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Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,#,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,汇报人：,李海航,Hela cells,的故事以及细胞的传代培养,有没有长生不老,的细胞？,如何研究癌症？,如何培养人体细胞？,2,1,、细胞之母,Hela,cells,Fig.1 Hela cells,Fig.2,伟大的“,Hela,”,Henrietta Lacks(,左,),有的人死了，可细胞还活着。,1951,年，当时约翰,霍普金斯医院研究中心的乔治,盖伊（,GeorgeGey,）正在进行另外一项研究：,在人体外培养癌症细胞，以解释癌症产生的原因，从而找到治疗方法,。,当初的,难题,是：那些癌细胞总是很快死掉，即使有少量的“幸存者”，它们也根本不会生长,无法满足研究的需要,。,3,2,、,Hela,cells,的特点,、可以连续传代,、细胞株不会衰老致死，并可以无限分裂下去,、此细胞系跟其它癌细胞相比，增殖异常迅速,、感染性极强,附：,HepG2,细胞,（人体肝癌细胞）该癌细胞是取自于一个,15,岁白人的肝癌组织。,Hela,细胞生长奇快，甚至超越一般癌细胞。,Hela,细胞经历细胞分裂时可维持端粒酶活性以维持瑞粒长度，一般细胞的端粒会随着老化而变短，终至细胞死亡。海乐细胞利用此机制避开,海佛烈克极限,（,Hayflick limit,）。,1965,年由海佛烈克,(Leonard Hayflick),提出，一般人类细胞在细胞培养下，在进入衰老期前可分裂,52,次，恰好推翻卡洛,(Alexis Carrel),主张的细胞永生说。,端粒,DNA,会随每次细胞分裂,(mitosis),而变短，并缩短细胞,生命时钟,寿命。,Fig.3,衰老的问题,4,3,、推动脊髓灰质炎疫苗成功的研制出来,脊髓灰质,炎,(Poliomyelitis),是由脊髓灰质,炎病毒,所致的,急性传染病,，病毒主要侵犯人体脊髓灰质前角的灰、白质部分，对灰质造成永久损害，使这些神经支配的肌肉无力，出现肢体弛缓性,麻痹,。好发于,婴幼儿,，故又称,小儿麻痹症,。,本病可防难治，一旦引起肢体麻痹易成为终生残疾，甚至危及生命。,当初的研究遇到的难题是，研究已使用外神经系组织与猴子做实验，无法用人体与其他动物做实验，,Jonas Salk,首次将,脊髓灰质,炎疫苗的研究使用到人体体外第一个活细胞,Hela,用于研究该疫苗,1,。,Jonas Salk,医生用了近,9,年的时间，于,1953,年成功研制出第一个成功,脊髓灰质,炎疫苗,。,1,Scherer, W. F.; Syverton, JT; Gey, GO.,“,Studies On The Propagation In Vitro Of Poliomyelitis Viruses: Iv.Viral Multiplication In A State Strain Of Human Malignant Epithelial Cells (Strain Hela)Derived From An Epidermoid Carcinoma Of The Cervix,”,.,JJournal of Experimental Medicine,.,1953,97,(5): 695710.,Fig.4 A Somaliboy is injected with inactivated poliovirus vaccine (Mogadishu, 1993),5,4,、克隆技术的奠基,Fig.6,克隆羊,多莉与“克隆之父”,Professor Sir Ian Wilmut,1954,年，,Hela,细胞帮助科学家实现了,细胞克隆,2,。科学家利用其具有顽强生命力的特征，发明了一种分离单一细胞的方法，并让其存活足够长的时间来复制和创造一个自身的完美拷贝。这一重大突破为,动物克隆,、,基因疗法,、,试管受精,和,干细胞分离,等尖端生物医学奠定的基础。,Fig.5 A,、,Typical clones produced from single HeLa cells growing on glass slides above a feeder layer ( X 1.7). B,、,Photomicrograph of a typical clone (X50).2,2,Puck TT, Marcus PI; Marcus.,A Rapid Methid For Viable Cell Titration And Clone Production With HeLa Cells In Tissue Culture: The Use Of X-irradiated Cells To Supply Condition Factors.,JProceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,.,1955,41(7): 4327.,6,5,、瑞粒酶的发现,揭开衰老与癌症的奥秘,1989,年，一位,Yale,大学的研究人员公布了一项科学发现，,Hela,、癌细胞含有一种叫做端粒酶的物质，能使细胞不死。这让控制生物衰老的神秘物质,端粒酶走进了人们的视线。,Fig.8 The winner of The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2009,2009,年诺贝尔生理学或医学奖,3,位美国科学家因发现,端粒,（,telomeres,） 的结构和,端粒酶,（,telomerase,）保护染色体的机理而获奖,.,Fig.7,瑞粒在染色体的位置示意图,端粒,DNA,序列和端粒酶的发现，揭示了细胞分裂的机制，细胞每分裂一次，端粒就缩短一次，当端粒不能再缩短时，细胞就无法继续分裂而死亡。,7,HeLa,细胞对我们人类的贡献可谓数不胜数，因为有了这些,HeLa,细胞，才推动了脊髓灰质炎疫苗（,polio vaccine,）开发工作的进展，才让科学家们发现了端粒酶（,telomerase,），以及其他多项重大的科研进展。在,PubMed,数据库里以,“HeLa,细胞,”,为,关键词,进行搜索可以得到,7.5,万多篇论文,。就连,美国国立健康研究院（,US National Institutes of Health, NIH,）的院长,Francis Collins,在接受,Nature,杂志的采访时都说：,“,我们实验室里现在还养着,HeLa,细胞，我们需要用这些细胞开展各种基因表达试验，几乎在每一个分子生物学实验室里都少不了,HeLa,细胞。,”,如今，海拉细胞已经成为医学研究中非常重要的工具。无论是治疗,疱疹,、,白血病,、,流感,、,血友病,，或者,帕金森氏病,，还是研发,小儿麻痹症的疫苗,，都离不开基于海拉细胞的研究。,6,、,Hela cells,在其他方面的贡献,8,在细胞分化过程中，癌细胞脱离正轨，自行设定增殖速度，累积到,10,亿个以上我们才会察觉。癌细胞的增殖速度用倍增时间计算,1,个变,3,个,3,个变,9,个，如此类推！,、肿瘤细胞体外培养的重要性,1,、肿瘤细胞体外培养的应用,肿瘤细胞体外培养,2,1,3,4,5,抗癌药物筛选方面的研究,肿瘤病因和发病机制的研究,癌基因和抑癌基因方面的研究,癌细胞的诱导分化,和逆转方面的研究,癌细胞的杀伤效应研究,9,1,、培养,将,Hela,细胞培养于含,10%,胎牛血清的的高糖,DMEM,培养基中，于,37,，,5%CO,2,的细胞培养箱中培养，隔天传代一次。,2,、传代,胰酶消化细胞，将细胞悬液收集至离心管中。,800rpm,离心,5min,，弃上清液。加两倍量培养液悬浮细胞，平均分置于两个培养瓶中，,37,，,5%CO,2,及饱和湿度的,CO,2,培养箱中。,12-24,小时内观察细胞贴壁生长情况，取对数生长期细胞进行各项实验。,、,Hela cells,的培养、传代、冻存和复苏,Fig. 9,培养瓶（左）、倒置显微镜（中）、,5%CO,2,培养箱（右）,10,4,、复苏,准备,37,恒温水浴箱。从液氮中取出冰存管、迅速置于温水中并不断搅动。冻存管中的冻存物在,1min,之内融化。打开冻存管，将细胞悬液吸到离子管中。,800rpm,离心,5min,，弃上清液。沉淀加,10ml,培养液，吹打均匀，再离心,10min,，弃上清液。加适当培养基后将细胞转移至,25mm,2,培养瓶中，,37,培养，第二天观察生长情况。,3,、冻存,胰酶消化细胞，将细胞悬液收集至离心管中。,800rpm,离心,5min,，弃上清液。沉淀加含保护液的培养液，计数，调整细胞至,510,6,/ml,左右。将悬液分至冻存管，每管,1ml,。将冻存管口封严。按下列顺序降温：室温 冰箱冷藏室（,4,，,30min,） 冰箱冷冻室（,-20,，,60min,） 低温冰箱（,-70,，过夜,） 液氮。,
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