生物样本库建立与管理课件

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,生物样本库的建立与管理,生物样本库的建立与管理,生物标本库,(biological specimen bank,BSB):,是指标准化地收集、保存用于各种研究的正常或病理标本，包括人体器官组织、全血、血浆、血清、生物体液或经处理过的生物样本（,DNA,、,RNA,、蛋白等）以及与这些生物样本相关的临床、病理、治疗、随访、知情同意等资料及其质量控制、信息管理与应用系统。,生物标本库(biological specimen ban,重要性,人体生物样本为联系日益发现的分子（基因、蛋白等）信息与临床疾病关系的桥梁。尤其应用于：鉴定、验证药物靶点；研究疾病发病机制；疾病相关分子标记物筛选；分子分型与个性化治疗等。标准化生物样品库是基因组、功能基因组等生命科学研究与生物医药研发的关键源头，是众多重要基因、蛋白等科研成果快速产业化、应用到临床（分子分型检测、诊断与疾病的预测、预防及个性化治疗等的重要保证，毫无疑问的也是生命科学与生物医药技术自主创新体系中至关重要的环节与保证。,重要性 人体生物样本为联系日益发现的分子,有调查显示，多数公众对于利用外科手术切除组织进行肿瘤发病机制或分子标志物的研究持肯定态度，并认为这是对手术切除组织的最好利用。,在一项对住院、门诊、急诊,5 000,例患者的随机调查中发现，,89.3,的患者同意将其样本的遗传信息用于研究，但要求采用匿名形式。美国的,Vanderbilt,大学医学中心,2005,年启动了一项旨在将准备丢弃的患者血样再收集以建立,DNA,数据库计划。该计划估计，未来,5,年内可收到,30,万份以上的患者血样，以进行疾病的基因型与表型相关性分析。越是大规模的人群遗传学研究越是需要大样本的生物资源，故得到社会公众的认可很有必要。目前，许多国家的大型医疗机构已建立组织样本库与数据库，但因遗传信息属个人隐私，应当受到保护，也招致不少担忧。,1998,至,2002,年间就曾有,8,个国际机构提出建立以群体为基础的遗传资源库计划，主要内容是收集与储存血液及组织等生物样本，并收集与这些样本相关联的医学与生活方式等信息。该计划的共同目标是通过此项计划的实施，阐明某些疾病的遗传易感性和基因的复杂性，从而达到改善人类健康与医学诊疗水平的目的。但由于伦理学、涉及个人隐私等原因，该计划在一些国家搁浅。,公众对于肿瘤组织库建立的认知程度,有调查显示，多数公众对于利用外科手术切除组织进行肿瘤发病机制,生物样本库,政策法规,技术标准,伦理规范,ISO,标准,实验室安全,临床实验室,伦理,运输,标准操作规范（,SOPs,）,质量控制标准,样本采集,样本处理,样本质量检验,样本储存,样本运输,DNA,质量鉴定、,RNA,质量鉴定、蛋白质质量鉴定,知情同意书,质量审查,样本运输,样本转移协议,伦理委员会,伦理审查,生物样本库政策法规技术标准 伦理规范ISO标准实验室安全临床,ISO15189:2003,医学实验室质量和能力的专用要求,CNAS-CL02,医学实验室,-,质量和能力的认可准则,ISO/IEC17025:2005,检测和校准实验室能力的通用要求,CNAS-CL01,检测和校准实验室认可准则,ISO9001:2008/GBT19001-2008,质量管理系统 要求,GB/T1.1-2009,标准化工作导则：标准的结构和编写规则,ISO,标准,ISO15189:2003 医学实验室质量和能力的专用要求I,实验室安全,GB 19489-2008,实验室生物安全通用要求,CNAL/AC30-2005,实验室生物安全认可准则,WS/T233-2002,微生物和生物医学实验室生物安全通用准则,GB 50346-2004,生物安全实验室建筑技术规范,实验室安全GB 19489-2008 实验室生物安全通用要求,临床实验室,GB/T 20468-2006,临床实验室定量测定室内质量控制指南,GB/T 20469-2006,临床实验室设计总则,GB/T 20470-2006,临床实验室室间质量评价要求,WS/T102-1998,临床检验项目分类与代码,WS/T224-2002,真空采血管及其添加剂,WS/T225-2002,临床化学检验血液标本的收集与处理,WS/T227-2002,临床检验操作规程编写要求,WS/T228-2002,定量临床检验方法的初步评价,WS/T230-2002,临床诊断中聚合酶链反应（,PCR,）技术应用,WS/T249-2005,临床实验室废物处理原则,WS/T250-2005,临床实验室质量保证的要求,WS/T251-2005,临床实验室安全准则,WS/T255-2005,临床检验医学参考测量实验室,临床实验室GB/T 20468-2006 临床实验室定量测定,赫尔辛基宣言,涉及人类为研究对象的生物医学研究了国际伦理方针指南,关于,DNA,序列申请专利的声明：专利,关于早期发布原始序列数据有关专利申请问题的声明,关于,DNA,取样的声明：控制与获取,世界人类基因组与人权宣言,涉及人体的生物医学研究伦理审查办法（试行）,人类基因治疗申报临床试验指导原则,关于利益共享的声明,关于基因治疗的声明,关于人类基因组数据库的声明,国际涉及人类的生物医学研究伦理准则,人类遗传数据国际宣言纲要,人体生物医学研究国际伦理指南,伦理,赫尔辛基宣言伦理,物流术语,液氮生物容器,中国民用航空危险品运输管理规定,危险物品航空安全运输技术细则,运输,物流术语运输,血液样本采集操作规程,组织样本采集操作规程,样本采集,生物标本采集和储存,研究成功的,关键,要求,在采集和储存过程中不能受到,“,污染,”,储存的生物标本在任何时候进行检测都可以获得一致的结果,所有的生物标本都应有详细的背景材料和鉴别标识,血液样本采集操作规程样本采集生物标本采集和储存,DNA,提取和纯化操作规程,RNA,提取和纯化操作规程,蛋白质提取和保存操作规程,细胞系建立操作规程,血液样本处理操作规程,样本处理,DNA提取和纯化操作规程样本处理,条码标签设定使用规范,样本储存,不同生物样本对于低温储存的温度要求,肿瘤组织库建立中一个非常重要的问题是生物样本对于储存温度的要求。多数科学家认为。低温有利于长期保存生物大分子的完整性，如经高温加工处理的石蜡包埋组织块内的,RNA,分子会出现严重降解。理论上讲，,组织储存温度越低越好,。理想的组织储存环境是大型液氮罐，但并非所有医疗中心均有这样的设备，因此，,目前仍以低温冰箱储存为主。,由于多数机构手术取材地点与组织标本库并不在同一楼内，组织标本的转移、运输也需一定时间，故各单位可酌情配备一些不太昂贵的组织储存设备。如活检组织在,-20,环境中至少可保存,6,个月：在,-40,的环境中则可保存,3,年；若将组织保存在高浓度甘油中，则在,-10,0,的条件下也可保存,2,年。若将组织保存在高浓度甘油中，再储存于,-80,的低温冰箱中，则可长期保存，但这些组织不适用于,RNA,等研究。此外，组织标本库建立中提倡采用不间断性电源设备，以确保标本库内标本在短时断电情况下不会受到影响。肿瘤组织样本一般在离体后应尽快收集，并保存于,-80,的深低温冰箱内：血液样本与其他临床检验项目应一起采集，采集后先置于,4,冰箱内保存，尽量在,3,5 h,内离心，分离血清、血浆，最长不得超过,12 h,。分离获得的血清、血浆则需储存于,-40,的环境中，血清或血浆分离时一般予,2500 r,min,离心,15 min,。血液的离心沉淀物或提取后的,DNA,样本可长期储存于,-145,下。将组织样本存放于,-196,的液氮中则可储存多年，但若置于,-80,下，则其生物大分子活性保持时间会明显缩短。,条码标签设定使用规范样本储存不同生物样本对于低温储存的温度要,低温冻存被公认为是组织与器官长期保存最有效的方法之一。其原理是通过降低细胞的代谢率起到保护组织细胞的作用。但样本库内的生物样本是否可被持续使用还依赖于对储存样本的质量控制，该项工作主要由病理学家进行。病理学家需对提取的组织先进行病理切片观察若其中肿瘤成分超过,75,则认为质量良好，如不足,65,则应从研究中剔除。对样本得以储存的病例应进行定期临床随访，以便获得疾病治疗效果、临床进展及是否生存等重要资料。从有关单位获得的知情同意书看，,92,的患者同意出院以后接受随访。当前发展起来的分子生物学新技术大多要求研究样本中的核酸或蛋白质保存完好，故对于组织样本质量要求很高。目前，国内外大型肿瘤组织库以采用一,80,深低温冰箱储存为主，但在这样的低温环境下生物大分子活力究竟能保存多久仍无定论。众多研究显示，长期冻存对于,DNA,大分子的稳定性影响不大，甚至石蜡包埋组织块中的,DNA,也可进行分子生物学分析。,RNA,分子则易被广泛存在于细胞内、皮肤、唾液、汗液及周围环境中的,RNA,酶所降解。使用液氮保存是保存,RNA,活性的最理想方法，当温度降至液氮温度时，细胞组织中所有的生物化学、生物物理过程均处于停止状态 但限于空间及经费等原因，大型液氮储藏罐或液氮冰箱尚难以推广普及。对于组织,RNA,的质量分析主要依据,28S,与,18S,的比值进行，比值如在,2,左右认为质量好，比值小于,l,则认为,RNA,已降解。有关长期低温冻存对于蛋白质分子的影响还缺乏系统性研究报道，需各生物样本库在今后的质量控制分析研究中不断积累经验加以阐明。,生物样本长期保存的质量控制,低温冻存被公认为是组织与器官长期保存最有效的方法之一。其原理,伦理委员会知情同意书分为两部分。,第一部分 知情部分：,1,项目的介绍项目名称、研究者、申办者、撰写版本号或日期。声明受试者参加的项目是一个试验性研究工作。阐明研究的目的。描述试验的过程。说明研究中受试者将参与的时间和期限。随访的次数和过程。入选标准,/,排除标准。,2,说明参与本研究可能带来的益处：受试者本人及社会群体,3,应说明研究的保密性，受试者的记录将被妥善保管，作保密处理，但同时也应告知受试者资料有可能会接受有关部门,(,伦理委员会、食品药品监督管理局,),的监察，但不得对外披露其内容。,4,明确试验过程中联系医生的姓名和联系办法，他将回答受试者所有关于试验的问 题，并能当受试者出现紧急情况时及时联系。,5,阐明受试者的权利（自由参加和退出、知情、同意），参加试验是自愿的，即使中 途退出试验也不会有权益上的损失或影响治疗。,6,研究者或指定的研究人员将对受试者作详细说明，以使其充分了解以上内容，给受试者充分时间考虑并作出是否参加研究的决定。,7,该试验方案经伦理委员会批准实施，试验过程中有任何违反研究方案的情况，受试者可以直接向伦理委员会咨询。,第二部分 同意部分,：,1,我已认真阅读该知情同意书，研究人员已经向我做了详尽说明并解答了我的关问 题，我已充分知晓以上内容，同意参加研究。受试者签字,(,印刷体,)(,手写体,),，日期,(,手写体,),，受试者法定代理人签字,(,必要时,),(,印刷体,),。,2,我或我的研究人员已向该受试者充分解释和说明了本研究的目的、操作过程 以及受试者参加该试验可能存在的风险和潜在的利益，并满意地回答了受试者的 所有有关问题。主要研究者或研究者指定的研究人员,(,对受试者进行告知者,),签名,(,印刷体,)(,手写体,),日期。,知情同意书,伦理委员会知情同意书分为两部分。知情同意书,1,科学、医学和法律词汇要明确准确，前后一致；,2,语句短小精炼，避免长句；,3,段落短小，观点明确；,4,尽量使用陈述句，人称代词应该明确身份；,5,使用清晰易读的字体打印，一般使用,5,号字体；,6,内容使用的语言应该简明易懂，具有可读性，一般应 适合初中毕业者的阅读能力；,7,避免使用简写字或首字母缩写的词汇；,8,避免使用有开脱研究者或研究机构责任的语言；不称,“,病人