实验六微生物的简单染色及革兰氏染色

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的,制片和简单染色,革兰氏染色法,细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的,制片和简单染色,一、实验目的,学习掌握微生物制片及简单染色的基本,技术,初步了解细菌、放线菌、酵母菌及,霉菌的形态特征和相互区别,巩固显微镜操作技术及无菌操作,技术,二、基本原理,染色前必须固定细菌,其目的有二：,一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上,二是增加其对染料的亲和力,常用的有加热和化学固定两种方法,固定时尽量维持细胞原有的形,常用,碱性染料,进行简单染色，,原因在于微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中常带负电荷，,而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与微生物细胞结合使其着色。常用作简单染色的染料有,美蓝、结晶紫、碱性复红,等。,当细菌分解糖类产酸使培养基,pH,下降时，细菌所带,正电荷增加，此时可用,伊红、酸性复红,或,刚果红,等,酸性染料染色,三、实验器材与试剂,菌种,：牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养的,12-18,小时枯草芽,胞杆菌和培养,24h,的金黄色葡萄球菌,溶液和试剂,：草酸铵结晶紫染液、齐氏石炭酸复红染液、,吕氏碱性美蓝染液、革兰氏染色用碘液、,乳酸石炭酸棉蓝染液,仪器和其他用品,：双层瓶、接种环、接种铲、接种针、,平皿、,U,型玻璃棒、解剖针、,解剖刀、,50%,乙醇、,20%,甘油、高氏一号培养,基平板、马铃薯琼脂薄层平板等,四、操作步骤,安全警示,1.,加热固定时要,使用载玻片,夹子，以免烫伤。,不要,将,载玻片在火焰上,烧烤时间过长,，以免载玻片破裂,2.,使用燃料时,避免粘到衣服上,3.,放线菌和霉菌制片,要,减少空气流动,，避免吸入孢子,4.,实验完毕后,洗手,，金黄色葡萄球菌为条件致病菌，,二甲苯为有毒物质,。,细菌制片及简单染色,涂片：,将玻片分成两个区域，各滴上一小滴蒸馏水，再用无菌操,作的方法挑菌少许枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌于玻,片的水中，并充分混匀涂成薄膜,干燥：,将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥,固定：,涂面朝上，通过微火,2-3,次,染色：,玻片泠却后加结晶紫滴于涂片上，覆盖涂面染色,1,分钟,水洗：,倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至洗出水变无色为止,（注：勿冲去菌体）,干燥：,自然干燥，或用吸水纸吸干,镜检：,显微镜下观察并记录,四、实验步骤,1,、菌落形态观察：,2,、细菌简单染色：,3,、细菌革兰氏染色。,注意：,菌落颜色、湿度、形状、大小、透明度、颜色、边缘是否规则等特征。,染色过程,：,涂片干燥固定染色（,1min,）水洗干燥镜检,注意事项,：,涂片,：取菌量不能太大,干燥,：自然干燥,水洗,：水流不能直接冲在涂菌处,滴加少量水,挑取菌体,涂片,干燥,固定,染色,水洗,干燥,放线菌革兰染色,青霉的显微结构,曲霉的显微的显微结构,毛霉显微结构,根霉显微形态,电镜下的酵母,革兰氏染色法,一、目的要求,学习掌握革兰氏染色法,了解革兰氏染色原理,巩固显微镜操作技术及无菌操,作技术,二、基本原理,（革兰氏染色）,革兰氏染色法,是,1884,年由丹麦病理,ChristainGram,氏创立的，可将细菌区分为,革,兰氏阳性菌,（,G+,）和,革兰氏阴性菌,（,G-,）,革兰氏染色法,是细菌学中最重要的鉴别染色法,革兰氏染色法,所以能将细菌分为革兰氏阳性和,革兰氏阴性，是由这两类细菌,细,胞壁的结构和组成不同,决定的,三、实验器材与试剂,菌种,：,大肠杆菌,16,小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,金黄色葡萄球菌,16,小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,溶液和试剂,：,革兰氏染液、草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘,液、,95%,乙醇、番红复染液等,仪器和其它用品,：,显微镜、双层瓶、接种环、载玻片夹,子、无菌生理盐水等,本实验,为什么采用上述生物？,四、操作步骤,革兰氏染色法的基本步骤是,：,制片,初染,（结晶紫）,媒染,（碘液）,脱色,（,95%,乙醇或丙酮）,复染,(,番红,),镜检（油镜）,混合涂片染色,经此方法染色后，细胞保留初染剂,蓝紫色,的,细菌为,革兰氏阳性菌,；细菌染上,复染剂的颜,色,(,红色,),，该菌属于,革兰氏阴性菌,染色结果,金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果,染色结果,大肠杆菌革兰氏染色结果,染色结果,金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果,附：油镜的使用,双目显微镜,单目显微镜,2.,油镜的原理,油镜的透镜很小，从载玻片透过的光线通过空气时，因介质折光率不同，光线将发生散射现象，使射入镜筒的光线很少，物象不清。若在油镜与玻璃片之间加入与玻璃折射率相近的香柏油，则使通过的光线不至因折射而减弱，因此能清楚地看到物象。,双层瓶,香柏油,二甲苯,