实验方法比较试验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第九次实验 方法比较试验,方法比较试验是将候选方法与准确度已知的方法做对比，以评价候选方法的准确度。它同时可检测候选方法的恒定误差和比例误差的大小。,教学目的与要求,1.,掌握方法比较试验的原理和评价。,2,.,掌握己糖激酶法测血糖和氧化酶法测血糖的测定原理。,3,.,熟悉己糖激酶法和氧化酶法测定血清血糖的操作过程。,一、试剂与材料,1.己糖激酶法测定血糖试剂盒（工作液：试剂A、试剂B按2：1混合）。,2.氧化酶法测定血糖试剂盒（工作液：试剂A、试剂B按2：1混合）。,3.半自动生化分析仪。,4.实验血清。,三、血糖的测定（,己糖激酶法已讲,）,（一）实验原理,Trinder反应:,GOD,葡萄糖酸2H,2,O,2,氧化酶法,葡萄糖,2H,2,O,O,2,H,2,O,2,4-AAP 酚,POD,苯醌亚胺,2H,2,O HCl,2.混匀，37水浴7分钟，波长,500nm比色。,（二）操作方法,工作液,1ml,蒸,馏,水,10ul,葡萄糖标准,10ul,血清,10ul,1.空白管,标准管,测定管,工作液1ml,混合,混合,3.结果计算,测定管吸光度,GLU（mmol/L),5.56,标准管吸光度,GLU（mmol/L),5.56,GLU（mmol/L),5.56,GLU（mmol/L),5.56,4.注意事项,1.新配制的葡萄糖标准液须放置2h以上(最好过夜)，待变旋平衡后方可应用.,2.尿酸会干扰过氧化物酶反应，使结果偏低。,3.还原性物质可竞争H,2,O,2,使结果偏低。,4.严重黄疽、溶血及乳糜样血清使结果偏高应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。,四、方法比较,以葡萄糖已糖激酶法作为参比方法，葡萄糖氧化酶法为候选方法进行比较。,1.收集标本 每天收集高、中、低不同浓度标本8份，5天共40份。,2.测定 将标本编号，分别用两种方法先从1-8顺序测定，再从8-1顺序测定，记录测定结果,。,重复5天。,以对比方法,的结果为横坐标,被评价方法的结,果为纵坐标绘制,散点图。,3.绘制散点图,Y,X,4.检查散点图有无明显离群点,（1）分别计算每对结果差值，如：,X1-Y1、X2-Y2.,（2）计算所有差值的平均差值。,（3）离群判断 以4倍平均差值作判断限。某对差值超出4倍平均差值则视为离群点，剔除，若有两个离群点，则另做标本补充8分结果。,5.回归及相关分析,根据直线回归分析，求出回归方程y=a+bx及相关系数r。截距a反映恒定系统误差的大小，斜率b反映比例系统误差的大小，相关系数反映两种方法相关性的密切程度，r,0.975或,r,0.95，可接受,。,6.计算系统误差,根据回归方程的a、b值，可以计算候选方法的系统误差（SE）；并与不同医学决定水平（Xc）的允许误差（TEa）作比较。,要求SE=（a+bXc）-Xc 1/2TEa,7.配对t检验,通过统计软件进行配对t检验，t值是方法比较实验中系统误差和随机误差的比值，若tt,0.05(v),，表明两种方法间的系统误差和随机误差量相比相差不大，尽管有偏差，但可能由随机误差为主所致，不一定确实存在方法间的系统误差。,请预习：,甘油三脂测定,吸收曲线检测,