人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发

,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第1页,一、介绍,人绒毛膜促性腺激素(HCG)是孕卵着床后由人体滋养层细胞分泌一个糖蛋白激素，它是由和二聚体糖蛋白组成，亚基与垂体分泌FSH（卵泡刺激素）、LH（黄体生成素）和TSH（促甲状腺激素）等基础相同，而-HCG是HCG所特有，HCG含量改变已成为检测是否妊娠主要依据。,市面上销售HCG试纸被大家所熟悉，然而它只适合用于普通人群，本试纸灵敏度深入提升，也可适合用于不易检测人群。,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第2页,二、检测原理,以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜毛细血管作用，滴加在膜条一端液体慢慢向另一端渗移，经过抗原抗体结合，并利用金聚集展现红色，检测抗原，检测结果普通有阴性和阳性。,试纸条主体示意图,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第3页,试纸条阳性示意图,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第4页,试纸条阴性示意图,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第5页,三、试验方法与结果,金选择,金标抗体制备,试纸材料选择,试纸条膜抗体固定,试纸条组装,试纸条测试,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第6页,1.金选择,金在整个检测过程中起示踪作用，其质量好坏直接影响试纸检测结果。,制备金普通使用方法是用还原剂将氯金酸还原，制备金，其制备方法较多，本试验应用两种制备金方法：柠檬酸钠法（水相）和硼氢化钠法（有机相）。,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第7页,柠檬酸钠法,柠檬酸钠法制备,金在1-100纳米之间，能均一稳定分散在液体中，由一个基础金核和外面双离子层组成，分散溶液中H,+,组成金最外层离子层，在金核表面紧连是内层离子（AuCl,2-,），来维持金悬液状态。,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第8页,硼氢化钠法,以硼氢化钠做还原剂，甲苯做溶剂，经过还原氯金酸制备得到金纳米粒子。这时金颗粒表面由十二硫醇做配位保护，巯基配位结合在金颗粒表面，碳链留在外面，此时金纳米颗粒是疏水。,两亲聚合物是现有疏水基团又有亲水基团齿状聚合物，其经过疏水作用包裹在金纳米颗粒表面，从而使金纳米颗粒由有机相转移到水相。,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第9页,柠檬酸钠法制备金表征,水相金溶液晶莹透亮，无混浊，色泽鲜艳，呈酒红色，,没有漂浮物。水相金粒径18.16nm，水相金最大吸收峰在520nm时吸收值是0.41。,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第10页,硼氢化钠法制备金表征,上图金成黑紫色，不浑浊，没有悬浮物，粒径为20.5nm，最大吸收峰在517nm时吸收值是0.19。,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第11页,两种制金方法对比结果,上图蓝色线是水相金紫外可见分光光度检测结果，粉色线是有机相相金紫外可见分光光度检测结果。两种方法制备出来金颗粒粒径基础一致，两种方法最大不一样就是柠檬酸钠还原法制备金吸收值Abs在最高峰及最高峰之前一直偏大，这说明，柠檬酸钠还原法制备金浓度大，更适合本试验后面金标抗体制备。,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第12页,2.金标抗体制备,金标抗体即金和抗体大分子结合物，金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子正电荷基团借静电吸引而形成牢靠结合，不会影响蛋白质活性。左边最大吸收峰在277nm处，是没有结合抗体蛋白；右边最大吸收峰在527nm，比原来520nm大，说明金结合了抗体蛋白，体积变大。,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第13页,3.试纸材料选择,把羊抗鼠二抗固定到A，B，C三种不一样孔径硝酸纤维素膜试纸同一位置处，将其37干燥后，在硝酸纤维素膜试纸一端滴加金标抗体溶液，比较液体流速、是否会产生背景色，以及羊抗鼠二抗与金标抗体结合效果。,A,B,B,B,C,C,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第14页,4.膜抗体固定,膜选择固定：固定蛋白用硝酸纤维素膜，因为此膜和蛋白质有很强结协力；连接垫用玻璃纤维素膜，因为其有化学惰性，能够成为金标物暂时载体，有利于金标抗体释放。,抗体,羊抗鼠二抗,金标抗体,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第15页,5.试纸条组装,试纸条由底板、样品垫、连接垫、,NC,膜（检测线和质控线）和吸水纸组成。,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第16页,6.试纸条阳性、阴性结果测试,在试纸条一端分别滴加含有和不含人绒毛膜促性腺激素抗原溶液，待5min后样品渗移到试纸另一端，观察结果。,上图左侧是阴性结果图，右侧是阳性结果图，能够看出检测结果显著，而且两侧三条试纸检测结果一样，表达了本试纸重复性好，说明结果可靠，没有偶然性。,人绒毛膜促性腺激素侧向层析检测试纸的研发,第17页,