实验一、普通生物显微镜的使用

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验一、普通生物显微镜的使用(一,),动、植物细胞、真菌的观察及生物绘图法,一、实验目的：,1.了解普通光学显微镜和体视显微镜的基本构,造及功用，并正确掌握使用和维护方法。,2. 观察一些真核细胞的结构，学习基本生物绘,图方法。,3. 学习临时装片的制作方法。,二、实验原理：,（一）、显微镜概述：,显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为,光学显微镜,和,电子显微镜,两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。,（二）、显微镜的发明：,1. 最早由荷兰眼镜商在1600年前后制造的，它,的结构简单，放大倍数只有1030倍，可以,观察一些小昆虫，如跳蚤等，因而有人称它,为“跳蚤镜”。,这种显微镜是用光线照明的，属于光学显微镜。,2. 英国物理学家罗伯特虎克（,Robert Hooke， 1635 1703）,研制出能够放大140倍的光学显微 镜，并用它来观察软木薄片，发现了细胞。,3.,1673年有个名叫列文.虎克（,Antoni van Leeuwenhoek）,的荷兰人用自己制造的显微镜观察到了被他称为“小动物”的微生物世界。,他也被称为微生物的开山祖。,4. 1938年，德国工程师鲁斯卡（,Ernest Ruska, 1906,-,1988),制造出世界第一台透射电子显微镜 （,TEM）。1952,年，英国工程师,Charles Oatley,制造出第一台扫描电子显微镜（,SEM）,（三）、显微镜的分辨率:,分辨率,：也称为分辨力，它是指能把两个物点分,辨清楚的最小距离。,分辨率数值越高，分辨距离越大，则分辨率越低。反之亦然。所以，分辨率是以分辨距离来表示的。,其,计算公式,为:,D=0.61,入/,NA NA=n sina/2,式中,D,为分辨率，,A,为光波波长，,NA,为物镜的数值孔径(镜口率)。,在物镜上，有,镜口率(,N.A.),的标志，它反应该镜头,分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高。,各物镜的镜口率如下表：,物镜 镜口率(,N.A.),工作距离(,mm),10 0.25 5.40,40 0.65 0.39,100 1.30 0.11,显微镜的,总放大倍数,=目镜放大倍数,物镜放大倍数,公式为:,M = K,1,K,2,焦点深度,:,显微镜调焦到看清标本某一点时，不,仅是这一物点，而且它的上下两侧也,能看清楚的厚度叫做焦点深度。,要看到标本的全厚度，必须调节螺旋,仔细地从上到下进行观察,。,三、材料和仪器：,仪器：普通光学显微镜、体视镜,（附显微用品：,擦镜纸、香柏油、二甲苯、载玻片、盖玻片）,材料与器材：新鲜酵母液、滴管、镊子、培养,皿、标本盒（内有各种装片）,四、实验步骤：,（一）普通显微镜的使用及维护：,I,.光学显微镜的构造,普通生物显微镜由2部分构成：,：,光学部分,：包括物镜、目镜、光源、聚光器，是显,微镜的主体。,：,机械部分,：包括镜筒、镜臂、镜座、镜台(载物台）、,调节旋钮、物镜转换器等，用于固定材,料和观察方便,。,II,.显微镜的使用,1.,观察前的准备工作,.,显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否,完整和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光,器上端透镜进行必要的清洁工作。然后进行调节。,.,观察时要,双眼同时睁开,，一边观察一边进行记录,或描绘。,.,观察时所用的材料、药品和各种器具要预先备好,2. 使用方法：,（1）低倍镜的使用：,观察任何标本，均需从低倍镜,开始,。,检查：检查显微镜是否完好。,准备：将显微镜放于,前方略偏左,，转动粗调旋钮,将,载物台下降,，旋转物镜转换器使,低倍镜,正对通,光孔。,对光：,放标本片：,调节焦距,计算放大倍数：,错误原因：如按上述操作，依然看不到图象，,可能有以下原因：,A.,转动调节太快，超过焦点，需重新调节。,B.,物镜未对准通光孔。,C.,标本没放在视野内，需移动标本片寻找观察,对象。,D.,光线太强或太弱。尤其观察透明或未染色标,本时，应将光线调稍暗些，有利观察。,（2）高倍镜的使用：, 依照上述操作步骤，,先用低倍镜,找到清晰物象， 将需要观察的部分移到视野中央，,眼睛,从侧面注视物镜,，移动转换器，换高倍镜， 看目镜，,微调细调旋钮,，至看到清晰物象。,错误原因：如按上述操作，依然看不到图象，,可能有以下原因：,A.,观察的标本不在视野内。应在低倍镜下找到,后，移到视野中央，再换高倍镜观察。,B.,标本放反了。,C.,焦距未调好。,（,3）油镜的使用：, 先用,低倍镜,观察标本情况。, 换,高倍镜,，把需观察的部分移至视野中央。,将,聚光器升至最高位置，光圈开至最大。, 在盖玻片所要观察的位置滴一小滴香柏油，,放于载物台。, 把油镜移至工作位置。,慢慢调节粗细调节旋钮，使载物台,缓慢上升,，同,时细心,从侧面观察,物镜前端与标本之间的距离。,先使物镜前端与油滴,接触,，再慢慢上升载物台，,至物镜前端,接近而没有碰触到,盖玻片为止。（小,心损伤油镜或装片）,眼睛从目镜观察，缓慢调节细调旋钮至看清标本（注意只能,下降载物台,）,观察完毕，下降载物台，使油镜离开光轴，,及时做好油镜的清洁工作,（先用干净的擦镜纸擦去大部分香柏油，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦拭两次，最后用干的擦镜纸擦拭一次）。,玻片上的油可用,“拉纸法”,擦去：把一小张擦镜纸盖在载玻片的油滴上，其上滴一两滴二甲苯，趁湿把纸往外拉，连续几次，即可擦净（注意不要使用过多的二甲苯，并及时擦干净上面的香柏油，以免使装片受损）。,注意：,如果不出现物象或者目标不理想要重找，,A.,在,加油区之外,重找时应按：低倍高倍,油镜程序。,B.,在,加油区内,重找应按：低倍油镜程序，,不得经高倍镜，以免油沾污镜头。,3. 显微镜使用后的复原：,（1）下降聚光器约1,cm，,（2）,使物镜离开光轴，使通光孔正队两个物镜中,间，提升载物台至原来位置，,（3）把载物台上的标本移动器移至适当位置，,（4）关闭电源。,4、显微镜使用的注意事项,（1）持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不,可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。,（2）,轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边,缘，以免碰翻落地。,（3）,保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦,镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分,用布擦拭。,（4）,水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和载物台,如果沾污应立即擦净。,（5）,放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能,反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。,（6）,要养成两眼同时睁开的习惯，以左眼观察视,野右眼用以绘图。,（7）,不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，,也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。,（8）使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内。,（二）、体视镜的使用,体视显微镜又称实体显微镜,，它在观察物体时能产生正立的三维空间影像。,立体感强,，,成像清晰和宽阔,，又具有,长工作距离,，并可根据观察物的特点选用不同的反射和透射,光照明，是适用范围非常广泛的,常规显微镜。,（三）、标本的观察,“5 ”字片：低倍,人血涂片,：低倍 高倍 油镜,兔精虫涂片,：低倍 高倍,单层扁平上皮,：低倍 高倍,动、植物细胞有丝分裂切片,：低倍 高倍,日本血吸虫雌雄合抱装片,：肉眼 低倍,（四）、,酵母,临时装片的制作,1. 滴一滴鲜酵母液于干净的载玻片上，,2. 轻轻盖上盖玻片，注意,不要产生气泡，,3. 低倍、高倍镜下观察。,注意：观察时注意光线不要太强，以免影响观察,效果。,（五）生物学绘图方法：,1. 用2,H,铅笔绘轮廓，用,HB,铅笔描深，线条要光滑，,2. 图及文字部分全部用铅笔，文字用中文楷书，,3. 绘图纸上端写清实验名称，中部画图，下部写清所绘图名称、放大倍数，,4. 标明图中各部分名称，用直线引线并标在图的右侧，名称较多时，可先标在右侧，再标在左侧，,5. 可用光滑黑点表示明暗不同，不可大面积涂黑。,五、作业：,1. 绘图：绘出你用油镜所观察到的人红细胞视野图。,2.,思考题：,（1）总结使用显微镜应特别注意的几个问题。,（2）从低倍物镜转高倍物镜时应注意哪几点？,（3）接物镜上各铭文有何意义？,（4）用油镜观察和嗣后的操作步骤。为什么要,用香柏油作介质？还有哪些可作介质？,（5）镜检时，因光线过亮而成像不清晰，怎么办？,（6）为何不能直接用高倍镜观察标本？,（7）怎样计算显微镜的放大倍数？放大倍数是对,长度还是面积而言的？,（8）观察时若发现视野内有异物，如何确定该异,物在目镜、物镜、还是在玻片上，如何去除？,（9）光学显微镜与体视镜有何不同？,（10）制作临时玻片标本时，如何避免产生气泡？,