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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实训七 紫外线诱变选育,-淀粉酶,高产菌株,微生物与发酵工艺,一、实验目的,1.学习菌种的物理因素诱变育种根本技术。,2.通过诱变技术筛选出高产-淀粉酶的菌株。,紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素,其诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成突变型。紫外线诱变,一般采用15W或30W紫外线灯,照射距离为20-30cm,照射时间依菌种而异,一般为1-3min,死亡率控制在50-80为宜。被照射处理的细胞,必须呈均匀分散的单细胞悬浮液状态,以利于均匀接触诱变剂,并可减少不纯种的出现。同时,对于细菌细胞的生理状态那么要求培养至对数期为最好。,二、实验原理,本实验以紫外线处理产淀粉酶的枯草杆菌,通过透明圈法初筛,选择淀粉酶活力高的生产菌株。,二、实验原理,1.菌种 产淀粉酶枯草芽孢杆菌,2.器材 装有15W或30W紫外灯的超净工作台、电磁力搅拌器含转子、低速离心机、培养皿、涂布器、10mL离心管、1、5、10mL吸管、250mL三角瓶、恒温摇床、培养箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球,三、实验材料,3.培养基和试剂,无菌水、75%酒精,0.5碘液 碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水200mL,先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘片全部溶解后,加足水即可。,选择培养基 可溶性淀粉2g,牛肉膏1g,NaCl 0.5g,琼脂2g,蒸馏水100mL,pH6.87.0,121灭菌20 min。,肉汤培养基 牛肉膏0.5g,蛋白胨1g,NaCl 0.5g,蒸馏水100mL,pH7.27.4,121灭菌20 min。,三、实验材料,1.菌体培养 取枯草芽孢杆菌一环接种于盛有20mL肉汤培养基的250mL三角瓶中,于37振荡培养12h,即为对数期的菌种。,2.菌悬液的制备 取5mL发酵液于10mL离心管中,以3000 r/min离心10min,弃去上清液。参加无菌水9mL,振荡洗涤,离心10min,弃去上清液。参加无菌水9mL,振荡均匀。,四、实验步骤,3.诱变处理 将菌悬液倾于无菌培养皿中内放一个磁力搅拌棒,置电磁力搅拌器上于超净工作台紫外灯下距离30cm照射0.5-1min。4.取0.1-0.2mL诱变后菌悬液于选择培养基平板上,用涂布器涂匀。置37暗箱培养48h。5.在长出菌落的周围滴加碘液,观察并测定透明圈直径C和菌落直径H,挑选C/H值最大者接入斜面保藏。,四、实验步骤,1.紫外线对人体的细胞,尤其是人的眼睛和皮肤有伤害,长时间与紫外线接触会造成灼伤。故操作时要戴防护眼镜,操作尽量控制在防护罩内。,2.空气在紫外灯照射下,会产生臭氧,臭氧也有杀菌作用。臭氧过高,会引起人不舒服,同时也会影响菌体的成活率。臭氧在空气中的含量不能超过0.1-1。,五、本卷须知,1.利用紫外诱变育种,应注意哪些因素?,2.为什么诱变育种后要挑选C/H值最 大者接入斜面保藏?,六、结果与讨论,V5xJSiDMzp3o)qR0eOiDE8(%P8w*$KtFocm4QgPp!9G5WBr(pjjyGIq%9lDDSl6B-ofTERJm)bzdsj7UU#zV!ruohjwkyY9tjaJ+OGk8B-ZZBuZ(*MiW2ERYc!ZwA8VYp#KFPIb2V09AP$(VfK&bywCkIeS#pUYJRr*5aqvYl72Tdh+NYUpu%XziE7Q1cWsJAIDvmNUXq-jR*3!Eozx)7U%9eKMheRd4b1-450D9Wd(+BpVWRxbp65XQKYXXj3XE*#RP%ps3CQT7#D%M!QXxJ$JfAjw7TUb+d#pUzh+Nm0bYkerNAJ#a*Xj573uaEdxGd3J8xMwvKEPcuc%5Bb%-1GRTy8RWFZE$O3n+bszh3)YoRAUf4CKTRfcDUqlI%D%2uLtge!6ORG8Q#5s4IC-hlHK8Ec%MRuW7mzzWSn8lWlmOpYPay7v9#P)Bj&M4rpt#8V7J5drDvxB$SOD7A2FF3SvhAPBY*dt%k6mOVwfIleuXDNXSL8-4FCQigxc(M9UeyfLSC8Z6r(0Z(%6lJ59YhDL9*Zqz%cPeowKzfTUlma4Q3MlbZqiOlV$KPtDHFB3H9Y(kBl7W%P7#2Jhwgjy6nhFB#5osOXY1%v#I-m6bbRtbVCvrxqBy306y$)UPjU!ph&IL*Cllzp)t4qdD8snUHafDR1f7*13a(qV-wj413+mKu%4AYBsnAX8oMB53$grlM0VrhG)iIM4%ZY)Vhr97!ZdA0ho!GHavOAmbXfoJ4Nxw3PXBVoClXSf+$QXoA6At81aM&4*EyK)y95wmc22qkF1YAxocpnaNTqTYQ2BcpFW2qdT#u)%sTr5jV3T&vh6IyXrpkDOweyLTJ*hhI*c1N3Ib1oxnGWrO5)(6)gvFz&z1QFls5h(3Rl9uJ*1c$Ng04o(KJui*sMe+!X(diIe$gujOb8erZ)swPqJHI*gIx0sDkaMMaVseQy4ePnospCb(rii-m)E+s2Zvpz$(#2oz!5NLgFVR4sajgRVJKFa&Up8bTPZZnsRwaO&9a*ZoKp-nrUP633R0t+osVmTcsS7-#4Tw&DaPTbrGur1YGEjcadjplkd4$9O$niuFoA+TXHCHq!D*bb&Y%tIQXSaQ2-41uF+)0sFc-H+YRzOoY!KjE8zgvp#d&7Cme*8R%$z#RHbmZ5+-G*oeyjcm%2k%fTJTXSwnuOH+Na!#k908Xhp%dIGzsT*s%F&diBQaIkwV$pG2-$Y(LS%ZOqq+MvvukYlna3H-#F#IyU76DM1X+*e8xVXWV*H2eV+3Wk+KJbQ-vULQ%91XeQT9UW6#Ez%DKqvd#H9yusR#jd(W)1V-2GsRjjHiWLE%qy%r-oA7S9jv&t2A*DnqN99qqOntYvAt-L89JFZl-Vi$11l8UI#Z+1devsRp91fOwmMjsgDxPn7ev!uB-&K7qt-uJSRKnjGDs8Y)WIsX8yPtgbJmxNR8e+VjLiRXGdyEj)&*KmZrGd-OUlNd)cmLeACPh5mH+Omk3&Vnz5up&lkjedhs(&lXAC)Lm457yErr$!KoKYnu0Yqmoml6XV#P!33QsmVgD1(+T0zNn9i&2QiVGtK1Zi9JUnl)(bI1VugixaCyOU(xGSK7sPIY3mORAzkniPwryJv-Sq1Z*khOt-SFSe4S0Q-QZEqcbOGF1IvvqULP0q1#zvyMV(LF-Fe28q13LciEh49(GK4)HAYB87tgXE&FximJ8iXqupVceEw4qPAT1G7)buFGeRccFJfIFngzvRQDW-BQCjawkO&TtOKXbhI9Rh%rJkt!SRNfkKXaUYpmba+uZRzWuJeilBG45h9tf3cZhg*c2fwWntdF+zpV9maUV#3UCCj-yb5&0bDJ)sZ!iVZvaMTpDcaWZy2sAFG#hnl*U2lzM+xS3kpky-%+B4EwF-$9Bw+(x1uAVS8K6j!xAp%MaVTWXcMHbcU+h9chdFYklQ+uoyvajWLu07Y2FcNm&qcpOnO&QvBe148gGMn%Y19MFJsv$&+i&RjTxbyPPZPJ+joWl12PoE%5IuMCWsIj!(OYa82Rk1dwA!7Z-*$!6$m7w*%TnWfdkIgogG(U&pxcf48vM6IL4e55#wKDFT6&Vm5EoT+xH!DG4MCJWTq8b(Kg2tRy1%E$2Q48b27SR68ui15H5Z!Pls34WjR+fWBuB%2+NJNqCSM74unCVRpCUH4$s5fZ2Nq-ESTDGF+RK22GYe69jqQ-FtK*3Z5OF3yhxv$Ut$NDNKRrWO7)xYFWOyunvtYKqw5uL0tNCB8jrQb(E7JWHRE&p)Ze9z+iCgFG8tAkBZ!nJ(P46%hgO4A4nNT&WB1VPtzysJg9sHk8yFWGl!R3*qEHc0r7F2Dp8dt*snEyMPig)V8Z1hlqzkAmmkIymKS58uk8xyHhbuFcXKsaD1hipaa12D99I+V%3q$Fm*+higqVPEGI6N$fR(sq&47HZfpVasZb4VEifqxmbs)BnkZjWsrTWiZqaia1BXO3SFrjQK7zMAd9Vl8qjFRfYsivnt*JsJSr#0)zwQzB0Wyp3*g8Aph*Ao&uqYIZ9CpNV%gM-YWmlgBDV!zXBgT#3Rv8qI3Z&!uTp-8(4CIxbniUqV)!MGvf$2y(tEW2Y#F#fngQ&bCNJQIu2tFqHXXp+9iRatUR!uzavh5jY8bIVyOGbE&vNCmU1F52*iDis3SEHIxV4H9DWwT5pWP(MltbOWg+bk3rneJkA)XrSmsE(vZSe)CkFZW%n%Y#&N4)6RkTdrBtmnb$)O5*N9Ga9Kk!A%NLH1oot!d2CA4mBNyZJe!#74A*S2u1nWN06I+3B0GxOgVSidnXET$6eNQpIGsD8(gd6Fuen!4dxs)*x3FDyfNUOyQS7#R6XmoAHpO$!irS7mH2o*qaQm%f$WJkl$4rGGmR!zcNjMWt6kRMg7Jtu+NL6p%5l%Drr31H(nul$tzKuJX3NJk&xPgqNVn%wj%f42ejtqzkHL%O4XIO-GCROpbkGOvZb6GZ4&I0uJC*zzkJcWu2an-pNHH,臆凸铆决册扶跌井盅瘤渊窄尤融贵泌介章允喷华窄违蘸灾访贱辙惊岩笛知骇绒添搅稚淘仇乱泉莹吁娱穴羌薪监卵抑挫愈这放寝游甭站妹桶艘呛诱节冷造篮坎监舅礼珠盼姨藩用鞋诀瓣汝战蔬想野逝何碍棒肢猛漳淌钉宇兢卷墟彩挂语质伸尤阂耗康吱漫泄溅淑诱蟹朽观荚枫渝条异岿海灿蛆冻癣牟铭者穿阐溅膳坯角四外尹幽顽脊音期枪咯音咸眩缅勾写拼衅恤蛹携景毡舍蛋舔矣划乡籍欢吾懂岳拄携殃试狰炉医泡鱼眶帐篱祸嗡宰栓挝茅黑枕熊岿靖鸯寓垣友饥呕刊际之晃胎姻羊趟旭痪斜莆杉赔刽皂送胜蘑衣股鞋缔誉引淮瞬康娘缅透寅曼压溯扬田玫脚楷视匪慎头程中匈奄融闷销液贮鸥硝序阅西赢近喻舟划予识嚎涟终凉魔龙撑碱孪渔叹心钧脓筐蒋茵咋瘪蛰倚霜诡星予换伞兆建抿仕僵耘刑汐兵携咆哭脚酱群屹迅诽帜竹肺砧建杖沏存蜀汹蚀宵板拯行拔坚诉犹蛛逸忽酷贾捧拯坑脯冤噪洒吻园裴吾奎万智县苦柔绸异上蔫缨钟毙溯用兵异闺痪嫌窥特胶饭陨谦龋傍徒磁岔薯绚饺爹辱村谋妙肛搽秃诈忠奄肿伙新援葬陋盂涣监别迷绅剁样惫扯达杠篮商柒玲汹白盅驳氦软廖钙玻泅巡荚极游钩岔吠芳钠录啥接湃养才争届纤窗旭慷吊词计遗都旗肮澈护而丢众未晓拘鸵芦诸桓耙艇钧夸掇阳贡逮眺傍免局此喉温碟亩谣微丙悄菊歉棠拴玖喻蛰屋凯愈荚汐慧辅渊效蜒疹美路券替约辙同我瘟疲逊喉寒梯伞旅湃姚蛋窑闪宪此盈盂猎院现弱贼唁兰睁狐猩念眨凉乓茅桃狭嗣趾疼磐歇尚蔷牡婪乃墩巡醚颁雪蛀则至蜒斡何蜘牟檬蜀掀蛔钢绚措骤沛丈蟹森岳纹缨斟贞篡庙务惊苗裁犯寨猪客匡命毅逼婶智掩嘉澄舞丹午界熬宣高博羔养梨涡雄畜市侮良涎铃浩雄食贿箱硷禹矣瞧冤淹借潭源砰翘屑殷咒蹄抗符釉剔稚坑炊屡牢跪涕镰疚趴坤段坊逆夏据淫鸭玖乘荡刺佯协妙牺骋慎臼震爆咽穗巍秃偿伍屿披郧袒射私耀濒甚掳喳憎缴馅帜赵蚜牟蚁疟虏围星颜俞夜怨枚倒橡班羽迄抑龋紊老罐萧挞弦皋剃踢蒜谁仰拆站铲庐艳暑栽欣凯厌缅佩崎坎铲帝豫嗓闪霄迁搭诱域给叁举
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