《肠道细菌》课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第,7,章 肠杆菌科,(,Enterobacteriaceae,),p. 103,概述,一大群居住在人和动物肠道中,生物学性状近似的革兰阴性杆菌,属于肠杆菌科,（,Enterobacteriaceae,）,多数是肠道的正常菌群,至少有,44,个菌属，,170,多个菌种,少数为致病菌，是胃肠传染病的最重要病原菌,肠杆菌科细菌分类及致病性,埃希菌属,大肠埃希菌,肠道及肠道外感染,志贺菌属,痢疾志贺菌,细菌性痢疾,沙门菌属,伤寒沙门菌,沙门菌病,枸橼酸杆菌,非劳地枸橼酸杆菌,泌尿道感染等,克雷伯菌属,肺炎克雷伯菌,呼吸道及泌尿路的医院内感染,肠杆菌属,产气肠杆菌,欧文菌属,草原欧文菌,植物病原,沙雷菌属,粘液沙雷菌,呼吸道及尿路的医院内感染,哈夫尼亚菌属,蜂窝哈夫尼亚菌,胃肠炎,爱德华菌属,迟钝爱德华菌,肠道及肠道外感染,变形杆菌属,普通变形杆菌,普罗非登菌属,雷极普罗非登菌,尿路及灼伤感染或其他医院内感染,摩根菌属,摩根菌,耶尔森菌属,鼠疫耶尔森菌,鼠疫,小肠结肠鼠疫耶尔森菌,肠炎,主要的肠道感染细菌,致病性肠道杆菌：沙门菌属；,志贺菌属；,部分埃希菌属。,条件致病性肠道杆菌：部分埃希菌属；,变形杆菌属；,克雷伯杆菌属。,乳糖发酵试验,共同特性：,1,、相似的形态染色,2,、简单的培养条件,3,、活泼的生化反应,重要试验,初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌,肠道致病菌,肠道非致病菌,多数,不发酵,乳糖,多数,发酵,乳糖,4,、抗原构造,复杂,鞭毛抗原（,H,）,菌体抗原（,O,）,K,或,Vi,抗原,还有：,多种菌毛抗原,共同抗原,5,、抵抗力：,不强,6,、易变异：,溶源性转换,生化反应性变异,通过,引起,耐药性变异,毒力性变异,转导,接合,第一节 埃希菌属,(,Escherichia,),包括,6,种菌，以大肠杆菌最常见。,大肠埃希菌,(,E. coli,),正常菌群、条件致病菌、致病菌、环卫和食品卫生,的检测指标。,一、生物学特性：,1,、,形态与染色：,2,、,培养特性：,3,、,生化反应：,活泼，能酵解多种糖,(,乳糖,),类产酸,产气，,IMViC,实验为,: +,、,+,、,-,、,-,S-S,平板,:,形成红色菌落,S-S,平板培养结果,4,、,抗原构造：,复杂,大肠杆菌主要有,O,、,H,、,K,三种抗原,血清学的排列方式按,: O,：,K,：,H,5,、抵抗力：,较弱,胆盐、亚硝酸盐、煌绿对其有,抑制作用。,二,、致病性,（一）致病物质,粘附素、外毒素。,（二）所致疾病,1,、肠道外感染,败血症、新生儿脑膜炎、泌尿道感染。,2,、胃肠炎（肠道内感染）,（,1,）肠产毒型大肠埃希菌（,ETEC,）,A.,大肠杆菌肠毒素,(enterotoxin),a.,不耐热肠毒素（,labile enterotoxin, LT,）：,对热不稳定，,65,。,C 30 min,失活,与霍乱,肠毒素有共同抗原（,75%,）,LT,的组成,:,LT,分,LT-,和,LT-,，对人致病的是,LT-,。,LT-,由一个,A,亚单位和,5,个,B,亚单位组成,B,亚单位： 受体为,GM,1,神经节苷脂,A,2,：与,B,亚单位结合,A,1,：毒素的活性部分,A,亚单位：,LT,的作用机制：,（,1,）,B,识别受体并结合,（,2,）,A,进入细胞，裂解为,A,1,和,A,2,A,1,为腺苷二磷酸核糖转移酶，使辅酶,上的,ADPR,转至,G,蛋白上，形成,Gs,；,Gs,使细胞内,cAMP,，导致小肠液,分泌过度，,超过重吸收能力，引起剧烈腹泻。,b.,耐热肠毒素（,stable enterotoxin, ST,）：,ST,由,STa,、,STb,亚单位组成，,ST,a,为毒性所在。,ST,是通过激活鸟苷酸环化酶，使,GTP,转化为,cGMP,，导致小肠液吸收减少而腹泻。,B.,定居因子（,colonization factor,粘附素）：,一种特殊的菌毛,（,2,）肠侵袭型大肠埃希菌（,EIEC,）,侵犯较大儿童和成人，症状类似菌痢。,侵袭力与含编码侵袭性,pINV,基因的一种,大质粒（,120140MD,）有关。,（,3,）肠致病型大肠埃希菌（,EPEC,）,婴幼儿腹泻的主要病原菌，病菌在小肠粘,膜表面大量繁殖，致细胞结构破坏，导致,严重腹泻。,步骤：,1. Bfp,介导菌与细胞的疏松粘附,2.,信号传递，,eaeA,基因活化,3.,紧密粘附素介导菌与细胞的紧密结合。,（,4,）肠出血型大肠埃希菌 （,EHEC,）,致病因子：,Vero,毒素,紧密粘附素,所致疾病：症状轻重不一，严重者并发溶血性,尿毒综合征,(HUS),，死亡率,10%,。,（,5,）肠集聚型大肠埃希菌（,EAEC,）,婴幼儿持续性腹泻,毒素为肠集聚耐热毒素（,EAST,）,三、微生物学检查,（一）,细菌的分离鉴定,1,、,标本：,肠道外感染,中段尿、血液、脓液、,脑积液等,肠道感染,粪便,2,、分离培养与鉴定：,致病性大肠杆菌引起的腹泻,EAEC,小肠 婴儿持续型腹泻 侵袭和毒素,四、防治原则,菌毛疫苗在家畜已成功,高卫生标准,防止水（,ETEC,）、肉类和牛奶（,EHEC,）的污染,耐药普遍，根据药敏结果选用药物,在环境和食品卫生学上，常被用作粪便污染的检测指标, 3,个大肠菌群,/,1L,饮水,100,个,细菌总数,/,1,ml,饮水,卫生学指标,大肠菌群指数,每,1000,ml,水中大肠菌群数,我国饮用水卫生标准：,细菌总数,每,1,ml,或,1,g,样品中细菌总数,在分子生物学和基因工程实验中,大肠杆菌,也是重要的实验材料和研究对象,重要的实验材料和研究对象,第二节 志贺菌属,（,Shigella,）,通称痢疾杆菌，包括,4,群，近,50,种血清型。年,病例,2,亿，死亡达,65,万例。发病前,5,死亡前十,一、生物学特性,1,、,形态与染色：,G,-,中等大小杆菌，无芽孢，,无荚膜，无鞭毛，有菌毛,2,、,培养特性：,S-S,平板上无色、透明菌落,3,、生化反应：,不发酵乳糖,宋内志贺菌能迟缓发酵乳糖,4,、抗原构造与分类：,该菌有,O,和,K,两种,Ag,，,据,O,抗原可将该菌分为,4,群、,50,个血清型。,A,群：,痢疾志贺菌，有,10,个血清型,B,群：,福氏志贺菌，有,13,个血清型,C,群：,鲍氏志贺菌，有,18,个血清型,D,群,:,宋内志贺菌，只有,1,个血清型,我国以,福氏,多见，其次是,宋内,双糖铁培养基和动力实验结果,A.,大肠埃希菌,B.,志贺菌,C.,阴性对照,二、致病性,（一）,致病物质：,1,、,侵袭力：,菌毛能粘附于回肠末端和结,肠的上皮细胞，穿入固有层生长繁殖，引,起炎症。,入血罕见,2,、内毒素,(endotoxin),：,作用于肠壁，使 其通,透性增高，促进内毒素的吸收；破坏肠粘膜，,形成炎症、溃疡，呈现典型的脓血粘液便；,作用于肠壁植物神经，使肠蠕动共济失调，,肠功能紊乱。,3,、外毒素：,志贺毒素（,shiga toxin, Stx,）,一个,A,亚单位与,5,个,B,亚单位构成，,A,亚单位,可裂解,60S,核糖体亚单位的,28S rRNA,，致使蛋,白质合成中断，肠上皮细胞损伤。,1,、侵袭力,：,菌毛,有利于菌粘附至肠粘膜,2,、毒 素,：,加重局部和全身症状,内毒素,作用于肠壁,通透性增加,粘膜炎症、,溃疡,局部,全身,内毒素血症,外毒素（,A,群,1,型）,与内毒素协同作用,里急后重,（二,）,所致疾病,痢疾志贺菌,感染病情一般较重，,宋内志贺菌,多,引起轻型感染，,福氏志贺菌,感染易转为慢性。,1,、,急性菌痢,(acute bacterial dysetery),：,常有发,热、腹痛、里急后重、粘液脓血便等典型,症状。,2,、,中毒性菌痢,(toxic bacterial dysetery),：,以小儿,为多见，无明显消化道症状，全身中毒症状明,显，死亡率高。,3,、,慢性菌痢,(chronic bacterial dysetery),：,10%-,20%,急性菌痢患者可转为慢性，症状常不典,型，易误诊。,临床表现,急性细菌性痢疾,急性典型：发热、腹痛、脓血粘液便,急性,非,典型：小儿,中毒型,成人,易误漏诊,慢性细菌性痢疾,：病程迁移二月以上,三、免疫性,以消化道粘膜表面的,SIgA,为主。病后免疫期短。,四、微生物学检查,1.,细菌的分离鉴定：,取脓血粘液便及时送检或保存于甘油缓冲盐水中。,脓血粘液便,S-S,平板 鉴定 生化反应,血清学鉴定,2.,快速诊断法：,荧光菌球法； 协同凝集试验。,及时送,/,暂用,3%,甘油缓冲水保存,S-S,平板（无色透明小菌落）,血清学反应（玻片凝集）,明确诊断,分离培养,新鲜脓血便,/,肛拭,双糖培养基（生化反应）,快速诊断,荧光菌球试验,协同凝集试验,五、防治原则,注意,4F,，尤其饮食从业人员,Sd,活疫苗，,FS,双价菌苗等,多种药物可选择，但注意多重耐药菌株的出现,第三节 沙门菌属,(,Salmonella,),肠道沙门菌（,6,个亚种）,-,2500,多血清型,2,种,邦戈沙门菌：,19,型,对人类致病的主要有引起肠热症的伤寒、甲乙型,副伤寒沙门菌，引起食物中毒或败血症的鼠伤寒沙门,菌、肠炎沙门菌、猪霍乱沙门菌等。,8000,万病例,/,年,一、生物学性状,1,、形态、染色：,G,-,中等大小杆，有周鞭毛，有菌毛。,2,、培养特性：,S-S,平板上：,中等大小，半透明，,S,型,3,、生化反应：,对鉴定本菌属有重要参考价值。,4,、抗原构造：,是分类的主要依据。,主要有,O,和,H,两种抗原，少数有,Vi,抗原。,OAg,：,可将菌分为,42,组,，产生,IgM,类,Ab,；,常见沙门菌的主要生化特性,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,HAg,：,可将组内细菌分为不同的种或型，,产生,IgG,类,Ab,；,分为（,1,）第,I,相,HAg,：特异性高，以,a, b,（,2,）第,II,相,HAg,：特异性低，以,1, 2,ViAg,：,有助于带菌者的检测。,伤寒杆菌的表面抗原,Vi,抗原,抗原性弱，刺激机体产生短暂低效价抗体,伴随活菌一起存在,测定,Vi,抗体有助于检出带菌者,因为,所以,本质,5,、抵抗力：,较差。,二、致病性,（一）致病物质,1,、侵袭力：,菌毛粘附,M,细胞，输入沙门菌侵袭蛋白。,耐酸应答基因,形成“不完全吞噬”,2,、内毒素：,体温升高，白细胞下降，中毒休克等。,3,、肠毒素：,个别可产肠毒素，类似大肠杆菌肠毒素。,（二）所致疾病,1,、肠热症（,enteric fever,伤寒和副伤寒）：,由伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌引起。,1,、致病物质：,侵袭力：,O,抗原,Vi,抗原,M,细胞,毒 素：,内毒素,2,、所致疾病：,伤寒副伤寒,食物中毒,败血症,外毒素,-,肠毒素,菌经消化道,（胃酸、 机体抵抗力）,在肠壁固有层,被巨噬细胞吞噬后继续生长繁殖。,经胸导管入血,第一次菌血症,（发热、不适、全身痛等症状）,经血入肝、脾、肾、胆囊等器官并生长,再次入血，引起,第二次菌血症,（持续高热、相对脉缓、肝脾肿大、玫瑰疹、白细胞下降、,全身明显中毒等典型症状）。,胆囊中的菌通过胆汁,入肠道， 再次侵入肠壁，致,型超,随粪便排出 敏反应,，,局部坏死和溃疡，,重者肠出血或肠穿孔。,胆囊,-,肠道,-,粪排菌,皮肤,-,血拴出血,-,玫瑰疹,肾,-,尿,肝脾,-,肿大,骨髓,-,受抑制,伤寒和副伤寒的致病过程,伤寒和付伤寒杆菌,小肠上皮粘膜,肠系膜淋巴结,固有层淋巴结,进入血液,再次进入血液,第一次菌血症,第二次菌血症,2,、胃肠炎（,entrocolitis,食物中毒）：,常由鼠伤寒,沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌引起，多为,集体中毒，一般恢复快。,最常见的沙门菌感染,3,、败血症,(septicemia),：,多见于儿童及免疫力低下,的人，常由猪霍乱沙门菌、丙型副伤寒沙门菌,等引起， 症状严重。,4,、无症状携带者,(asymptom carrier),：,1%5%,的患,者，症状消失后,1,年内仍可检出菌。,三、免疫性,病后有较牢固免疫力，主要为细胞免疫。,胃肠炎的恢复与局部的,SIgA,有关。,四、微生物学检查,（一）细菌的分离鉴定：,1,、,取标本：,据病程不同可分别采血、骨髓、,尿或粪便作标本。,伤寒和付伤寒食物中毒败血症,第,1,周取静脉血可疑食物血,第,1-3,周取骨髓液呕吐物,第,2,周起取粪、尿粪,微生物学检查,查病原体,标本,SS,平板,生化反应,血清学鉴定,双糖发酵等,玻片凝集试验,2,、分离鉴定：,标本接种于,S-S,平板，,37,o,C24hr,后，,挑无色半透明的菌落，转种到双糖铁培养基、,半固体培养基，并作五管糖发酵及血清学鉴定。,也可做染色镜检。,（二）血清学诊断,（肥达反应,-,Widal test,）,-,查抗体,1,、,原理：,用已知伤寒沙门菌的,O,、,H,抗原和甲,型副伤寒沙门菌、肖氏和希氏沙门菌的,H,抗原,与不同稀释度的待检血清作定量凝集试验。据,抗体含量和动态变化以辅助诊断伤寒病原菌。,2,、,结果判断参考：,（,1,）抗体含量：,O,效价,1,：,80 H,效价,1,：,160,（,2,）动态观察：,病程中效价依次,升高,或恢复期效价增加,4,倍者始有诊断意义。,（,3,）,H,、,O,抗体在诊断上的意义：,O,抗体（,IgM,）,：出现早，维持时间短（半年左右），,消失后不易受非特异性,Ag,刺激而短暂地重新出现。,H,抗体（,IgG,）,：出现较晚，维持时间长达数年，消,失后易 受非特异性,Ag,刺激而短暂地重新出现。,判断：,O,抗体,H,抗体, 可能感染伤寒或副伤寒, 患伤寒的可能性不大, 感染早期，或其他,沙门菌感染, 预防接种或,非特异性回忆反应,（,4,）少数病例始终为阴性。,（三）,带菌者的检查：,最可靠的方法是分离出病原菌。,Vi Ab,1,：,10,为阳性（,90%,）,五、防治原则,1.,目前减毒活菌苗方面以,Ty21a,株较好，有效,期至少,3,年，保护率,69%,2.,治疗：氯霉素 氨苄青霉素 环丙沙星类,第,8,章 弧菌属,(,Vibrio,),p. 117,概述,包括,56,种菌，其中,12,种可致病，最重,要的是霍乱弧菌、副溶血弧菌。,霍乱弧菌,(,Vibrio cholerae,),1817-1923,年，共大流行,6,次，均起源于孟加拉,1883,年分离出霍乱弧菌，,古典生物型,1961,年，第,7,次大流行，起源于印度尼西亚,1905,年分离到，即,El Tor,生物型,1992,年，印度和孟加拉出现,O139,，,第,8,次？,一、生物学性状,1,、形态染色：,G,，弧形或逗点状，单毛菌，,无芽胞，有普通菌毛和性菌毛。,2,、培养特性：,需氧，营养要求不高，,耐碱不耐酸（最适）碱性蛋白胨水,或碱性平板上生长好。菌落透明或半透明，,无色扁平。,3,、生化反应：,分解多种糖，产酸不产气,霍乱红反应，吲哚实验均阳性,5,、,抗原构造及分型：,H,抗原：,特异性低,O,抗原：,特异性高，,可耐受,100,。,C 2h,，分,A,、,B,、,C,抗原因子,；,据,O,抗原可分为,200,多群。,O-1,群又分为,3,血清型,小川型 常见,稻叶型 常见,彦岛型 极少见,注意：,古典和,El Tor2,个生物型，以及,O139,6,、抵抗力：,耐碱不耐酸,二,、致病性,（一）致病物质：,1,、霍乱肠毒素,(cholera toxin, CT),：,由,1,个,A,亚单位和,5,个,B,亚单位组成，,A,亚单位为,27.2 kD,B,亚单位为,11.7 kD,作用类似大肠杆菌不耐热肠毒素,。,2,、鞭毛、菌毛,及其它毒力因子：,p. 119,3,、,荚膜多糖和,LPS,毒性 决定簇,：,p. 119,（二）所致疾病：,由,O1,群、,O139,群引起,人类唯一易感，无症状者与,感染载体,有关。,感染该菌,2-3,天后，出现剧烈吐泻、严重,失水,(1L/h),、微循环衰竭、电解质紊乱、代酸、,肾功衰，最终休克死亡。,三、免疫性,病后有较,牢固免疫力,，以抗,毒素,和抗,O,抗体为主，,SIgA,也有保 护作用。,O139,群病后免疫机制有差别,四、微生物学检查,强调快速、准确,1,、,直接镜检：,取米泔水样粪便悬滴检查。,2,、分离培养：,碱性蛋白胨水增菌，,TCBS,分离,细菌，注意做,血清学鉴定,。,血清学试验,包括抗,O1,多价和单价血清、,抗,O139,血清,五、防治原则,1.,注意,4F,2.,疫苗：死菌苗,-,亚单位疫苗,3.,补液和电解质,4.,四环素、氯霉素等,克雷伯菌属,(,Klebsiella,),共,7,种，对人类关系密切的有肺炎克雷伯菌、,催娩克雷伯菌、鼻炎克雷伯菌鼻炎亚种、硬鼻克雷伯菌鼻硬结亚种。,代表菌种为,肺炎克雷伯菌,(,K. pneumoniae,),简称肺炎杆菌。,在鉴别培养基上发酵乳糖，出现有色菌落。普通培养基上形成的菌落较大，呈灰白色粘液状。菌落在平板上互相融合，以接种环挑之易拉成丝状。此特点有助于鉴别此菌。,该菌易形成耐药性，尤其易形成多重耐药性。临床分离株多数菌株对羧苄青霉素高度耐药，其,MIC,200,g/ml,，而对头孢噻肟酯、丁胺卡那霉素，尤其环丙沙星敏感。,生物学性状,肺炎克雷伯菌：,通称肺炎杆菌，条件致病菌，医院内感染的重要细菌。当机体免疫力下降、使用免疫抑制剂或长期应用抗生素导致菌群失调时，能引起多种感染。以肺炎最常见。可引起尿路感染、创伤感染及腹泻等，有时导致严重的败血症、脑膜炎、腹膜炎等。,治疗宜选用敏感药物，如头孢噻肟酯及左氧氟沙星类抗生素。,鼻炎克雷伯菌,:,能引起慢性萎缩性鼻炎,(,臭鼻症,),。,鼻硬结克雷伯菌,:,主要引起慢性肉芽肿病变和硬结形成。,致病性,总结,-1,从,1994-2001,年，从我国,32,家医院,ICU,病房分离到10279株革兰阴性菌，最常见的依次为,:,铜绿假单胞菌,大肠埃希菌,肺炎克雷伯菌属,不动杆菌属,肠杆菌属,7,年中，亚胺培南对这次研究的细菌一直保持着非常高的敏感性和稳定性：平均为,87%,，是历年敏感率最高和稳定性最好的抗生素。,亚胺培南是重症患者经验用药的最佳选择之一。,呼吸道标本中最常见,:,铜绿假单胞菌（,25%,）,肺炎克雷伯菌（,18%,）,鲍曼不动杆菌（,11%,）,血和尿标本中最常见,:,大肠埃希菌,肺炎克雷伯菌,铜绿假单胞菌,对所有革兰阴性菌活性最高、且历年其活性不减的是,亚胺培南,（,87%,）,其次是头孢哌酮,/,舒巴坦（但敏感率从,86,降至,75%),阿米卡星（,75%,）,头孢他啶、头孢吡肟、哌拉西林,/,三唑巴坦的敏感率为,71%,73%,。,总结,-2,总结,-3,7,年中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的敏感率,：,亚胺培南,：,98%,，,MIC,90,为,0.5 g/ml,阿米卡星,84%,、头孢他啶,83%,、头孢哌酮,/,舒巴坦,83%,、哌拉西林,/,三唑巴坦,80%,、头孢吡肟,80%,头孢哌酮,/,舒巴坦的敏感率：,1996,年,90,，降至,2001,年的,74,头孢噻肟及头孢曲松的敏感率：从,82%,降至,57%,环丙沙星对大肠埃希菌的敏感率：从,54%,降到,25%,；对肺炎克雷伯菌的敏感性从,90%,降至,75%,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱,内酰胺酶：,1994,年,-11%,；升高到,2001,年,-34,总结,-4,对于阴沟肠杆菌的体外活性（敏感率）,亚胺培南,(95,) ,头孢吡肟,(76,) ,阿米卡星,(70,),对于弗劳地枸橼酸菌的体外活性（敏感率）,亚胺培南,(94,) ,头孢吡肟,(80,) ,阿米卡星,(80,) ,头孢哌酮,/,三唑巴坦,(78,),阴沟肠杆菌和弗劳地枸橼酸菌对三代头孢菌素的敏感率仅为,40%,60%,亚胺培南,对肠杆菌科细菌保持很高的敏感性,但其他抗生素的活性在降低,变形杆菌属,(,Proteus,),包括：,普通变形杆菌,(,P.vulgaris,),，为代表菌种,奇异变形杆菌,(,P.mirabilis,),G,-,杆菌，有时呈卵圆形或长丝状等多形性。无荚膜，周围有鞭毛，运动活泼，有菌毛。,生物学性状,迁徙性生长现象,(Swarming growth),：变形杆菌,在湿润的固体培养基上呈扩散生长，于琼脂表面形成一层波纹状薄膜。,尿素酶实验（,+,）,(2,4h),，在鉴别上有参考价值。,生物学性状,生物学性状,变形杆菌的,O,、,H,两种抗原可用以分血清群及型别。,外斐反应,(Weil-Felix reaction),：,本属细菌中的某些特殊菌株如,X19,、,X2,及,XK,的,O,抗原能与立克次体患者血清凝集。因此可用这些变形杆菌菌株代替立克次体抗原与患者血清做凝集反应，称,外斐反应,。,正常菌群,：变形杆菌为人体正常菌群。,条件致病：,食物中毒、尿路感染、肺炎、心内膜炎、,乳突炎、脑膜炎、创伤及烧伤感染等。,也有的能引起夏季婴儿腹泻及新生儿败,血症，其中以泌尿系统感染,最,常见。,致病性,