静脉使血管怒张。沿血管刺入，见有血液回流，缓慢抽取所需量血液或接入真空采血管。用棉球按压止血。,2.,前腔静脉采血,(1),站立保定，保定器保定让猪头仰起，露出右腋窝，从右侧向心脏方向刺人，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。,(2),仰卧保定，把前肢向后方拉直。如何操作？是否向上向外一般用装有,20,号针头的注射器采血，其穿刺部位在胸骨端与耳基部连线上胸骨端旁,2,厘米的凹陷处，向后内方与地面呈,60,度角刺入,2,3,厘米，当进入约,2,厘米时可一边刺入一边回抽针管内芯；刺入血管时即可见血进入针管内，采血完毕，局部消毒。,益阳市兽医局,益阳市兽医局,猪前腔静脉采血,益阳市兽医局,益阳市兽医局,益阳市兽医局,1.,选取合适的针筒和针头,通常都是用一次性,5,毫升注射用针筒。由于猪的大小不同，前腔静脉的深浅不一样，要求使用的针头也是不一样的。,若针头太短，刺不到前腔静脉；针头太长，可能刺穿整条前腔静脉，也是采不到血的。,种公母猪选用,16#100,毫米针头；,30,千克以上的中猪选择用,12#72,毫米针头；,10,30,千克小猪选用,9#50,毫米针头；,10,千克以下乳猪选用,9#30,毫米针头。,益阳市兽医局,2.,猪只的保定,种公母猪需要用保定绳固定，并且要求尽可能吊得高一点，使猪的头颈与水平面呈,30,度以上（如图），既方便采血人员察看采血部位，又使前腔静脉向外突出，静脉血充胀。,20,千克以上的中大猪，由,1,2,名饲养员用捉猪器,(,或保定绳,),拉住，头昂起