未来疼痛治疗的新策略

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,分子镇痛,未来疼痛治疗的新策略,慢性疼痛,神经病理性疼痛,癌 痛,炎症痛等,由实际的或潜在的组织损伤引起的一种不愉快的感觉和情感经历,（,IASP,定义）,由于各种原因,(,如骨质增生,慢性软组织伤以及恶性肿瘤等,),所致的长期,(,数周、数月或数年,),不愈的疼痛,疼 痛,慢性疼痛,疼痛传导通路,药物治疗：阿片类药物、,NSAIDs,、抗精神,病药物等,物理治疗：光疗、水疗、冷热疗、针刺等,手术治疗：选择性的神经阻滞、神经损毁术等,慢性疼痛治疗策略,分子镇痛,新策略,转基因细胞移植镇痛,疫苗镇痛,靶向毁损镇痛,近几年我们的研究,转基因细胞移植镇痛,鞘内转基因细胞移植（脑啡肽原基因）,镇痛分子（脑啡肽）,外源基因修饰细胞株,转基因细胞移植镇痛,转基因细胞移植镇痛,我们的研究经历的三阶段,细胞移植,转基因细胞移植,病毒转基因治疗,嗜铬细胞,免疫反应,生存期短,来源困难,细胞移植,微囊化嗜铬细胞,细胞移植,优点,免疫隔离,减少免疫抑制剂的应用，保护植入细胞免遭受机体排斥,缺点,1.,微囊制作复杂，成功率不高,2.,微囊内死亡的细胞会污染正常产物,3.,囊膜破裂,4.,微囊纤维包裹，影响了微囊对外环境的敏感性和,镇痛物质的释放,微囊化嗜铬细胞,细胞移植,转基因细胞移植镇痛,转基因细胞移植,优点,可取自自体或同种异体，组织相容性好,非肿瘤细胞，无致瘤性,存在的问题,细胞生存时间,基因表达的可控性,解决细胞来源问题,永生化,细胞永生化,利用转基因技术将外源性的永生化基因转入到靶细胞并稳定整合到靶细胞基因组中，获得稳定表达的转化细胞，从增殖危机中逃逸，从而获得无限增殖能力,我们构建的永生化细胞,永生化神经胶质细胞,永生化神经前体细胞,基因修饰永生化细胞镇痛,人前脑啡肽原基因修饰,永生化神经胶质细胞,，,大鼠蛛网膜下腔移植后，具有良好的镇痛效果,腺相关病毒携带人前脑啡肽原基因修饰,永生化,神经前体细胞,，蛛网膜下腔移植后，具有良好,的镇痛效果,基因表达的可控性,非可控性表达模式,可控性表达模式,Tet-on,诱导表达系统,解决基因表达可控性问题,tet-on,表达系统,目的基因,TRE,rtTA,CMV,可控性转基因细胞移植镇痛,+Dox,-Dox,+Dox,永生化胶质细胞中强力霉素,调节脑啡肽,分泌,诱导表达后大鼠脑脊液中脑啡肽含量明显增加,注：与SNI组和SNI/Control组相比 *,P,0.05,与,SNI/hPPE/Dox(-),组相比，,#,P,0.05,诱导表达后,诱导,hPPE,基因表达后镇痛效果评价,注：,SNI/hPPE/Dox(+),组和,SNI/hPPE/Dox(-),组相比， *,P,0.05,诱导表达后,结果提示,具有良好的可控性镇痛效果,病毒转基因镇痛,结果提示,蛛网膜下腔注射病毒后，具有良,好的可控性镇痛效果,优点,操作简单，容易实现,外源基因表达效率高,缺点,慢病毒应用于基因治疗，暂无长期临床观察，因此有病毒的生物安全性担忧,病毒转基因镇痛,成 果,发表文章,1.,Xuebi T, Gongming W, Yuke T, et al. An improved Tet-on system for expression in neurons delivered by a single lentiviral vector.,Hum Gene Ther,. 2009, 20:113123.,2.,Xu Y,，,Tian XB,，,Tian YK, et al. Lumbar transplantation of immortalized enkephalin-expressing astrocytes attenuates chronic neuropathic pain.,Eur J Pain,.,2008, 12(4):525-33.,3.,An K, Tian YK, et al. Immortalized Rat Astrocyte Strain Genetically Modified by Rat Preprogalanin Gene. Journal of Huazhong of University Science and Technology Med Sci, 2005, 25(2): 144-146.,.,安珂,田玉科,杨辉,高峰,王鹏,.,猿肾病毒,40,大,T,抗原基因永生化大鼠星形胶质细胞株的构建,.,中华麻醉学杂志, 2004, 24(11): 838-841.,.,杨辉,田玉科,王鹏,安珂,高峰,吴小兵,梅伟,.,重组人前脑啡肽原基因腺相关病毒载体的构建,.,中华麻醉学杂志, 2005, 25(1): 34-36.,.,高峰,田玉科,杨辉,安珂,张传汉,.,猿肾病毒,40,大,T,抗原基因永生化大鼠神经前体细胞株的构建,.,中华麻醉学杂志, 2005, 25(8): 597-600.,.,.,.,.,.,.,疫 苗 镇 痛,疫 苗 原 理,体液免疫,抗原识别,B,细胞活化、增殖与分化,合成分泌抗体并发挥效应,抗原,抗体,疫苗的应用,传染病,1. During,等构建的疫苗,AAV/NR1,，产生,NR1,抗体，可用于脑缺血和癫痫,的治疗,2. Schenk,等研究发现，,A42,多肽疫苗可诱导产生抗体，治疗,AD,疫苗应用于慢性癌痛,？,神经系统疾病：,脑缺血、癫痫,、阿尔茨海默病,（,Alzheimer disease,AD,）,镇 痛 疫 苗,疼痛,NR2B,NR2B,拮抗剂,NR2B siRNA,以,NR2B,为靶点，将,NR2B,作为抗原诱导机体产生,NR2B,抗体，拮抗,NR2B,或下调其表达，用于癌痛治疗,NMDA,受体,2B,亚基,NR2B,疫苗,构建,NR2B,全基因镇痛疫苗,NR2B,重组腺病毒,recombinant adenovirus 5-,mediated NR2B (rAd5/NR2B),质粒,pDC515/NR2B,转染,293,细胞,镇痛疫苗,rAd5/NR2B,NR2B,全基因镇痛疫苗,NR2B,特异性抗体,镇痛疫苗,rAd5/NR2B,NR2B,多肽,大鼠免疫后产生,NR2B,抗体的滴度,“ ”,加强免疫的时间,1,2,NR2B ,180kDa,-actin ,42kDa,3,与空白对照组和病毒空载体组比较，*,P,0.05,大鼠免疫后脊髓,NR2B,表达下调,1,：空白对照组,2,：病毒空载体对照组,3,：病毒疫苗免疫组,大鼠免疫后镇痛效果评价,与术前比较，,P,0.05,；与空白对照组和病毒空载体组相比，,*,P,0.05,镇痛疫苗可发挥超前镇痛作用,结果提示,免疫后,表 位 疫 苗,表位疫苗,表位：,抗原表位（,epitope,）,抗原被抗体识别的特异性位点,抗体,多肽抗原,抗体,表位抗原,抗体,表 位 疫 苗,NR2B,多肽,NR2B,表位基因,NR2B,表位疫苗,rAd5/eNR2B,镇痛作用,筛选,NR2B,表位,大鼠免疫后产生,NR2B,抗体的滴度,大鼠免疫后脊髓,NR2B,表达下调,NB2B,-actin,1,：空白对照组,2,：表位疫苗免疫组,3,：载体对照组,与空白对照组和载体对照组比较，*,P,0.05,大鼠免疫后镇痛效果评价,NR2B,表位疫苗能够更加有效地诱发免疫反应，产生良好的镇痛效果,结果提示,与术前比较，,P,0.05,；与空白对照组和病毒空载体组相比，,*,P,0.05,“”免疫时间,免疫后,表 位 疫 苗,优点,提高免疫效应,特异性强,缺点,过程复杂,表位筛选困难,NR2B,作用广泛,疼痛,认知功能,运动功能,神经元凋亡,突触可塑性,NR2B,疫苗的安全性评价,检测大鼠海马及脊髓神经元的凋亡,Morris,水迷宫检测大鼠的认知功能,认知,检测海马长时程增强,(LTP),现象,突触,以大鼠游泳速度评价其运动功能,凋亡,疫苗,结果提示,镇痛疫苗不会引起大鼠脊髓及海马神经元的凋亡增,加，也不会损害大鼠的认知功能和运动功能，但是,会削弱海马,CA1,区,LTP,的产生与维持,运动,镇痛疫苗的安全性有待更进一步研究！,rAd5/NR2B,镇痛疫苗现已申请发明专利,（,专利申请号,200710168964.7,）,发表文章：,1. Wang GM,Tian YK,et al.Gene Ther,2007,14(24):1681-7.,2. Wang GM,Tian YK,et al.Chin Med J(Engl), 2007,120(8): 643-7.,3.,王公明,田玉科,等,.,中华麻醉学杂志,2007,27(8):699-702.,4.,陈建平,田玉科,等,.,中华麻醉学杂志,2006,26(10):948-951.,5.,陈建平,田玉科,等,.,中华麻醉学杂志,2007,27(12):1100-1103.,6.,王公明,田玉科,等,.,中华麻醉学杂志,2008,28,9:783-786.,成 果,靶向细胞毁损镇痛,分子靶向治疗,分子靶向治疗,受体靶向技术,有的放矢,一种以细胞受体、关键基因和调控分子为靶点的新型治疗,下行易化系统,延髓头端腹内侧核（,RVM,）,脑干下行抑制,/,易化系统,下行易化系统,阿片受体阳性易化神经元,受体神经元,靶 点,阿片受体,阿片受体阳性易化神经元细胞膜表面特异性表达,阿片受体,以,阿片受体为靶点，特异性损毁易化神经元可阻断疼痛的下行易化系统，达到镇痛的目的,阿片受体,受体靶向技术,自杀,基因,配体偶联物,(,免疫偶联物,),实现治疗的靶向性,配体,内吗啡肽,-caspase3,耦联体,耦联体,结合,阿片受体,内吞,吞噬体形成,耦联体裂解,凋亡,内吗啡肽,Caspase-3,靶向毁损镇痛,RVM,区注射,受体阳性神经元特异性表达,caspase3,受体阳性神经元凋亡,镇痛作用,内吗啡肽,Caspase-3,结果提示,区注射后具有良好的镇痛效果,受体靶向毁损镇痛,优点,靶向性强,镇痛效果确切（安全性有待进一步研究）,缺点,工艺复杂，成本高,转染率低,成 果,发表文章,1. Cao F,，,Tian YK,et al. Regulation of spinal neuroimmune responses by prolonged systemic morphine treatment in a rat model of cancer induced bone pain. Brain Res .,（,Revision,）,2.,肖兴鹏,田玉科,等,.,第四军医大学学报, 2008, 29(24).,3.,曹菲,田玉科,等,.,中华麻醉学杂志, 2008, 28(6).,4.,曹菲,田玉科,等,.,中国组织工程研究与临床康复, 2007, 50(11).,5.,许爱军,田玉科,等,.,中国疼痛医学杂志, 2008, 14(3).,.,展望,有待解决的问题,安全性,其他生物学功能,临床,未来疼痛治疗的新策略,希望与困难并存,致谢,国家自然科学基金委员会,.,去永生化转脑啡肽基因神经细胞的构建及其镇痛效应研,究（项目编号：,30170905,），,2002.1,2004.12,.,N-,甲基,-D-,天门冬氨酸受体,2B,亚基表位疫苗的构建及其镇痛效应的研究（项目编号：,30471660,），,2005.1,2007.12,.,受体靶向毁损癌痛大鼠脑干下行易化系统镇痛效应的研究（项目编号：,30672027,），,2007.1,2009.12,.,NG2,细胞在大鼠神经病理性痛中的作用及其机制研究（项目编号：,30872441,）,2009.012011.12,Thanks!,