水产品兽药残留检测技术概述

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,廖 建 萌,水产品兽药残留检测技术, 13189480007,主要内容,兽药,残留概述,前处理技术,液质分析残留方法的建立步骤,方法验证,能力验证思路和经验,水产品,兽药,残留分析概述,兽药残留（animal drug residues）是指给动物使用药物后蓄积或贮存在细胞、组织或器官内的药物,原形、代谢产物和药物杂质,。,水产品,兽药,残留分析概述,农业部193号公告兽药禁用清单有21类，包括硝基呋喃类，孔雀石绿类，氯霉素类，汞制品类等，出口水产品重点监测的兽药还包扣磺胺类，喹诺酮类，大环内酯类，青霉素类，四环素类等。出口指定的兽药检测项目要求,不得检出,。,水产品,兽药,残留分析概述,兽药残留超标的主要原因,1、非法使用违禁药品,2、不遵守休药期，,中国兽药典,。,3、其他原因如饲料加工的交叉污染，动物个体代谢差异等。,水产品,兽药,残留分析概述,对兽药残留实施监控是一种复杂的系统工程，包括从药物研制、注册登记、生产、使用及食品和环境监测等诸多环节。,建立残留分析方法和制定最高残留限量、休药期是最基本的方面。,目前国内颁布的法定检测方法还缺乏系统性和完善性，其他危害性比较大，特别是出口欧盟产品必须要检测的品种如抗甲状腺制剂、类固醇类、硝基咪唑类药物、精神类药物、抗蠕虫药物、环境污染物等的检测方法尚在研究之中。,2002年农业部再次对已发布的兽药,最高残留限量标准,进行了修订并重新发布，此次共规定了134种兽药的动物性食品中兽药最高残留限量标准。,随着兽药科技的发展，新兽药品种还会不断出现，因此需要不断地制定和修订在水产品的兽药最高残留限量规定及相应的残留检测方法。,兽药残留检测概述,兽药残留检测涉及到稳定性试验方法，提取方法，净化方法，测定方法(分离方法检测方法)。,1.文献检索,文献检索仅能显示最适宜的分析方法可能是什么，提供样品处理，分离和检测方面粗略信息，进行方法的比较和借鉴，调整具体的实验条件，改进和建立符合要求的新方法。如针对新对象或采用新技术，可以从较早的化学合成文献得到待测物的物理性质或分离方面的原始资料，或从具有相近结构或官能团化合物的方法方法中获得某些信息和提示。,有现成标准方法的采用现成标准方法（验证）。,2.建立测定方法,建立测定方法和线性范围，为后续的各种工作提供分析手段，最后根据干扰和使用情况逐步确立测定条件和建立标准曲线。如兽残及代谢物属中等极性或较高极性化合物，不能直接进行GC分析，HPLC常用的检测器有紫外（UVD），荧光（FLD，共轭双烯）,电化学（EehlD）。MS为非常规检测器。,兽药残留检测概述,3.建立样品处理方法,提取，净化，衍生,4.标准曲线,LC-MS/MS要求设4个点，相关系数大于0.995，有外标（基质匹配法）和内标，标准加入法，基质匹配法。,5.稳定性试验,一般包括标准溶液（溶剂）和样品中贮存条件下的稳定性试验，如室温，冷冻，反复冷冻-解冻条件下的稳定性。,6.方法评价,准确度，精密度，灵敏度等。,兽药残留检测概述,样品处理方法涉及的因素很多，操作复杂，方法灵活，直接影响各项分析指标、成本和效率，一般占70%的分析工作量。,水产品兽药残留检测样品前处理技术,常用,的,的提,取,取溶,剂,剂有,乙,乙腈,，,，甲,醇,醇，,丙,丙酮,，,，这,些,些溶,剂,剂与,水,水，,稀,稀酸,，,，稀,碱,碱的,混,混合,溶,溶剂,如,如乙,腈,腈-,甲,甲醇,，,，氯,仿,仿-,甲,甲醇,，,，乙,腈,腈-,水,水，,或,或酸,化,化，,碱,碱化,等,等。,乙,乙酸,乙,乙酯,，,，氯,仿,仿，,二,二氯,甲,甲烷,，,，乙,醚,醚和,叔,叔丁,基,基甲,醚,醚。,叔,叔丁,基,基甲,醚,醚可,代,代替,卤,卤代,溶,溶剂,。,。,1、,提,提取,溶,溶剂,的,的选,择,择,水产,品,品兽,药,药残,留,留检,测,测样,品,品前,处,处理,技,技术,乙腈,，,，甲,醇,醇，,丙,丙酮,与,与样,品,品容,易,易结,合,合，,溶,溶剂,化,化作,用,用和,渗,渗透,能,能力,强,强，,粘,粘度,小,小，,提,提取,速,速度,快,快，,能,能使,结,结合,态,态的,药,药物,释,释放,，,，提,取,取的,同,同时,脱,脱蛋,白,白脱,脂,脂，PH,值,值可,调,调，,待,待测,物,物分,布,布均,匀,匀。,但,但提,取,取的,杂,杂质,较,较多,，,，进,一,一步,萃,萃取,乳,乳化,严,严重,，,，效,果,果相,似,似，,甲,甲醇,提,提取,液,液的,杂,杂质,最,最高,。,。“,万,万能,溶,溶剂,”,”DMSO沸,点,点高,极,极少,用,用。,在酯,溶,溶性,的,的残,留,留物,中,中，,采,采用,非,非水,溶,溶性,极,极性,溶,溶剂,，,，乙,酸,酸乙,酯,酯，,氯,氯仿,，,，二,氯,氯甲,烷,烷，,乙,乙醚,。,。,加无,水,水硫,酸,酸钠,，,，盐,析,析提,高,高回,收,收率,。,。干,样,样（,含,含水,小,小10%,）,）加,水,水增,强,强提,取,取。,1、,提,提取,溶,溶剂,的,的选,择,择,均浆,提,提取,法,法；震荡,法,法；索,氏,氏提,取,取法,（,（考,虑,虑热,稳,稳定,性,性，,适,适合,水,水分,少,少如,饲,饲料,样,样品,，,，水,产,产品,组,组织,要,要和,海,海砂,或,或无,水,水硫,酸,酸钠,一,一起,研,研磨,成,成干,粉,粉）,；,；超声,波,波提,取,取（SAE,，,，空,化,化作,用,用，,增,增加,溶,溶解,，,，时,间,间不,能,能长,，,，发,热,热）,；,；超,临,临界,流,流体,萃,萃取,（,（SFE,）,），,强,强化,溶,溶剂,萃,萃取,（,（ASE,）,）和,微,微波,辅,辅助,萃,萃取,（,（MAE,）,）,2、,提,提取,方,方法,水产,品,品兽,药,药残,留,留检,测,测样,品,品前,处,处理,技,技术,超临界,流,流体密,度,度与液,体,体相似,，,，但是,溶,溶质在,其,其中的,扩,扩散系,数,数比液,体,体中大,得,得多。,极性低,的,的碳氢,化,化合物,，,，醚，,酯,酯，环,氧,氧化合,物,物，可,以,以在低,压,压力下,提,提取（7-10MPa）进,行,行萃取,，,，羟基,，,，羧基,难,难萃取,，,，一个,羧,羧基和,两,两个羟,基,基的化,合,合物和,三,三个酚,羟,羟基的,苯,苯环衍,生,生物可,以,以被萃,取,取；40 MPa以,下,下，糖,和,和氨基,酸,酸都不,能,能被萃,取,取；分,级,级极性,差,差异和,挥,挥发性,差,差异。,2、提,取,取方法,水产品,兽,兽药残,留,留检测,样,样品前,处,处理技,术,术,超临界,流,流体萃,取,取仪,流,流体源,，,，加压,装,装置，,控,控温装,置,置，萃,取,取容器,，,，节流,装,装置，,收,收集装,置,置。CO,2,作为流,体,体操作,温,温度低,，,，利于,热,热不稳,定,定的化,合,合物，,组,组分中,不,不含氧,，,，防止,氧,氧化。,2、提,取,取方法,水产品,兽,兽药残,留,留检测,样,样品前,处,处理技,术,术,液-液,萃,萃取LLE,LLE,利,利用待,测,测组分,与,与样品,杂,杂质在,互,互不相,溶,溶的两,相,相中溶,解,解性差,异,异进行,净,净化。,设,设计的,基,基础为,：,：极性,组,组分与,非,非极性,组,组分；,极,极性物,质,质再分,成,成酸性,，,，中性,，,，碱性,物,物质。,正,正己烷,（,（石油,醚,醚）-,乙,乙腈；,正,正己烷-甲醇,；,；正己,烷,烷-丙,酮,酮；异,辛,辛烷-80%,丙,丙酮；,氯,氯仿-,水,水；乙,酸,酸乙酯-水。,影响因,素,素：溶,剂,剂，PH值（,磺,磺胺，,喹,喹诺酮,，,，苯并,米,米唑类,，,，苯乙,胺,胺类等,）,）,3、净,化,化方法,水产品,兽,兽药残,留,留检测,样,样品前,处,处理技,术,术,液-液,萃,萃取操,作,作方法,分液漏,斗,斗震荡,，,，漩涡,萃,萃取，,逆,逆流萃,取,取，特,殊,殊容器,萃,萃取。,从水相,中,中提取,药,药物时,溶,溶剂中,常,常带如,少,少量的,水,水分，,可,可干扰,固,固相萃,取,取，延,长,长浓缩,时,时间和,增,增加杂,质,质，加,无,无水硫,酸,酸钠脱,水,水。高,极,极性的,药,药物在,净,净化中,发,发生吸,附,附，硅,烷,烷化玻,璃,璃器皿,（,（1%,三,三甲基,氯,氯硅烷,的,的甲苯,溶,溶液淌,一,一次，100,下干,燥,燥30min,）,）；加,异,异丙醇,或,或二乙,胺,胺也能,降,降低吸,附,附。,3、净,化,化方法,水产品,兽,兽药残,留,留检测,样,样品前,处,处理技,术,术,固相萃,取,取（SPE）,采用固,相,相萃取,小,小柱作,为,为分离,媒,媒介，,小,小柱中,添,添加了,不,不同填,料,料的固,定,定相，,以,以键合,硅,硅胶为,基,基质的C18,、,、NH2、COOH,、,、PSA、SAX等,，,，是硅,胶,胶的表,面,面活性,大,大为降,低,低，最,大,大程度,的,的降低,了,了极性,化,化合物,的,的不可,吸,吸附和,拖,拖尾，,使,使样品,回,回收率,和,和重现,性,性得到,保,保障；,以,以高分,子,子聚合,物,物为基,质,质的如PEP,、,、HXN、PAX、PCX,等,等，具,有,有高纯,度,度、高,比,比表面,的,的特点,；,；以吸,附,附型填,料,料为固,定,定相的,如,如硅酸,镁,镁、氧,化,化铝等,，,，主要,通,通过表,面,面的极,性,性吸附,达,达到分,离,离的目,的,的。因,此,此，固相萃,取,取法适,用,用于各,种,种极性,的,的化合,物,物,3、净,化,化方法,水产品,兽,兽药残,留,留检测,样,样品前,处,处理技,术,术,固相萃,取,取（SPE）,3、净,化,化方法,水产品,兽,兽药残,留,留检测,样,样品前,处,处理技,术,术,固相萃,取,取（SPE）,操,操作步,骤,骤：活,化,化，上,样,样，洗,涤,涤，洗,脱,脱。,其他方,法,法,固相微,萃,萃取：,固,固液吸,附,附平衡,制备色,谱,谱法：,制,制备HPLC,分,分析激,素,素残留,凝胶渗,透,透色谱,法,法：分,子,子筛作,用,用,膜分离,技,技术：,硝,硝酸纤,维,维，醋,酸,酸纤维,等,等半透,膜,膜,基质固,相,相分散,技,技术：,样,样品和,填,填料的,比,比例是1：4,免疫亲,和,和色谱,：,：连接,有,有抗体,的,的惰性,基,基质做,固,固定相,，,，选择,性,性吸附,。,。,分子印,迹,迹技术,：,：印迹,聚,聚合物,，,，塑料,抗,抗体,3、净,化,化方法,水产品,兽,兽药残,留,留检测,样,样品前,处,处理技,术,术,旋转蒸,发,发：溶剂可,回,回收,气流吹,蒸,蒸：少量溶,剂,剂,K-D,浓,浓缩器,：,：浓缩,，,，回流,，,，洗涤,，,，定容,真空离,心,心：热,敏,敏性组,分,分，粘,稠,稠液体,再溶解,使,使用流,动,动相的,初,初始比,例,例作溶,剂,剂,4、,浓缩富,集,集及再,溶,溶解,水产品,兽,兽药残,留,留检测,样,样品前,处,处理技,术,术,步骤,1.确,立,立质谱,条,条件,2.建,立,立LC,方,方法,3.内,标,标选择,4.前,处,处理方,法,法选择,建立液,相,相色谱,串,串联质,谱,谱定量,分,分析方,法,法,文献检,索,索：了,解,解化合,物,物的性,质,质包括,化,化合物,的,的结构,、,、化合,物,物的极,性,性及化,合,合物的pKa,值,值。首,先,先了解,化,化合物,的,的结构,，,，可大,概,概的推,断,断其碎,片,片离子,的,的断裂,方,方式，选择较,为,为稳定,的,的碎片,离,离子作,为,为定量,的,的子离,子,子，也可以,根,根据经,验,验判断,选,选用哪,种,种离子,源,源更为,合,合适；