南医大微免实验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验内容,录像：淋转、,E,花环,介绍：免疫学检测技术（书,229,）,示教：淋转、,E,花环,单扩、双扩、火箭电泳,操作：对流免疫电泳、玻片凝集,淋巴细胞转化试验,转化百分率正常值为,70%,左右,分裂相：即染色体型,母细胞：大,4-5,倍；核质疏松，有,1-3,个核仁；核周透明区；胞浆有空泡,过渡型：略大；核质略疏松；着色较淡,小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少,示教片,E,玫瑰花环试验,T,细胞表面有绵羊红细胞受体，可在自然情况下与绵羊红细胞结合，形成,E,玫瑰花环，由此可区分,T,淋巴细胞与,B,淋巴细胞。,示教片,一、抗原抗体反应的原理,1、基础：抗原决定簇抗体的互补决定区,2、特点：特异性,可逆性,比例性,阶段性,二、抗原抗体反应的影响因素,1、电解质,2、温度,3,、酸碱度,三、抗原或抗体的检测方法,凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术,凝集反应,概念：抗原+抗体 凝集团块,直接凝集：颗粒性抗原+抗体 凝集团块,玻片法、试管法,间接凝集：可溶性抗原包被于载体+抗体 凝集团块,反向间接凝集：抗体包被于载体+抗原 凝集团块,协同凝集：抗体结合金葡菌,SPA+,抗原 凝集团块,沉淀反应,概念：可溶性抗原+抗体 沉淀物,单向琼脂扩散、火箭电泳：抗原定量试验,抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）,双向琼脂扩散、对流免疫电泳：抗原分析、,抗原定性试验等,抗原、抗体同时扩散（自由、定向）,单向,琼脂,扩散,单向琼脂扩散试验,是一种定量试验。,将一定量,已知,抗体混于琼脂中,，制板，,在适当位置打孔,，,将抗原加入孔中扩散,，,与板中抗体相遇,，,在比例合,适,处呈现白色沉淀环,，,环的直径与抗原,含量,成正比,。,主要用于,测定,血清各种,Ig,和补体成分的含量,单向定量免疫电泳,（,火箭电泳,）,将一定量,已知,抗体混于琼脂中,，制板，,在,板,的一端打一排小孔,，,加入待检样品,，,置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰,，,状如火箭,，,称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。,敏感度与单扩相仿,，,但需时较短。,双向,琼脂,扩散,在,琼脂板上打孔,，,抗原和抗体分别加到相应孔中,，二者自由,向四周扩散,，,在比例合适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统,，,可出现多条沉淀线。,可用,于,分析和鉴定标本中多种抗原成分,对流免疫电泳,材料,电泳仪,缓冲液,琼脂板1块/2人，打孔器2个/组，,抗,AFP,血清 已知,Ab,AFP,阳性血清 阳性,Ag,对照阴性血清 阴性,Ag,待检血清：标本1 未知,Ag,标本2 未知,Ag,对流免疫电泳,打孔：,金属打孔器打两排孔,，,抗原孔与抗体孔间距离为,4,毫米,至5,毫米。,加样,：,抗,AFP,血清加于抗体孔内,；,病人血清,、,AFP,阳性血清,、,阴性对照血清分,别,加于抗原孔内。,电泳,：,将琼脂,板,置电泳槽,，,抗原孔置阴极端。,板,两端分别用湿纱布与缓冲液相连,，,通电,3,0,分钟。,观察,：,在相应抗原、抗体孔间,出现,沉淀线。,对流免疫电泳,方法,打孔 加样 电泳,35min,Ag,Ab,Ag,Ab,45,mm,45,mm,5,mm,5,mm,阴性,阳性,标1,阴性,标2,阳性,对流免疫电泳,结果判定：,在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。,直接凝集反应玻片凝集,材料：玻片1张/1人，1号、2号菌落，生理盐水，诊断血清，接种环,方法：取生理盐水,3,4,环，菌落,1,2,环，后加血清2环,轻摇玻片，12分钟后观察,结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应,*,玻片扔在后面的玻片缸里,*,消毒水泡手,生理盐水 1号菌落,生理盐水,+1,号菌落诊断血清,实验报告,五张图：淋转、,E,花环、单扩、双扩、,火箭电泳,原理及结果：对流免疫电泳、玻片凝集,（结果可用图示）,