大肠菌群计数

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2022/1/10,#,大肠菌群计数,大肠菌群计数,第1页,大肠菌群计数,卫生学概念，包含埃希氏菌属，克雷伯氏菌属、肠杆菌属和柠檬酸杆菌属等细菌,检验比较简单，所以被广泛用做水源卫生指标和食品加工卫生情况通用指标,大肠菌群,定义：,一群在,36,条件下培养,2448,小时能发酵乳糖、产酸产气需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。,大肠菌群计数,第2页,第一法,MPN,法,第二法 平板计数法,第三法,Petrifilm,测试片法,大肠菌群计数,大肠菌群计数,第3页,大肠菌群计数：,第一法,与原,4789.3,不一样,l,操作步骤不一样,原方法,初发酵,EMB,分离培,染色，复发酵,报 告,现方法,LST,初发酵,BGLB,验证,报 告,EMB,分离培养,大肠菌群计数,第4页,大肠菌群计数：,第一法,与原,4789.3,不一样,l,初发酵培养基不一样,原方法：,乳糖胆盐肉汤,现方法：,月桂基硫酸盐胰蛋白胨（,LST,）肉汤,LST,肉汤 是国际上通用培养基。与乳糖胆盐肉汤作用和意义相同，但含有更多优越性，,LST,中选择性抑菌剂是月桂基硫酸盐，相对于胆盐稳定性更加好些。还有就是,LST,更轻易观察。,大肠菌群计数,第5页,大肠菌群计数：,第一法,大肠菌群计数,第6页,大肠菌群计数：,第一法,大肠菌群计数,第7页,大肠菌群计数：,第一法,与原,4789.3,不一样,l,结果汇报单位不一样,原方法：,MPN/100g(mL),现方法：,MPN/g(mL),大肠菌群计数,第8页,大肠菌群计数：,第一法,与原,4789.3,不一样,l,给出,MPN,表不一样,l,标准名称不一样,大肠菌群计数,第9页,大肠菌群计数：,第一法,大肠菌群计数,第10页,大肠菌群计数：,第一法,6,操作步骤,6.1,样品稀释,6.1.1,固体和半固体食品：以无菌操作取,25g,）,样品,放入装有,225,mL,生理盐水无菌均质杯内,于,8000 r/min,均质,1min,2min,制成,1:10,样品匀液，或放入,225 mL,生理盐水无菌均质袋中，用均质器拍打,1min,2min,，,制成,1:10,样品匀液。,6.1.2,液体食品：以无菌吸管吸收样品,25mL,放入装有,225mL,生理盐水无菌玻璃瓶,(,瓶内预置适当数量玻璃珠,),中,以,30cm,幅度、于,7s,内振摇,25,次,(,或以机械振荡器振摇,),制成,1:10,样品匀液。,6.1.3,样品匀液,pH,值应在,6.5,7.5,之间，必要时分别用,1 mol/L NaOH,或,1 mol/L HCl,给予调整。,大肠菌群计数,第11页,大肠菌群计数：,第一法,6,操作步骤,6.1,样品稀释,6.1.4,用,1mL,无菌吸管或移液器吸收,1:10,样品匀液,1mL,，沿管壁缓缓注入装有,9mL,生理盐水无菌试管中（注意吸管尖端不要触及液面），振摇试管或换用,1,支,1mL,无菌吸管重复吹打,3,5,次，或采取振荡器使其混合均匀，制成,1:100,样品匀液。,6.1.5,依据对样品污染情况预计,按上述操作，依次制成系列十倍系列样品匀液。每递增稀释,1,次，换用,1,支,1mL,无菌吸管。从制备样品匀液至样品接种完成,全过程不得超出,15min,。,大肠菌群计数,第12页,大肠菌群计数,第13页,大肠菌群计数：,第一法,6,操作步骤,6.2,初发酵试验,对每个样品，选择适宜三个连续稀释度样品匀液，液体样品能够包含未经稀释原液，每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（,LST,）肉汤，每管接种,1mL,（如接种量需要超出,1mL,，则用双料,LST,肉汤）。,361,培养,24h2h,，检验倒管内是否有气泡产生或轻摇试管时是否有密集连续细小气泡从管底逸出，如未产气则继续培养至,48h2h,。统计在,24h,和,48h,内产气,LST,肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。,大肠菌群计数,第14页,用直径为,3mm,接种环从全部,48h2h,内发酵产气,LST,肉汤管中分别取培养物,1,环，移种于煌绿乳糖胆盐,(BGLB),肉汤管中，置,361,温箱内，培养,48h2h,，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。,大肠菌群计数：,第一法,6,操作步骤,6.3,复发酵试验,大肠菌群计数,第15页,大肠菌群计数：,第一法,大肠菌群计数,第16页,大肠菌群计数：,第一法,大肠菌群计数,第17页,依据大肠菌群阳性管数,查,MPN,检索表，汇报每,g(mL),样品中大肠菌群,MPN,值。,经过和标准起草人沟通，此方法标准单位能够乘以,100,，最终报出,MPN/100g(100mL),。,大肠菌群计数：,第一法,6,操作步骤,6.4,结果汇报,大肠菌群计数,第18页,1g(mL),检样中最大可能数,（,MPN,）,表,-,420,1100,3,3,3,94,8.7,27,2,1,2,4,100,180,1100,2,3,3,42,4.5,20,1,1,2,2,000,90,460,1,3,3,42,3.7,15,0,1,2,1,000,42,240,0,3,3,42,4.5,20,2,0,2,1,000,90,290,3,2,3,42,3.6,14,1,0,2,430,40,210,2,2,3,38,1.4,9.2,0,0,2,420,37,150,1,2,3,42,4.5,16,0,3,1,420,18,93,0,2,3,42,4.5,15,1,2,1,420,40,160,3,1,3,42,3.6,11,0,2,1,420,37,120,2,1,3,38,3.6,11,1,1,1,200,17,75,1,1,3,20,1.3,7.4,0,1,1,180,9,43,0,1,3,38,3.6,11,2,0,1,180,17,64,2,0,3,18,1.3,7.2,1,0,1,110,8.7,38,1,0,3,18,0.17,3.6,0,0,1,94,4.6,23,0,0,3,38,3.6,9.4,0,3,0,94,8.7,36,1,3,2,18,1.2,6.2,0,2,0,94,8.7,29,0,3,2,18,1.2,6.1,1,1,0,94,8.7,35,2,2,2,11,0.15,3.0,0,1,0,94,8.7,28,1,2,2,9.6,0.15,3.0,1,0,0,42,4.5,21,0,2,2,9.5,-,3.0,0,0,0,高,低,0.001,0.01,0.10,高,低,0.001,0.01,0.10,95%,置信区间,MPN,阳性管数,95%,置信区间,MPN,阳性管数,大肠菌群计数,第19页,大肠菌群计数,第20页,现国家标准,MPN,表与原国家标准,MPN,表不一样点：,1,，现表里数字是有小数点，而原标准对小数点进行了四舍五入处理。,2,，现标准,MPN,表比原标准,MPN,表要简化一些。原标准,MPN,表有,64,个组合，而现标准,MPN,表只有,40,个组合。,3,，汇报单位不一样。现汇报单位为,MPN/g(mL),，而原汇报单位是,MPN/100g(100mL),。,大肠菌群计数,第21页,第二法 平板计数法,平板计数法以经最终证实为大肠菌群阳性试管百分比乘以计数平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每,g(mL),样品中大肠菌群数。但因为对应产品标准单位现仍以,MPN/100g(100mL),单位报出结果，故此方法还不含有实际应用价值。,第三法,Petrifilm,测试片法,Petrifilm,测试片法按照稀释度检出方法，最低检出结果只能报出,1000 MPN/100g(100mL),故此方法还不含有实际应用价值。,大肠菌群计数,第22页,