动物细胞工程复习

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,动物细胞工程专题复习,动物细胞培养,动物,胚胎,或,幼龄,动物的组织、器官,胰蛋白酶,剪碎,单个细胞,加培养液,制成,细胞悬浮液,10,代,细胞,部分细胞“,癌变,”，遗传物质改变，无限传代,动物细胞培养不能,最终培养成动物体,50,代细胞,原代培养,传代培养,细胞贴壁,剥离、分瓶,细胞,1,、过程：,细胞悬浮液,10,代细胞,50,代细胞,无限传代,原代培养,传代培养,如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？,多数组织细胞固定在表面生长和分裂。,随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖,遗传物质改变,几个有关概念：,原代培养：,从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的,第,1,代,细胞与,传,10,代以内,的细胞称为原代细胞培养。,传代培养：,将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养,。,1,、无菌、无毒：,2,、全部的营养物质：,3,、适宜的温度和,PH,值：,4,、必要的气体条件：,（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）,（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。,）,保证细胞顺利的生长增殖,36.5+,（,-,）,0.5,度,O,2,和,CO,2,（,95%,空气和,5% CO,2,）,2,、条件：,维持培养液的,PH,3,、应用：,大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）,作为基因工程中的受体细胞,培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性,用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据,细胞的全能性,细胞,植株,培养结果,获得细胞,或细胞产物,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,植物组织培养和动物细胞培养的比较,1.,动物细胞工程技术的基础是（ ）,A,、动物细胞融合,B,、胚胎移植,C,、动物细胞培养,D,、核移植,2.,下列有关动物细胞培养的叙述中正确的是（ ）,A,、动物细胞培育的目的是获得大量的细胞分泌蛋白,B,、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散,C,、细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中,D,、培养至,50,代后的传代细胞称为细胞株,C,B,核移植技术和克隆动物,1.,概念：,将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的,卵母细胞,中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。,核移植,（难度高）,受体细胞：,M,期的卵母细胞,胚胎细胞核移植：,体细胞核移植：,细胞分化程度低，恢复全能性容易,用核移植的方法得到的动物,称为克隆动物,原理：动物体细胞核的全能性。,取供体细胞,取卵母细胞,供体细胞培养,培养到,M,中期,卵母细胞去核,供体细胞,注入去核的卵母细胞,供体核进入受体卵母细胞,重组胚胎,代孕母牛,生出与供体遗传物质基本相同的个体,2.,过程：,3.,克隆动物的研究意义：,1.,克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白,2.,改良动物品种,3.,治疗人类疾病，作为供体,4.,保护濒危动物,4,体细胞核移植技术存在的问题：,1.,许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型,过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。,2.,成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。,动物细胞融合,1.,过程：,动物细胞,A,动物细胞,B,诱导，融合,2,个完整的杂交细胞,AB,有丝分裂,（膜融合、质融合）,（核融合）,注意：,动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞,2.,意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能,。,3.,应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段,特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体,植物体细胞杂交和动物细胞融合比较,比较项目,植物体细胞杂交,动物细胞融合,原理,融合前处理,诱导方法,用途,细胞膜的流动性、,植物细胞的全能性,细胞膜的流动性,用纤维素酶、,果胶酶去壁,用胰蛋白酶,使细胞分散,物理、化学方法,物理、化学、,生物,方法,获得部分或完整植株,主要用于制备,单克隆抗体,1,、动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是,诱导融合的方法完全相同 所用的技术手段不相同,所采用的原理完全相同 都能形成杂种细胞,A.B. C. D.,2,、动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性的是,A,、融合的原理,B,、融合的优点,C,、融合的诱导手段,D,、融合的过程,单克隆抗体,1.,单克隆抗体制备过程,诱导其融合的方法有哪些？,融合后培养液中有几种细胞,怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点,注射抗原的目的是什么,为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选,大量增殖杂交瘤细胞获得单克隆抗体的方法,过程：,B,淋巴细胞,骨髓瘤细胞,诱导融合,B-B,细胞,B-,瘤细胞,瘤,-,瘤细胞,选择培养,杂交瘤细胞,（,B-,瘤细胞）,克隆化培养,抗体检测,产生所需抗,体的杂交瘤,细胞,体外培养,小鼠腹腔内增殖,单克隆抗体,2.,单克隆抗体的应用：,.,作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与抗原特异性结合,2.,用于,运载药物：制成,“,生物导弹,”,治疗疾病：主要用于癌症治疗,优点：准确、高效、简易、快速,单克隆抗体的,优点：特异性强、灵敏度高,优点,:,疗效高、毒副作用小,下图为细胞融合的简略过程（只考虑两个细胞的融合）,请据图回答：,I,若,A,、,B,是基因型分别为,rrHH,、,RRhh,两个烟草品种细胞,的花粉，且这两对基因位于非同源染色体上，由于一对,隐性纯合基因,(rr,或,hh),的作用，在光照强度大于,800,勒,克斯时，都不能生长。,实验开始时必须用,除去不利于原,生质体融合的物质。,实验中除获得杂种细胞外，还有基因型,为,的融合细胞。,纤维素酶和果胶酶,rrHH,、,RRhh,设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂,种细胞，方法：,将杂种细胞培养成杂种植株依据的理论基础,是,。,II,若该过程是制备治疗,“,SARS,”,病毒的单克隆抗体，,A,为,人,B,淋巴细胞（染色体组成为,2A,XX=46,），,B,为鼠骨髓瘤,细胞（染色体组成为,2A,XX=40,）,用单克隆抗体制成,“,生物导弹,”,主要利用了抗体,的,特性。,A,细胞来自于,，杂种细胞,C,共有,个,染色体组。,杂交瘤细胞在体外培养时与植物组织培养的主要区别是,培养基要用,培养基。（物理状态），培养基中除,了添加必要的营养物质为还需加入,。,置大于,800,勒克斯光照下培养，收集分化的,细胞团,细胞的全能性,抗体与抗原结合，发挥特异性免疫效应,非典患者,4,液体,动物血清,6.,右图是制备分泌抗,X,抗体的过程，根据图解回答问题：,给小鼠注射抗原的目的是,_,。,在单克隆抗体制备过程中之所以选用,B,淋巴细胞和骨髓,瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具,有,_,的特性。,由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了,_,和,_,的动物细胞工程技术手段，前者常用的诱,导剂与植物原生质体融合不同的是可用,_,。,动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机,盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含,有,_,。,获得能产生相应抗体的,B,细胞,既能无限增殖，又能产生特定抗体,动物细胞融合,动物细胞培养,灭活的病毒,动物血清,在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞离散,开，以利于细胞融合，可用,_,处理离体组,织细胞使之分散开。,图中有两次筛选过程，其中步骤的目的是筛选出,_,，步骤的目的是筛选出,_,_,。,胰蛋白酶,杂交瘤细胞,能产生特定抗体的杂交瘤细胞,