资源描述
单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,专题5DNA和蛋白质技术,专题5DNA和蛋白质技术,1,考点一DNA的粗提取与鉴定,1.基本原理,提取原理,DNA在NaCl溶液中的溶解度随浓度的变化而改变，DNA在,0.14molL,的NaCl溶液中溶解度最低。,提纯原理,（,对酶、高温和洗涤剂的耐受性及在酒精中的溶解度不同）,考点一DNA的粗提取与鉴定1.基本原理,2,酶的专一性蛋白酶水解蛋白质而对会对DNA不产生影响。（加柔嫩粉）,蛋白质、DNA热稳定性不同。温度值为6080，因为该温度值蛋白质,变性,沉淀，而DNA不会变性。,洗涤剂瓦解,细胞膜,，对DNA没有影响。,（3）,DNA鉴定原理,在,沸水浴,条件下，,DNA遇二苯胺呈现,蓝色,酶的专一性蛋白酶水解蛋白质而对会对DNA不产生影响。,3,(,1)材料的选取：选用DNA含量相对,的生物组织，如非哺乳动物的红细胞（鸡血）、菜花、洋葱等。,（2）材料处理：鸡血（吸水胀破法），植物细胞（洗涤剂和食盐。食盐的作用是溶解DNA，洗涤剂的作用的溶解细胞膜）,提取血细胞核物质(蒸馏水涨破)溶解(2 mol/L的NaCl溶液)过滤(除杂质)析出(滴蒸馏水，降NaCl溶液浓度至0.14 mol/L)过滤再溶解(2 mol/L的NaCl溶液)过滤进一步提纯(体积分数为95%的冷却酒精)鉴定。,提纯环节中还可加入肉嫩粉（木瓜蛋白酶），将滤液放在6075的恒温水浴箱中保温1015分钟能去除滤液中的杂质,(1)材料的选取：选用DNA含量相对 的生,4,要点,1、三次过滤,过滤,目的,第一次,过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液,获得含,核物质,的滤液,第二次,过滤溶解有DNA的2mol/L NaCl溶液,获得含,DNA,的滤液,第三次,过滤含黏稠物的0.14mol/L NaCl溶液,获得纱布上的粘稠物，其化学本质是,DNA,要点1、三次过滤过滤目的第一次过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液,5,2、两次沉淀析出,依据的原理,第一次,DNA在氯化钠的物质的量浓度为,0.14mol/L,时溶解度最低,第二次,DNA在,冷却的95%的酒精,中能沉淀析出,2、两次沉淀析出依据的原理第一次DNA在氯化钠的物质的量浓度,6,3、两次加蒸馏水,加蒸馏水的目的,第一次,使血细胞破裂,第二次,降低NaCl浓度使DNA析出,3、两次加蒸馏水加蒸馏水的目的第一次使血细胞破裂第二次降低N,7,4.关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是,A充分溶解DNA的盐溶液是0.14mol/L的NaCl溶液,B实验中提取较纯净的DNA利用了DNA不溶于酒精的特点,C对最后提取出DNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热,D实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同,B,4.关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是B,8,6.,下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是,A洗涤剂能瓦解细胞膜，同时也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度,B在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中，需要控制的变量是洗涤剂和植物细胞,C常温下，DNA遇二苯胺被染成蓝色,D将滤液放在6075的恒温水浴箱中保温1015分钟能去除滤液中的杂质，其原理是利用了DNA和蛋白质对高温耐受性的不同,D,6.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是D,9,7.,下列有关“DNA粗提取与鉴定”实验原理的叙述正确的是（）,ADNA在NaCl溶液中的溶解度，随NaCl溶液浓度的降低而减小,B利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNA,CDNA是大分子有机物，不溶于水而溶于所有有机溶剂,D在沸水中，DNA遇二苯胺会出现紫色反应,B,7.下列有关“DNA粗提取与鉴定”实验原理的叙述正确的是,10,PCR技术扩增DNA片段,1原理：DNA复制。2条件：模板、原料、酶。3场所：体外PCR扩增仪。4.过程：(1),变性,:当温度上升到90以上时，双链DNA解旋为单链，(2),复性,：温度下降到50左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合(3),延伸,：温度上升到72左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，,PCR技术扩增DNA片段1原理：DNA复制。2条件：模,11,PCR扩增技术和DNA复制的比较,细胞内DNA复制,PCR,不,同,点,解旋,解旋酶，边解旋边复制,80高温解旋，双链完全分开,酶,解旋酶，DNA聚合酶，DNA连接酶,Taq DNA聚合酶,引物,RNA,DNA或RNA,能量,ATP,不加,温度,体内温和条件,高温,PCR扩增技术和DNA复制的比较细胞内DNA复制PCR不解,12,细胞内DNA复制,PCR,不,同,点,子链合成,一条链连续(先导链)，另一条链不连续，先合成片段，再由DNA连接酶连接(滞后链),两条子链均连续合成,相同点,提供DNA模板；,四种脱氧核苷酸做原料；,子链延伸的方向都是从5,端到3,端,细胞内DNA复制PCR不子链合成一条链连续(先导链)，另一条,13,PCR技术的应用 PCR技术模拟细胞内DNA的复制过程，实现对某一段DNA的扩增。PCR技术能在几小时内将极微量的DNA特异性地扩增上百万倍，从而有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的难题，大大提高了对DNA分子的分析和检测能力，被广泛地应用于基因克隆、基因序列分析、遗传病诊断、古生物学研究以及刑侦破案、亲子鉴定等诸多方面。,PCR技术的应用 PCR技术模拟细胞内DNA的复制过,14,考点二血红蛋白的提取和分离,1.凝胶色谱法,凝胶色谱法是根据,相对分子质量的大小,分离蛋白质的方法之一。所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的，小球体内部有许多贯穿的通道，当一个含有各种分子的样品溶液缓慢流经时，,相对分子质量较大,的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程,较短,，移动速度,较快,；,相对分子质量较小,的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程,较长,，移动速度,较慢,。因此，样品中,相对分子质量较大,的蛋白质先流出，,相对分子质量较小,的分子后流出。,考点二血红蛋白的提取和分离1.凝胶色谱法,15,2.电泳,凝胶电泳法的原理是不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速率不同。从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。,2.电泳,16,4.实验操作流程 样品的处理 粗分离透析(去除小分子杂质)纯化凝胶色谱法进行分离和纯化 纯度鉴定SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量,4.实验操作流程 样品的处理,17,下列有关提取和分离血红蛋白的叙述中，不正确的（）,A.样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液,B.通过透析可以去除样品中相对分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取,C.可以通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即样品的纯化,D.可以通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度,B,下列有关提取和分离血红蛋白的叙述中，不正确的（）B,18,解析：,选B。样品处理是洗涤红细胞，使血红蛋白释放出来，通过离心法得到血红蛋白溶液。透析袋能使小分子自由进出，则大分子留在袋内，这样可以去除样品中相对分子质量较小的杂质。当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，这些蛋白质分子就可以分离开。判断纯化的蛋白质是否达到要求，通常用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法对蛋白质的纯度进行鉴定。,解析：选B。样品处理是洗涤红细胞，使血红蛋白释放出来，通,19,4(,2011广东卷，5,)以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是()A洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂 B猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少 C血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测 D在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢,对位训练,答案,D,4(2011广东卷，5)以下关于猪血红蛋白提纯的,20,解析,猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少，是提纯血红蛋白的理想材料。提纯血红蛋白分四步：红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析，其中洗涤红细胞时，要用生理盐水反复洗涤，既要将红细胞洗涤干净，又要不破坏红细胞，然后再用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂，释放出血红蛋白。分离提纯血红蛋白时用凝胶色谱法，其原理是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质，相对分子质量大的蛋白质移动速率较快；血红蛋白的颜色可用于观察红色区带的移动情况，并据此判断分离效果。,解析 猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋,21,(5)实验过程中加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固；低速、短时离心防止白细胞沉淀；缓慢搅拌防止红细胞破裂释放出血红蛋白。(6)检测血红蛋白的分离是否成功的方法：如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。,(5)实验过程中加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固；低速,22,考纲能力技术实践应用能力,考题1,血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O,2,和部分CO,2,的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。,考题链接,1.蛋,白质的提取与分离技术,考纲能力技术实践应用能力 考题1 血,23,(1)将实验流程图补充完整：A为_，B为。凝胶色谱法的基本原理是根据分离蛋白质的有效方法。,(2)洗涤红细胞的目的是去除，洗涤次数过少，无法除去；离心速率过快和时间过长会使一同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是。释放血红蛋白的过程中起作用的是。,(3)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是,。如果红色区带，说明色谱柱制作成功。,血红蛋白的释放,样品的加入和洗脱,量的大小,杂蛋白(血浆蛋白),血浆蛋白,胞和淋巴细胞,离心后的上清液中没有黄色,蒸馏水和甲苯,准确模拟生物体内的生理环境，保持,均匀一致的移动,体外的pH和体内的一致,相对分子质,白细,(1)将实验流程图补充完整：A为_，,24,体会,(1)实验原理：依据蛋白质的各种特性可以将不同种类的蛋白质分离。(2)常用方法 凝胶色谱法：根据相对分子质量的大小分离蛋白质。电泳：利用待分离样品中各种分子带电性质的差异及分子 本身大小、形状的不同产生不同的迁移速率，由此将各种分子分离。(3)蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。,体会(1)实验原理：依据蛋白质的各种特性可以将不同,25,
展开阅读全文