DNA重组技术课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,定向基因改造设想,设想一,能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？,能否让细菌“吐出蚕丝？,设想二,能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？,设想三,1,基因工程,2,基因工程的别名,操作环境,操作对象,操作水平,基本过程,结果,基因拼接技术或DNA重组技术,生物体外,基因,DNA分子水平,人类需要的基因产物,剪切,拼接,导入,表达,什么叫基因工程？,3,基因工程需要哪些根本工具?,4,培育抗虫棉需要哪些工具？,分子手术刀限制性内切酶,分子缝合针DNA连接酶,分子运输车运载体,5,第1节DNA重组技术的根本工具,6,一、限制性核酸内切酶,7,思考,在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？,细菌为什么不会因外源DNA的入侵而灭绝？,8,识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中,特定部位,的两个核苷酸之间的,磷酸二酯键,断开。,主要是从原核生物中别离纯化出来的一种酶。,4000种。,1、来源：,2、种类：,3、作用：,4、结果：,形成两种末端,一、“分子手术刀 限制性核酸内切酶,黏性末端,平末端,9,内切酶切割DNA后形成的末端黏性末端、平末端是如何形成的？,10,什么叫黏性末端？,11,12,什么叫平末端？,13,限制酶存在于原核细胞中的作用是什么？为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？,14,二、连接酶“分子缝合针,.作用：连接磷酸二酯键,15,限制酶切割后产生两种不同的末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否可以不加选择？,E.coliDNA连接酶：连接黏性末端,T,4,DNA连接酶：连接黏性末端和平末端,.DNA连接酶的种类,16,DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？,17,DNA连接酶,DNA聚合酶,连接DNA链,连接部位,相同点,双链,单链,在两DNA片段之间形,成磷酸二酯键,将单个核苷酸加,到已存在的核酸,片段的3末端的,羟基上，形成磷,酸二酯键,都能形成,磷酸二酯键,二者都由蛋白质构成,18,假设目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？,作为载体没有切割位点将怎样？,目的基因是否进入受体细胞，你如何觉察？,如果载体对受体细胞有害将怎样？,三、基因进入受体细胞的载体 “分子运输车,19,1.载体的必要条件,能自我复制，或能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；,有切割位点,有遗传标记基因,对受体细胞无害、容易别离,比较容易得到,20,能复制并带着插入的目的基因一起复制,有切割位点,有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。,21,常用的分子运输车有哪些？,22,小结,基因工程,的工具,限制酶,主要存在于原核生物中,具有专一性(识别序列),切开DNA分子的磷酸二酯键,DNA连,接酶,连接磷酸二酯键,种类,E.coliDNA连接酶,T,4,DNA连接酶,运载,工具,具备的,条件,结构简单,大小适中,能在宿主细胞中自,我复制并稳定存在,具一个多个限制酶切位点,具标记基因,质粒、,噬菌体衍生物、动植物病毒,23,1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（）,同种限制酶,B.,两种限制酶,同种连接酶,D.,两种连接酶,A,练习,24,2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是,A、能复制 （）,B、有多个限制酶切点,C、具有标记基因,D、它是环状DNA,D,25,3.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的根本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （）,A、人工合成目的基因,B、目的基因与运载体结合,C、将目的基因导入受体细胞,D、目的基因的检测和表达,C,练习,26,大肠杆菌的一种限制酶（EcoR)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端。,Sma能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端。,27,T,磷酸二酯键,1,2,3,4,5,1,2,3,4,5,A,28,