医学免疫学实验一抗原抗体反应

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,医学免疫学实验,第一讲抗原抗体反应,antigen-antibody reaction,什么是抗原抗体反应,？,抗原与相应抗体的特异性结合反应称为抗原抗体反应。抗原抗体反应既可在体内作为体液免疫应答的效应机制自然发生，也可在体外作为免疫学实验的结果出现。在体内，可表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素等作用，有时亦可引起免疫病理损伤，在体外，依相应抗原物理性状 (颗粒状或可溶性)以及反应的条件 (电解质、补体等)不同，可出现凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反应。,抗原抗体反应的特点,1. 特异性,Ab 1,Ab2,Ab3,抗原抗体反应的特点,2.比例 性,抗体过剩,抗原过剩,抗原抗体比例合适,抗原抗体反应的特点,3.可逆性,体外抗原抗体反应的影响因素,电 解 质,温 度,酸 碱 度,作用时间,抗原抗体反应类型,可溶性抗原与相应抗体结合所产生的,沉淀反应,颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的,凝集反应,抗原抗体结合后激活补体所致的,细胞溶解反应,细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的,中和反应,免疫标记,的抗原抗体反应。,凝集反应,-ABO,血型的鉴定,实 验 目 的,1. 熟悉凝集反应的定义及血型鉴定实验的原理。,2. 掌握血型鉴定实验的操作及结果的正确观察与判断。,3.了解血型鉴定实验的用途。,凝集反应,定义：在一定浓度的电解质环境中，,颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）,和相应抗体反应能够产生肉眼可见的凝集块,直接凝集,间接凝集,间接凝集抑制试验,抗球蛋白试验,间接凝集反应,间接凝集抑制,抗球蛋白法检测IgG抗体的原理,抗球蛋白可以和,IgG,反应,通过搭桥作用使红细胞凝集,概 述,血型系统,Blood group system,1901年发现的人类第一个血型系统-,ABO血型系统发现者-奥地利科学家,Karl Landsteiner,ABO,血型系统的发现,【实验原理】,血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的,Y,Y,Y,+,实验器材,1：载玻片、采血针、牙签等,2,：,A,型和,B,型标准血清、酒精棉球,操作步骤,1.取载玻片，酒精消毒正面，在背面标记A和B两区,2.酒精消毒指端皮肤和采血针后，用采血针刺破皮肤，挤出少量血液，涂在玻片A、B两区，并立即用无菌干棉球压迫止血,3.在两区分别滴加一滴抗A定型试剂和抗B定型试剂，立即用牙签混匀,4.静置3分钟，观察凝聚现象，判定实验结果,实验结果,ABO血型检查临床意义,1.,输血：输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血完全相合才能输血。,2.,母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病，主要是依靠血型血清学检查来诊断。,3.,器官移植时受者与供者也必须ABO血型相符合才能移植，血型不符极易引起急性排异反应、导致移植失败。,4.,ABO血型与疾病之间的联系也有一些报道，某些看来造血系统无关的疾病实际上可能与红细胞血型抗原有关。,沉淀反应,-,对流免疫电泳,沉淀反应,可溶性抗原,在有适量电解质存在的条件下与相应的抗体结合，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应,类型：,沉淀反应,环状沉淀反应,絮状反应,琼脂扩散,单向扩散,双向扩散,电泳,火箭电泳,对流免疫电泳,单向扩散,Ag Concentration,Diameter,2,Ag,Ag,Ag,Ag,Ab in gel,单向扩散,双向扩散,即将抗原和抗体分别加入琼脂对应的孔中，二者会向四周扩散，,在形成白色沉淀线。,二者比例合适处,双向扩散,电 泳,定义,：即带电颗粒在电场的作用下向着相反的电极移动，称为电泳。,原理,：蛋白质分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及侧链的游离基团而成为带电颗粒，并可在电场内移动，其移动方向取决于蛋白质分子所带静电荷。不同蛋白质分子根据其氨基酸组成及所在溶液的pH值，携带的静电荷不尽相同，致使它们在电场中的迁移率各异，从而达到分理的目的。,火箭免疫电泳,火箭免疫电泳,对流免疫电泳,对流免疫电泳实质上是由电泳,定向加速,的双向扩散,抗原在电泳时从,负极向正极移动,抗体由,正极向负极移动,实验器材,1：载玻片、打孔器、三角烧瓶、移液管、洗耳球、10%的琼脂、记号笔,2,：酒精灯、火柴、电炉、电泳仪、电泳槽,3,：微量加样器、抗原及抗体样品,操作步骤,制板,打孔,封底,加样,电泳,3,4ml,琼脂,孔间距,3mm,约,7ul,切割火焰,2,3,次,总电流,4mA/cm x 2.5cm(,板宽,) x N(,板数）,30,分钟,抗原,抗体,对流免疫电泳实验结果,对流免疫电泳,思 考 题,1、对流免疫电泳试验中如果抗原、抗体的正极和负极放反了是否会出现沉淀线？为什么？,2、抗原抗体反应检测的临床意义有哪些？,实验操作录像,实验操作录像,实验报告,实验原理,实验方法,实验结果及分析,思考题,参考书籍及网站,