发光菌的生物毒性测试方法

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,发光菌的生物毒性测试方法,实验原理,1 发光菌的发光机理,细菌生物发光反应是由分子氧作用，胞内荧光酶催化，将还原态的黄素单核苷酸(FMNH2)及长链脂肪醛氧化为FMN 及长链脂肪酸，同时释放出最大发光强度在波长为450-490nm处的蓝绿光。,2 实验原理,当发光细菌接触有毒污染物时,细菌新陈代谢则受到影响,发光强度减弱或熄灭,发光细菌发光强度变化可用发光检测仪测定出来。在一定浓度范围内,有毒物浓度大小与发光细菌光强度变化成一定比例关系,因此可通过发光细菌来监测环境中的有毒污染物。发光细菌应用最多的是明亮发光杆菌,可以监测各种水体,对气体中可溶性有毒物质,可先通过吸收、溶解在溶液中,再来观察其对发光细菌的影响。,仪器介绍,DXY-2型生物毒性测试仪,是基于毒性物质对特殊的发光细菌的发光度的抑制作用而设计的，它通过测定发光细菌发光度的变化，量度被测环境样品中由重金属和其它有机污染物所造成的急性生物毒性。,实验步骤,4仪器检验复苏发光细菌冻干粉质量,3 细菌冻干菌剂复苏,1 仪器的预热15min和调零,2 试管排列和滴加3%Nacl及样液,取出含有0.5g发光细菌冻干粉的安瓿瓶和Nacl溶液，将安瓿瓶置于含有冰块的保温瓶中，注入Nacl溶液混匀，2min后菌即复苏发光,取2ml测试管加2mlNacl3%溶液，10, L复苏发光菌液，颠倒摇匀，测试发光量，倍率调至X2，发光量高于600mv，此冻干粉可用,5 给各测试液加复苏菌液,发光菌液复苏满15min，用,10, L微量注射器准确吸取,10, L复苏菌液，逐一加入各管摇匀（精确计时，记录到秒）,6 读数,拔出样品室的盖子（红指示灯亮），将待测样品液比色管放入，盖好盖子，抓住盖子顺时针旋转（此时只绿指示灯亮）约1-2s读数，抓住盖子顺时针旋转至原处（只红指示灯亮）向上拔出盖子，取出样品。,结果与数据处理,1 相对发光度的平均值,相对发光度（%）=Hgcl,2,管或样品管发光量/CK管发光量,再求相对发光度平均值,2,建立并检验HgCl,2,浓度与其相对发光度均值的相关关系,先求出线性回归方程，再在一定的P值条件下查表进行r检测，验证相关方程成立，然后做出两者的关系曲线，按照同样的方法检测样品浓度与其相对发光度均值的相关性。,