培养标本处理课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,培养前标本处理篇,标本采集处理,血液培养相关问题,脑脊液相关问题,粪便相关问题,生殖道标本相关问题,脓,吸出液及组织标本相关问题,痰标本相关问题,咽标本相关问题,真菌培养相关问题,尿标本相关问题,血培养,主要病原菌：沙门菌、布氏杆菌、其他革兰阴性杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌,以下菌应视为非病原菌(除非1次血培养别离出)：芽孢杆菌属、凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、棒状革兰阳性杆菌,从两个独立的皮肤位点采血，每瓶采集,10ml,#1,35,C,空气中孵育,5,天,每天检查浊度并翻转培养瓶,#2,#3,18,小时后传进行次代培养,当培养瓶显示细菌生长时进行革兰染色和传代培养,革兰阳性球菌接种血平皿奥普托欣试验,革兰阴性杆菌接种血平皿和麦康凯平皿,革兰阴性双球菌或球杆菌接种巧克力平皿和血平皿,CO2,中孵育,72h,#5,#4,将重要的革兰染色结果尽快通知临床医生,对重要病原菌,进行鉴定,和药敏试验,#6,例如：肺炎克雷伯菌,例如：肺炎链球菌,Ellen Jo Baron 2007;Use with proper attribution,血培养是诊断败血症最有价值的手段,败血症是一个非常严重的问题.,血液中的微生物在3分钟内到达每个器官.,在死于败血症的患者中,尽管采用抗生素给与适宜的治疗，1/4的人死亡时，血中循环的微生物为10/cc或更少,Septicemia,微生物或其产物在血液中引起疾病,循环的,CFU/ml vs.,病原体,成人,(12,岁,):,1 CFU/ml,金黄色葡萄球菌,27%,铜绿假单胞菌,55%,大肠埃希菌,62%,其他菌种,40%,From Mayo Clinic,Boston City Hosp.,National Childrens Hosp.,Univ.of Washington,Seattle.,循环的,CFU/ml vs.,病原体,儿童,:,5 CFU/ml,任何病原体,19%,10 CFU/ml,任何病原体,27%,新生儿,:,4 CFU/ml,大肠埃希菌,26%,From Mayo Clinic,Boston City Hosp.,National Childrens Hosp.,Univ.of Washington,Seattle,York Hosp.,York,PA.,1 CFU/ml,任何病原体,42%,用于培养的血液体积,体重,磅 千克,体积,(ml)/,穿刺,总量,/,2,次穿刺,1%,全血体积,%,总血液体积,19,90,42,20,40,40 ml,1-2%,体积,%,阳性血培养结果,vs.,采集的套数,%,99%,89%,80%,真阳性,20 ml/,套,Mayo Clinic Study,立即获得足够血液并且开始抗生素治疗,从不同部位获得,2-3,套血培养,(40-60ml,血液,),最好在,5,分钟内采集,#1,#2,采集血培养时间的重要性,9%+,14%+,9%+,11%+,发热顶峰前12-2.5小时,发热顶峰前小时,发热顶峰期间,发热顶峰后1-12小时,166,病人,105,病人,199,病人,258,病人,Thomson et al.1991.ASCP.Mayo Clinic Study,要学会导管相关感染的诊断,关键点,:,患者必须有菌血症,检测导管相关感染,移走导管,Maki Roll(半定量),超声波降解和稀释(定量),通过管腔抽吸(定量),保存导管,管腔刷,定量培养(CVC&外周血),到达阳性的时间(CVC&外周血),两个血培养瓶必须同一时间抽取,CVC,阳性报警时间,(TTP),比外周血快,2,小时,短期插管,81%,敏感性,&92%,特异性,长期插管,93%,敏感性,&75%,特异性,不需要拔掉导管,-,阳性报警时间,Raad,I.et al.2004.Ann.Int.Med.140:18.,6138,份即时血培养,;191,份两个血培养瓶中鉴定的细菌相同,(25,份不同,).,108(1.8%),有导管相关性感染,;9.8%,仅仅只有,CVC,培养阳性,.,Maki,滚动法,导管尖阳性培养结果,导管血在外周血阳性之前,2,小时,内,阳性,报告,:CVC,不可能是菌血症的来源,2,.,导管血在外周血阳性,2,小时之,前,阳性,报告,:CVC,可能是菌血症的来源,3.,只有其中一瓶报警阳性,(,如果所有瓶子中的血量足够,),报告,:,可能污染,;,患者无菌血症,根据阳性报警时间判读,污染细菌,血培养污染定义为在几次血培养中单个血培养以下细菌阳性:,凝固酶阴性葡萄球菌,棒状杆菌,微球菌,丙酸杆菌,芽孢杆菌,血培养污染,vs.,皮肤消毒,%,污染,Studies from Baylor,Nashville,&France,败血症 vs.“污染的 血培养,%,阳性,Mayo Clinic Study,心内膜炎,菌血症,皮肤定植细菌,#,血培养套数,脑脊液CSF)培养,主要病原菌：B群溶血链球菌新生儿，流感嗜血杆菌2月-2岁儿童，肺炎链球菌，脑膜炎奈瑟氏菌,最少1ml，最正确5ml,医生通过无菌皮肤穿刺采集脑脊液腰椎穿刺于无菌管中。第二管和第三管用于微生物学检测。,#1,1500g离心15分钟可能的话,#2,#3,用吸管吸去,上清，留下,1cc,的脑脊液沉淀,X,注意：不要倾倒,#4,滴一滴沉淀,于巧克力平皿和,血平皿,上下吸取,10,次以上,混匀沉淀,#5,CO,2,中孵育,72,小时,#6,将一大滴沉淀,滴在玻片上。,不要涂开。,自然枯燥并进行革兰染色。,如见到大量多形核白细胞那么,强烈支持感染,#7,Ellen Jo Baron 2007;Use with proper attribution,脑脊液CSF)培养,主要病原菌：B群溶血链球菌新生儿，流感嗜血杆菌2月-2岁儿童，肺炎链球菌，脑膜炎奈瑟氏菌,最少1ml，最正确5ml,医生通过无菌皮肤穿刺采集脑脊液腰椎穿刺于无菌管中。第二管和第三管用于微生物学检测。,#1,1500g离心15分钟可能的话,#2,#3,用吸管吸去,上清，留下,1cc,的脑脊液沉淀,X,注意：不要倾倒,#4,滴一滴沉淀,于巧克力平皿和,血平皿,上下吸取,10,次以上,混匀沉淀,#5,CO,2,中孵育,72,小时,#6,将一大滴沉淀,滴在玻片上。,不要涂开。,自然枯燥并进行革兰染色。,如见到大量多形核白细胞那么,强烈支持感染,#7,Ellen Jo Baron 2007;Use with proper attribution,#1,#2,接种血平皿，麦康凯平皿，Hektoen或DCA，假设疑心弧菌那么还接种TCBS平皿。37 C 空气孵育48h,#3,粪便标本采集后,30,分钟内进行接种或置于,cary-blair,运输培养基中,#4,粪便培养,重要的病原菌：沙门菌、志贺菌、弯曲杆菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、产毒性大肠杆菌&难辨梭菌在常规的实验室可能检测不出,选择血性或脓性的局部进行接种,血平皿上氧化酶阳性的革兰阴性杆菌需进一步鉴定,将菌落接种,TCBS,或含,0-6,盐浓度的肉汤中。,麦康凯、,HEK,或,DCA,平皿上不利用乳糖的革兰阴性杆菌需进一步鉴定。,氧化酶阳性、湿润的米色菌落,革兰染色显示弯曲或螺旋形的杆菌,弯曲杆菌属,Campy,琼脂,#6,Ellen Jo Baron 2007;Use with proper attribution,#5,将菌落接种至,Campy,琼脂或使用滤纸法。微需氧环境下,37-42 C,孵育,72 h,CO,2,孵育,72h,TM,培养基上寻找淋球菌，血平皿上寻找酵母菌,#2,血平皿,&Thayer-Martin,平皿,#1,#1,接种,Thayer-Martin,培养基,&,革兰染色,将拭子在玻片上滚动制成一个细胞厚度的涂片；寻找“线索细胞,C.,怀孕,35-37,周的孕妇阴道或肛拭子,营养肉汤中,孵育过夜,血平皿上次代培养检测,B,群链球菌,#1,#2,CO,2,中孵育,48,小时,D.,女性的阴道拭子,#1,血平皿上寻找酵母菌，,T-M,培养基上寻找淋球菌,革兰染色辅助诊断细菌性阴道病,#1,#2,30 min,内将拭子置于,0.5ml,生理盐水中检测滴虫,T-M,培养基上的淋球菌,血平皿上的酵母菌,A.,女性的子宫颈或肛拭子,B.,男性的尿道拭子,非病原菌,金黄色葡萄球菌,任何革兰阴性杆菌，,包括大肠杆菌和变形杆菌,B,群,溶血链球菌（,GBS),，,仅为孕妇报告,生殖道标本培养,主要病原菌：淋病奈瑟菌，滴虫，酵母菌,&,女性的细菌性阴道病综合征，孕妇携带的,B,群,溶血链球菌,Ellen Jo Baron 2007;Use with proper attribution,阴道感染的病因学,From a major U.S.Ob/Gyn department.,衣原体,混合性传播疾病,念珠菌,女性百分比,细菌性阴道炎,正常,女性生殖道感染的病症和致病菌,子宫颈炎,阴道炎,其他,细菌性阴道炎,念珠菌,阴道毛滴虫,衣原体,淋病奈瑟菌,支原体,/,脲原体,损伤,:,单纯疱疹,人乳头瘤病毒,梅毒螺旋体,触染性软疣,痰标本,主要病原菌：肺炎链球菌，克雷伯菌属，流感嗜血杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌。,非病原菌：酵母菌，草绿色链球菌，凝固酶阴性葡萄球菌,病人需用水清洁口腔，,深咳肺部痰，,不要唾液,#1,进行革兰染色以评价标本是否适于接种。,向临床医生尽快报告重要的革兰染色结果,#2,#3,好：很少扁平,上皮细胞,奥普托欣纸片,CO,2,中孵育,48,小时,#4,接种巧克力平皿，血平皿和麦康凯平皿,#5,拒绝：大量,扁平,上皮细胞,肺炎克雷伯菌,对重要病原菌进行,鉴定,&,药敏试验,金黄色葡萄球菌,肺炎链球菌,胆汁溶菌,Ellen Jo Baron 2007;Use with proper attribution,奥普托欣,流感嗜血杆菌,有意义的细菌浓度值CFU/ml,标本,有意义的浓度,CFU/ml,自然咳痰,10,7,诱导痰,不确定,气管内吸取物,10,6,支气管肺泡灌洗液,10,4,保护性毛刷,10,3,支气管灌洗液,不做培养,气管内吸取物,加等量的,N-,乙酰,-L-,半胱氨酸或溶痰剂,漩涡震荡,30s,加,0.01ml,标本至,1.0ml,的,TSB,每个平板涂,0.01ml,血平皿,巧克力平皿,麦康凯平皿,1,：,100,稀释,1,：,2,稀释,生长出,50,个菌落,支气管肺泡灌洗液,将所有标本装入,50ml,离心管内,离心,20min,，混匀,10ml,沉淀液，,漩涡震荡,30s,每个平板涂,0.01ml,血平皿,巧克力平皿,麦康凯平皿,Use pipette.,用吸管吸取0.1ml至1mlTSB,1：10稀释,生长出,10,个菌落,制作涂片细胞离心),保护性毛刷,将毛刷置于,1ml,稀释液中,震荡,30s,每个平板涂,0.01ml,血平皿,巧克力平皿,麦康凯平皿,生长出,10,个菌落,Use PRAS if anaerobic,假设疑心厌氧菌那么使用PRAS,制作涂片细胞离心),脓，吸取物或组织标本,主要病原菌：金黄色葡萄球菌，化脓链球菌，其他,溶血链球菌，铜绿假单胞菌，其他革兰阴性杆菌。,非病原菌：凝固酶阴性葡萄球菌，少量的棒状革兰阳性杆菌,用酒精消毒伤口,周围皮肤,最好的标本是吸取物和组织,最差的标本是拭子,#1,接种血平皿和麦康凯平皿,如果是吸取物或组织，进行革兰染色，将重要结果通知临床医生,#2,#3,铜绿假单,胞菌,中孵育,48,小时,#4,对,1,或,2,种,重要病原菌进行鉴定,&,药,敏试验,金黄色葡萄球菌为主,溶血链球菌,肺炎克,雷伯菌,混合的,2,种肠道革兰阴性,杆菌：,2,种均报告；,当检出3种或更多病原菌时，报告“混合菌丛并描述性列出假单胞菌，金葡菌，