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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,免疫学研究中,生物医学研究中心,张,述,Email:,常用的小鼠模型,免疫学研究中 生物医学研究中心 张 述 Email:s,C57BL/6,简要描述：最常见的实验小鼠，经常简称为,B6 C57,或者小鼠。,性状描述：毛色为黑色，常作为“标准”的近交系。,常见用途：,用于多种免疫学、遗传学研究，包括移植、感染等动物,模型。,常作为背景小鼠，对其进行基因敲除、转基因等遗传修,饰,从而提供标准的遗传背景。,BALB/C,简要描述：是实验室常见的免疫功能不太完善的小鼠。,性状描述：毛色为白色，对致癌因子敏感，卵巢、肾上腺和肺部肿瘤、,白血病发生率较高。,常见用途：,用于生产单克隆抗体的杂交瘤的制备。,免疫学研究，如移植的供受鼠等。,BM12,简要描述：是,C57BL/6,近交系小鼠自发形成的一个近交系小鼠，在,MHCII,类分子中有,3,个氨基酸的突变。,性状描述：与,C57BL/6,基本相同，对,EAE,等自身免疫性疾病具有抗性。,常见用途：用于慢性排斥反应研究的供鼠。,免疫学研究中常用的小鼠品系,C57BL/6 简要描述：最常见的实验小鼠，经常简称为B6,常见的小鼠品系,ALR,：,与,NOD,小鼠具有共同祖先的小鼠，白色，两者有,70%,的基因组完全,相同，但,MHC,不相同。对,I,型糖尿病具有很强的诱导耐受。常用于,NOD,的对照小鼠。,杂交鼠：,由两个近交系杂交获得后代，性状不稳定。小鼠遗传操作,未进行彻底的小鼠。,NOD,：,简要描述：非肥胖型糖尿病,(NOD),小鼠，最常见的实验小鼠，公认的自,身免疫性糖尿病（,I,型糖尿病）。,性状描述：白色，从第,9,周开始，即会有胰腺炎症状，之后雌鼠会有较,高的概率得,I,型糖尿病。,常见用途：,I,型糖尿病遗传、发病机制研究。,其它相关的自身免疫性疾病研究，如干燥综合症等。,常见的小鼠品系 ALR：与NOD小鼠具有共同祖先的小鼠，白,1,、器官移植模型,2,、自身免疫性疾病模型,3,、超敏反应模型,4,、肿瘤模型,免疫研究常见的小鼠动物模型,1、器官移植模型 2、自身免疫性疾病模型 3、超敏反应模型,1.,肾移植模型,2.,异位心脏移植模型,3.,小肠移植模型,4.,骨髓移植模型,5.,肝移植模型,6.,皮肤移植模型,7.,胰腺（胰岛）移植模型,8.,慢性排斥（,BM12,）,器官移植模型,1.肾移植模型 2.异位心脏移植模型 3.小肠移植模型 4.,1,、自发型,I,型糖尿病动物模型,NOD,小鼠,2,、诱导型,I,型糖尿病动物模型：,药物（,STZ,、,Alloxan,、环磷酰胺等）诱导破坏小鼠胰岛,3,、自发型系统性红斑狼疮小鼠,BXSB,4,、诱导型系统性红斑狼疮小鼠,慢性移植物抗宿主,自身免疫性疾病模型,1、自发型I型糖尿病动物模型 NOD小鼠 2、,5,、自发型类风湿性关节炎,SKG,小鼠,6,、诱导型类风湿性关节炎,型胶原诱导关节炎大鼠模型，佐剂性关节炎,(adjuvant arthritis,，,AA),模型，其它诱导模型,7,、诱导小鼠,EAE,；模拟人多发性硬化症,/,急性播散性脑脊髓炎。,髓鞘少突胶质细胞糖蛋白,35-55,（,MOG35-55,）多肽免疫；髓鞘碱,性蛋白（,MBP,）免疫疫；髓鞘蛋白脂质蛋白,(PLP),免疫；脊髓组,织匀浆免疫等,自身免疫性疾病模型,5、自发型类风湿性关节炎 SKG 小鼠 6、诱,超敏反应模型,气道高敏感反应模型：,腹腔注射卵清白蛋白致敏，然后通过雾化吸入,造模。,皮肤过敏反应模型：,过继输入抗二硝基苯酚（,DNP,）的,IgG E,单克隆抗,体，使小鼠被动致敏，然后以二硝基氟代苯（,DNFB,）刺激产生过,敏反应。,超敏反应模型 气道高敏感反应模型：腹腔注射卵清白蛋白致敏，然,肿瘤模型,移植瘤实验：,将人移植入,BalB/C,、祼鼠、,C57BL/6,、,Rag1,等小鼠体内。,诱导癌,/,肿瘤模型：,使用二乙基亚硝胺,(diethy lnitrosam ine,DEN),等诱,癌剂灌胃及自由饮水，长期诱导可产生肝癌模型。,肿瘤模型 移植瘤实验：将人移植入BalB/C、祼鼠、C57B,1,、基因敲除小鼠,2,、基因敲入小鼠,3,、基因捕获小鼠,4,、转基因小鼠,5,、条件性基因表达小鼠,6,、条件性基因敲除小鼠,基因修饰小鼠,1、基因敲除小鼠 2、基因敲入小鼠 3、基因捕获小鼠 4、转,载体构建基本知识,二、,pIRES2-EGFP-rtTA,Advanced,构建,使用引物将,rtTA Advanced CDS,区克隆出来，然后以,Xho,I/,Bgl,II,双酶切，将其克隆入,pIRES2-EGFP,载体的,Xho,I/,Bam,HI,位点中。,引物序列为：,rtTA_,Xho,I_F:,ATCG,CTCGA,G,CCGCCACC,ATGTCTAGACTGGACAAGAGCAAA,rtTA_,Bgl,II_R:ATCG,AGATCT,TACTTAGTTACCCGGGGAGCATGTCA,载体构建基本知识 二、pIRES2-EGFP-rtTA Ad,基因表达基本知识,DNA,一级结构上调控基因表达的元件,（基因表达盒结构）,promoter,5,-UTR,promoter,enhancer,UTR,exon,Poly A signaling,enhancer,3,-UTR,Chromosome,sequence,基因表达基本知识 DNA一级结构上调控基因表达的元件（基因表,基因敲除小鼠,基因敲除小鼠,基因修饰,ES,细胞的获得及囊胚注射,基因敲除小鼠,基因修饰ES细胞的获得及囊胚注射 基因敲除小鼠,2,、基因敲除纯合小鼠的获得,2、基因敲除纯合小鼠的获得,基因敲入小鼠,Neo,r,w.t,allele,flox,allele 1,I,II,I,II,w.t,.,sequence,Vector sequence,loxP site,FRT site,Typing primer,Typing primer,exon,基因敲入小鼠 Neo r w.t allele flox,基因捕获小鼠,效果类似于基因敲除,基因捕获小鼠 效果类似于基因敲除,MBD2,基因敲除小鼠,b,-,g,eo,w.t.allele,1,2,w.t,.,sequence,Vector sequence,mutant allele,Typing primer,Typing primer,exon,1,3,b,-,g,eo,3,Sequence not indicated,targeting vector,A,MBD2基因敲除小鼠 b-geo w.t.al,转基因小鼠,靶标基因表,达盒,DNA,转基因小鼠 靶标基因表达盒DNA,条件性基因表达小鼠,P,CAG,loxP,CAT,loxP,HGH,PA,pBR322,ori,Amp,Pac,I,pCAG-CAT-X,7100bp,MBD2 cDNA,在,MBD2 CDS,两端,PCR,加入,Pac,I,酶切位点,Pac,I,Pac,I,Pac,I,酶切，,T4,连接酶连接,P,CAG,CAT,MBD2,loxP,loxP,Pac,I,Pac,I,A,B,C,P,CAG,MBD2,loxP,Pac,I,Pac,I,D,E,loxP,C,A,T,+,Cre,介导重组,Cre-loxP,系统,条件性基因表达小鼠 PCAG loxP CAT loxP H,Tet-on,表达系统,Tet-on表达系统,条件性基因敲除小鼠,Cre-loxP,及,FLP-FRT,技术,Cre,、,FLP,是重组酶，,loxP,、,FRT,是重组位点,条件性基因敲除小鼠 Cre-loxP及FLP-FRT技术 C,图,1:,诱导型平滑肌特异性敲除,Dicer1,基因的小鼠基因型。,1A,：,Dicer1,的蛋白质结,构,主要包含,4,个结构域，任一个结构域的缺失均能导致,microRNA,不能成熟；,1B,：,两侧包含,loxP,位点的,Dicer,基因结构图，两个同向,loxP,位于,Dicer,基因,22,号外显子的,两侧，该外显子对应于前一个,RNAIII,结构域。在,Cre,重组酶的作用，可引起该外,显子的敲除。,1C,：他莫昔芬,(tamoxifen),诱导的平滑肌特异性,Cre,转基因小鼠表达盒。,该表达盒包含平滑肌特异性,SM22,启动子，,tamoxifen,诱导表达的,Cre,重组酶基因及,SV40,的,polyA,信号序列。,图1:诱导型平滑肌特异性敲除Dicer1基因的小鼠基因型。,Neo,r,w.t,allele,flox,allele 1,I,II,w.t.sequence,Vector sequence,loxP,site,FRT site,flox,allele 2,flox,allele 3,Cross with FLP mice,Cross with Cre,mice,Typing primer,Typing primer,exon,I,I,I,II,II,HPSE2-loxP,小鼠,Neo rw.tallelefloxallele 1IIIw,
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