维生素与测定ppt课件

,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第十章 维生素的测定,第十章 维生素的测定,10.1,概述,维生素是维持机体正常生理功能及细胞内特异代谢反应所必需的一类微量低分子天然有机化合物。,虽然各类维生素的化学结构不同，生理功能各异、但它们都具有以下,共同特点,：,它们都是以其本体的形式或可被机体利用的前体形式存在于天然食物中；,大多数维生素不能在体内合成，也不能大量储存于组织，所以必须经常由食物供给；,它们不是构成各种组织的原料，也不提供能量；,虽然每日生理需要量,(,仅以,mg,或,ug,计,),很少，然而在调节物质代谢过程中却起着十分重要的作用。,维生素常以辅酶或辅基的形式参与酶的功能；,不少维生素具有几种结构相近、生物活性相同的化合物。,10.1概述 维生素是维持机体正常生理功能及,二、命名,二、命名,三、分类,根据维生索的溶解性可将其分成两大类：,1,脂溶性维生素,包括维生素,A,、,D,、,E,、,K,，它们不溶于水而溶于脂肪及有机溶剂,(,如苯、乙醚及氯仿等,),中；在食物中它们常与脂类共存，在酸败的脂肪中容易破坏；其吸收与肠道中的脂类密切相关；主要储存干肝脏中；,2,水溶性维生素,包括,B,族维生素（维生素,B1,、,B2,、,PP,、,B6,、叶酸、,B12,，泛酸、生物素等）和维生素,C,。与脂溶性维生素不同，水溶性维生素及其代谢产物较易排出，体内没有非功能性的单纯的储存形式。,有些化合物，其活性类似维生素，曾被列入维生素类，通常称之为“类维生素”，如生物类黄酮、辅酶,Q,、肌醇、硫辛酸、对氨基苯甲酸、乳清酸和牛磺酸等。,三、分类,四、测定意义,食品科学研究者需要准确的食品成分分析信息，计算营养素的膳食摄入，以改善人类的营养；,食品营养价值评价；,食品生产工艺设计及强化食品的评价；,食品资源开发；,食品标签的准确性。,五、测定方法,涉及人体和动物的生物分析方法；,利用原生生物、细菌和酵母等的微生物分析方法；,化学法、分光光度法、荧光法、色谱、酶法、免疫和放射等物理化学分析方法。,四、测定意义,10.2,脂溶性维生素的测定,脂溶性维生素的理化性质：,溶解性：不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、苯、乙醚等有机溶剂。,耐酸碱性：,V,A,、,V,D,对酸不稳定，对碱稳定；,V,E,对酸稳定，对碱不稳定。,耐热性：,V,A,、,V,D,、,V,E,耐热性好，能经受煮沸,耐氧化性：,V,A,易被氧化，光、热促进氧化,V,E,易被氧化，光、热、碱促进氧化,V,D,性质稳定，不易氧化,10.2 脂溶性维生素的测定脂溶性维生素的理化性质：,一、维生素,A,的测定,维生素,A,类是指含有,-,白芷酮环的多烯基结构、并具有视黄醇生物活性的一大类物质。广义而言包括已经形成的维生素,A,和维生素,A,原。,动物体内具有视黄醇生物活性功能的维生素,A,类包括视黄醇、视黄醛、视黄酸等物质，,4-,氧视黄酸、,4-,羟视黄酸等不具有视黄醇生物活性功能。,维生素,A,分为维生素,A1,和维生素,A2,，,A1,主要存在于海产鱼中，,A2,主要存在于淡水鱼中。,在植物中不含已形成的维生素,A,，在黄、绿、红色植物中含有类胡萝卜素，其中一部分可在体内转变成维生紊,A,的类胡萝卜素称为维生素,A,原，如,-,胡萝卜素、,-l,胡萝卜素、,-,胡萝卜素等。目前已经发现的类胡萝卜素约,600,种，仅有约,1/10,为维生素,A,原。,一、维生素A的测定 维生素A类是指含有-白芷酮环的多烯基结,维生素,A,的功能：,维持正常视觉,维持上皮的正常生长与分化,促进生长发育,抑癌作用,维持机体正常免疫功能,供给量与来源：,1989,年,RDA,中成人每人每天摄入维生素,800ug,视黄醇当量。,1992,年全国营养调查表明，我国城乡居民视黄醇当量平均摄入量仅为,476ug,，其中约,2,3,来自植物性食物。,维生素,A,最好的来源是各种动物肝脏、鱼肝油、鱼卵、全奶、奶油、禽蛋等；维生素,A,原的良好来源是深色蔬菜和水果，如冬寒菜、菠菜、首宿、空心莱、莴笋叶、芹菜叶、胡萝卜、豌豆苗、红心红薯、椒及水果中的芒果、杏子及柿子等。,维生素A 的功能：,（一）三氯化锑比色法,1,原理,维生素,A,在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用，生成蓝色物质，其颜色深浅与溶液中所含维生素,A,的含量成正比。,该蓝色物质不稳定，需在一定时间内（,6,秒）用分光光度计于,620nm,波长处测定其吸光度。,2,试剂,无水乙醚、无水乙醇、三氯甲烷等试剂需预先处理。,维生素,A,标准溶液,3,操作步骤维生素,A,极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或用棕色玻璃仪器。,全国癫痫病医院,癫痫病医院排名,癫痫病的早期症状,郑州军海癫痫病医院,www.adxki.c,om癫痫病人的寿命,www.adxkh.,com癫痫医院排行榜,（一）三氯化锑比色法1 原理全国,3.1,样品处理：,根据样品性质，可采用皂化法或研磨法。,3.1.1,皂化法：,适用于维生素,A,含量不高的样品，可减少脂溶性物质的干扰，但全部试验过程费时，且易导致维生素,A,损失。,皂化：根据样品中维生素,A,含量的不同，称取,0.5,5g,样品于三角瓶中，加入,10mL 1:1,氢氧化钾及,20,40mL,乙醇，于电热板上回流,30min,至,皂化完全,为止。,提取：,洗涤：,浓缩：,3.1样品处理：根据样品性质，可采用皂化法或研磨法。,水层,皂化瓶内混合物,分液漏斗,1,号,水洗,乙醚洗,振摇，静置，分层,水层,醚层,分液漏斗,2,号,振摇，静置，分层,醚层,水层,分液漏斗,3,号,振摇，静置，分层,醚层,分液漏斗,1,号,提取,水层皂化瓶内混合物分液漏斗1号水洗乙醚洗振摇，静置，分层水层,振摇，静置，分层,分液漏斗,1,号,水洗,醚层,水层,KOH,溶液洗,振摇，静置，分层,醚层,KOH,溶液层,水洗,振摇，静置，分层,醚层,水层,振摇，静置，分层,水洗,醚层,水层,净化,振摇，静置，分层分液漏斗1号水洗醚层水层KOH溶液洗振摇，静,分液漏斗醚层,乙醚洗涤,水浴蒸馏,减压抽干,氯仿定容（,5mL),无水硫酸钠,浓缩,分液漏斗醚层乙醚洗涤水浴蒸馏减压抽干氯仿定容（5mL)无水硫,3.1.2,研磨法,：适用于每克样品维生素,A,含量大于,5,10g,样品的测定，如肝的分析。（步骤简单，省时，结果准确。）,研磨：,精确称,2,5g,样品，放入盛有,3,5,倍样品重量的无水硫酸钠研钵中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质化。,提取：,小心地将全部均质化样品移入带盖的三角瓶内，准确加入,50,100mL,乙醚。紧压盖子，用力振摇,2min,，使样品中维生素,A,溶于乙醚中。使其自行澄清,(,大约需,1,2h),，或离心澄清,(,因乙醚易挥发，气温高时应在冷水浴中操作。装乙醚的试剂瓶也应事先放入冷水浴中,),浓缩：,取澄清提取乙醚液,2,5mL,，放入比色管中，在,70,80,水浴上抽气蒸干。立即加入,1mL,三氯甲烷溶解残渣。,3.1.2研磨法：适用于每克样品维生素A含量大于510,3.2,标准曲线制备,准确取一定量的维生素,A,标准液于,4,5,个容量瓶中，以三氯甲烷配制标准系列。,取相同数量比色管顺次取,1mL,三氯甲烷和标准系列使用液,1mL,，各管加入乙酸酐,1,滴，制成标准比色系列。,于,620nm,波长处，以三氯甲烷调节吸光度至零点，将其标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加入,9mL,三氯化锑三氯甲烷溶液。于,6s,内,测定吸光度。,以吸光度为纵坐标，以维生素,A,含量为横坐标绘制标准曲线图。,3.2 标准曲线制备,3.3,样品测定于一比色管中加入,10mL,三氯甲烷，加入,1,滴乙酸酐为空白液。,另一比色管中加入,1mL,三氯甲烷，其余比色管中分别加入,1mL,样品溶液及,1,滴乙酸酐。,其余步骤同标准曲线的制备。,4,结果计算,3.3 样品测定于一比色管中加入10mL三氯甲烷，加,（二）,HPLC,法（,GB/T 12388,）,1.,原理样品中的维生素,A,及维生素,E,经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法,C,18,反相柱将维生素,A,和维生素,E,分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。,最小检出量分别为,V,A,：,0.8ng,；,E,：,91.8ng,；,E,：,36.6ng,；,E,：,20.6ng,。,（二）HPLC法（GB/T 12388）1.原理样品中,2,试剂,无水乙醚、无水乙醇、三氯甲烷等试剂需预先处理。,维生素,A,标准溶液、维生素,E,标准溶液,内标物溶液：,10g,苯并,e,芘,/mL,3,仪器和设备高压液相色谱仪带紫外分光检测器。,2 试剂,4.,操作步骤,4.1,样品处理,4.1.1,皂化称取,1,10g,样品,(,含维生素,A,约,3g,，维生素,E,各异构体约为,40g),于皂化瓶中，加,30mL,无水乙醇，进行搅拌，直到颗粒物分散均匀为止。加,5mL 10%,抗坏血酸,，,苯并,e,芘标准,液,2.00mL,，混匀。加,10mL1:1,氢氧化钾,，混匀。于沸水浴上回流,30min,使,皂化,完全。皂化后立即放入冰水中冷却。,4.操作步骤4.1样品处理4.1.1皂化称取1,4.1.2,提取 将皂化后的样品移入分液漏斗中，用,50mL,水分,2,3,次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用约,100mL,乙醚,分两次,洗,皂化瓶及其残渣，乙醚液并入分液漏斗中。如有残渣，可将此液通过有少许脱脂棉的漏斗滤入分液漏斗。轻轻振摇分液漏斗,2min,，静置分层，,弃去水层,。,4.1.3,洗涤 用约,50mL,水洗,分液漏斗中的乙醚层，用,pH,试纸检验直至水层不显碱性,(,最初水洗轻摇，逐次振摇强度可增加,),。,4.1.2提取 将皂化后的样品移入分液漏,4.1.4,浓缩 将乙醚提取液经过无水硫酸钠,(,约,5g),滤入与旋转蒸发器配套的,250,300mL,球形蒸发瓶内，用约,10mL,乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠,3,次，并入蒸发瓶内，并将其接至旋转蒸发器上，于,55,水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中剩下约,2mL,乙醚时，取下蒸发瓶，立即用,氮气吹掉乙醚,。立即加入,2.00mL,乙醇，充分混合，溶解提取物。将乙醇液移入一小塑料离心管中，离心,5min(5000rpm),。上清液供色谱分析。如果样品中维生素含量过少，可用氮气将乙醇液吹干后，再用乙醇重新定容。并记下体积比。,4.1.4浓缩 将乙醚提取液经过无水硫酸钠(约5g,4.2,高效液相色谱分析条件（推荐条件）预柱：,ultrasphere ODS 10m,，,4mm4.5cm,。分析柱：,ultrasphere ODS 5m,，,4.6mm25cm,。流动相：甲醇水,982,。混匀。于临用前脱气。紫外检测器波长：,300nm,。量程,0.02,。进样量：,20L,。流速：,1.7mL/min,。,4.2高效液相色谱分析条件（推荐条件）预柱：ultr,4.3,标准曲线的制备,4.3.1,维生素,A,和维生素,E,标准浓度的标定方法取维生素,A,和各维生素,E,标准液若干微升，分别稀释至,3.00mL,乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。用比吸光系数计算出该维生素的浓度。,标准,加入标准的量,S,ul,比吸光系数，,E,cm,1%,波长，,nm,视黄醇（,V,A,）,10.00,1835,325,-,生育酚,100.0,71,294,-,生育酚,100.0,92.8,298,-,生育酚,100.0,91.2,298,4.3标准曲线的制备4.3.1维生素A和维生素E标准浓,4.3.2,标准曲线的制备（采用内标法）,把一定量的维生素,A,、,生育酚、,生育酚、,生育酚及内标苯并,e,芘液混合均匀。,进样，色谱分析。,以维生素峰面积与内标物