医疗药品无菌检查法验证

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,无菌检查法验证,张荣玉,一、概述：,1.1,定义：系用于检查药典要求的无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其它品种是否无菌的一种方法。,2.1,验证的必要性和意义：,确认所采用的方法检查供试品无菌的适合性。,保证检查结果的准确性、可靠性、准确性和重现性；检查方法的完整性。,与同药品无菌检查接轨。,通过对不同品种、批号的无菌检查比较；对产品生产全过程进行质量监控。,二,、,存在问题,:,2.1,专业人才少,缺乏相应的培训和管理,。,2.2,工作量大,导致操作不规范。,2.3,检验方法缺陷，如直接种法可操作性差，引入污染的风险较大。,2.4,试验条件的影响,环境影响,培养基,、,稀释剂、冲洗液。,所用品、器具清洁灭菌。,三,、,无菌检查的试验要求,:,3.1,环境：,10000,级局部以下,100,级，布局符合无菌 操作要求；或隔离系统（生物安全柜）。,3.2,人员：必须具备微生物专业知识，并经培训。,3.3,设备、器件、材料：经处理必须符合无菌要求，培养箱的温度指示装置要校验。,3.4,培养基：,3.4.1,按药典规定处方配制，采用经验证合格的灭菌程序灭菌。,3.4.2,保存：,2-25,避光保存；期限：非密闭容器,3,周，密闭容器,1,年。,3.4.3,培养基适用性、无菌性、灵敏度检查。,3.4.4,灵敏度检查：,3.4.4.1,检查用菌株传代不得超过,5,代。,3.4.4.2,常用菌株：,金黄色葡萄球菌（,CMCC(B)26003),铜像假单胞菌,CMCC,（,B,）,10104,枯草芽胞杆菌,CMCC,（,B,）,63501,生孢梭菌,CMCC,（,B,）,64941,白色念珠菌,CMCC,（,F,）,98001,黑曲霉,CMCC,（,F,）,98003,3.4.4.3,菌液配制、保存、接种培养按药典要求。,3.4.4.4,结果判断：空白对照应无细菌增长，加菌液的培养基管均生长良好，培养基灵敏度符合要求。,3.5,稀释液、冲洗液：,3.5.1,按药典规定配制后采用经验证的灭菌程序灭菌。,3.5.2,常用稀释液、冲洗液：,0.1%,蛋白胨水液,PH7.0,氯化钠,-,蛋白胨缓冲液,无菌,0.1%,氯化钠液,中性磷酸盐缓冲液,含,0.1%,聚山梨酯（吐温,-80,）的,0.1%,蛋白胨水溶液,3.5.3,依据供试品的特性选择稀释液、冲洗液。,四,、,无菌检查法验证,:,4.1,原理,:,验证的所有环境、培养基、菌株、稀释液、冲洗液均与日常检查方法相一致、并符合相关规定。,4.2,验证分类：,前验证：建立无菌检查方法时。,再验证：修订检查方法时。,定期验证：供试品组合或原检查条件改变。,4.3,验证方案制定原则：,供试品的抑菌性，敏感菌种选择,;,适当的方法消除或降低抑菌性。,样品的预处理方式能有效抵消（或中和）产品的抑菌性。,样品的预处理方式、检验过程、培养条件均不影响样品中微生物的生长。,验证记录真实完整地记录所做试验。,4.4,验证重点环节分布：,样品,需前处理,不需前处理,验证前处理方法对污染菌生长，检出影响,有抑菌作用,去除抑菌作用,通过验证实验判,无抑菌作用,验证抑菌活性去除方法的有效性及对污染菌检出物影响,检验,4.5,验证方法：,4.5.1,制备验证试验菌液，按药典方法配制菌液,。,4.5.2,选择配制适合的培养基、稀释液、冲洗液。,4.5.3,供试品的处理：,验证所用的溶解剂、稀释剂、助溶剂、破乳剂等的有效性，使用量及微生物生长无影响。,验证加热温度、离心速度和时间对微生物生长或分布无影响。,不需前处理的供试品免做。,4.5.4,无抑菌,性,性样品,的,的验证,方,方法：,依,依据产,品,品溶解,性,性和微,生,生物限,度,度选择,合,合适的,中,中性稀,释,释剂溶,解,解和稀,释,释，用,直,直接接,种,种法验,证,证，常,用,用中性,稀,稀释液,或,或淋洗,液,液。,4.5.5,具有抑,菌,菌性样,品,品的验,证,证方法,：,：,确定抑,菌,菌作用,（,（抑细,菌,菌、真,菌,菌试验,验,验证）,，,，选择,敏,敏感菌,株,株对供,试,试品抑,菌,菌活性,去,去除效,果,果检验,（,（阳性,菌,菌回收,试,试验）,。,。,消除样,品,品抑菌,性,性的方,法,法验证,：,：,化学钝,化,化中和,法,法（化,学,学试剂,中,中合法,）,）：利,用,用化学,（,（生物,）,）专属,性,性灭活,，,，常用,钝,钝化剂,有,有：对,氨,氨基苯,甲,甲酸、,卵,卵磷脂,、,、聚山,梨,梨酯,-80,等。薄,膜,膜过滤,法,法和直,接,接接种,法,法也可,用,用。对,化,化学中,和,和剂不,敏,敏感的,样,样品，,用,用酶中,和,和，如,-,内转氨,酶,酶。,稀释中,和,和法：,利,利用降,低,低供试,品,品的相,对,对浓度,，,，将样,品,品稀释,至,至最低,抑,抑菌浓,度,度下进,行,行。,薄膜过,滤,滤法：,利,利用体,积,积差异,分,分离，,通,通过薄,膜,膜过滤,，,，微生,物,物被截,于,于滤膜,，,，培养,薄,薄膜观,察,察有无,微,微生物,生,生长。,各,各方法,组,组合运,用,用，效,果,果更好,。,。,验证方,法,法,:,a.,验证分,组,组：,A,组,:,样品组,适当方,法,法中和,样,样品,加入少,量,量验证,微,微生物,(,接种量,少,少于,100cfu),。,B,组,:,对照组,0.1%,蛋白胨,或,或,PH7.0,无菌氯,化,化钠蛋,白,白胨缓,冲,冲液,加少量,微,微生物,(,接种量,少,少于,100cfu).,C,组：阳,性,性对照,组,组，不,经,经中和,处,处理，,将,将实验,菌,菌株直,接,接接种,于,于培养,基,基中,(,接种量,少,少于,100cfu),。,b.,结果分,析,析,:A,组与,B,组微生,物,物生长,数,数量相,似,似，表,明,明中和,剂,剂的中,和,和方式,有,有效消,除,除了样,品,品的抑,菌,菌性，,如,如果,B,组与,C,组的微,生,生物数,量,量相似,，,，表明,样,样品预,处,处理用,中,中和剂,的,的毒性,、,、检测,程,程序和,培,培养条,件,件等均,不,不影响,微,微生物,生,生长。,样,样品如,无,无抑菌,性,性，省,去,去,B,组试验,，,，,A,组与,C,组直接,比,比较。,A,组微生,物,物生长,数,数量不,及,及,C,组微生,物,物生长,数,数量，,表,表明试,验,验用器,具,具材料,或,或培养,条,条件等,方,方面存,在,在对微,生,生物生,长,长不利,因,因素。,c.,为考查,验,验证方,法,法的稳,定,定性和,重,重现性,，,，验证,至,至少需,3,个不同,批,批次的,同,同类样,品,品，分,别,别进行,3,次验证,实,实验。,五,、,供试品,无,无菌检,查,查验证,:,5.1,按药典,要,要求确,定,定检验,数,数量、,检,检验量,、,、设立,阳,阳性对,照,照和阴,性,性对照,。,。,5.2,供试品,无,无菌检,查,查方法,和,和检验,条,条件与,验,验证方,法,法相同,。,。,5.3,直接接,种,种法验,证,证试验,：,：,5.3.1,供试品,有,有抑菌,时,时，按,培,培养基,灵,灵敏度,试,试验的,菌,菌种，,向,向该种,无,无菌检,查,查培养,基,基内加,入,入该微,生,生物，,每,每种培,养,养基接,2,瓶，每,瓶,瓶接种,量,量控制,10-100cfu,之间。,5.3.2,参照药,典,典规定,确,确定培,养,养基用,量,量，按,无,无菌检,查,查要求,向,向上述,其,其中一,瓶,瓶加入,规,规定量,供,供试品,，,，另一,瓶,瓶为阳,性,性对照,。,。,5.3.3,将种好,的,的容器,按,按药典,规,规定温,度,度培养,14days,。,5.3.4,验证结,果,果评价,：,：,供试品,与,与阳性,对,对照相,比,比、供,试,试品容,器,器内微,生,生物生,长,长不明,显,显，说,明,明有抑,菌,菌性。,可,可使用,中,中和剂,如,如比温,-80,。,-,内酰胺,酶,酶等消,除,除抑菌,效,效果。,中,中和剂,不,不能消,除,除抑菌,作,作用，,适,适当增,加,加培养,基,基体积,稀,稀释。,5.4,薄膜过,滤,滤法验,证,证试验,：,：,5.4.1,薄膜过,滤,滤法验,证,证试验,供,供试品,有,有抑菌,特,特性时,，,，在同,型,型号的,每,每个过,滤,滤器加,规,规定定,量,量的供,试,试品（,容,容器数,及,及每容,器,器的过,滤,滤体积,）,）。淋,洗,洗至少,3,次，淋,洗,洗液为,100ml/,次，最,后,后一次,淋,淋洗液,中,中，接,种,种验证,用,用菌株,（,（,10-100cfu,）；取,另,另一滤,器,器不过,滤,滤供试,品,品，重,复,复上述,淋,淋洗操,作,作，作,为,为阳性,对,对照。,分,分别将,灵,灵敏度,实,实验的,菌,菌种及,相,相应培,养,养基逐,一,一试验,。,。,5.4.2,供试品,和,和阳性,对,对照接,种,种后、,培,培养基,容,容器按,药,药典菌,株,株要求,温,温度下,培,培养，,时,时间不,超,超过,14days,。,5.4.3,使用新,的,的滤膜,过,过滤器,（,（不同,厂,厂家或,批,批号、,型,型号）,重,重新进,行,行样品,试,试验组,、,、蛋白,胨,胨对照,组,组和阳,性,性对照,组,组的验,证,证确认,。,。,5.4.4,验证结,果,果评价,：,：,供试品,培,培养基,容,容器内,可,可见微,生,生物生,长,长明显,（,（混浊,）,），与,阳,阳性对,照,照组比,较,较结果,相,相似，,则,则在无,菌,菌检查,试,试验中,必,必须过,滤,滤与验,证,证试验,相,相等量,的,的供试,品,品、淋,洗,洗液。,淋,淋洗相,同,同次数,及,及使用,相,相同量,的,的培养,基,基。,供试品,培,培养基,容,容器内,与,与阳性,对,对照结,果,果相比,微,微生物,生,生长不,明,明显，,应,应增加,淋,淋洗次,数,数、重,复,复上述,试,试验。,六,、,验证合,格,格标准,:,6.1,平皿菌,落,落计,:,6.1.1,通常用,于,于药品,防,防腐剂,防,防腐效,力,力测试,和,和微生,物,物限度,检,检查中,。,。计数,每,每毫升,（,（或克,）,）样品,的,的微生,物,物含量,。,。,6.1.2,每种试,验,验菌每,组,组至少,重,重复,3,次（,3,个不同,批,批次的,样,样品）,。,。,6.1.3,合格标,准,准：,A,组（样,品,品试验,组,组）验,证,证微生,物,物平均,生,生长数,量,量不低,于,于,C,组（阳,性,性对照,组,组）验,证,证微生,物,物平均,生,生长数,量,量的,70%,，检验,方,方法通,过,过验证,。,。,6.2,直接接,种,种法：,6.2.1,培养基,能,能中和,抗,抗菌剂,的,的抑菌,性,性，并,适,适合广,谱,谱微生,物,物的生,长,长，包,括,括样品,种,种潜在,微,微生物,生,生长。,6.2.2,每种试,验,验菌种,每,每组实,验,验至少,独,独立重,复,复,3,次。如,需,需要改,变,变产品,和,和培养,基,基比率,达,达到中,和,和效果,。,。,6.2.3,合格标,准,准：,3,批（不,同,同批次,的,的样品,）,）在,14days,内所有,样,样品试,验,验组中,培,培养基,都,都显示,大,大量的,微,微生物,生,生长，,则,则相应,的,的试验,方,方法通,过,过验证,。,。,6.3