9微生物检验质量控制

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,微生物检验的质量控制,1,微生物检验的质量控制,质量控制（Quality control）,是临床微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系。,室内质量控制,室内质量控制是由实验室内部制定并实施的,是质量保证的核心和根底。,室间质量控制评价,室间质量控制评价是由实验室外部的组织或机构对实验室进行的质量评价。,2,检验前的质量保证,检验前程序：又叫分析前期。,指从临床医生开医嘱开始,到分析检验程序启动时终止的步骤。,包 括,检验申请,标本的采集、运送与接收,3,微生物检验中的质量保证,人员的组织与管理,标准的操作规程,试剂,培养基,设备,检验过程,4,试剂、培养基的质量控制,有效期,外观,性能测试,保存,5,各种试剂的监控菌种试剂,“x+v”因子试剂条,流感嗜血杆菌,副流感嗜血杆菌,嗜沫嗜血杆菌,硝酸盐还原试剂,大肠埃希菌,醋酸钙不动杆菌,每批，以后每次,靛基质试剂,大肠埃希菌,产气肠杆菌,每批，以后每天,甲基红试剂,大肠埃希菌,产气肠杆菌,每批，以后每周,V-P试剂,产气肠杆菌,大肠埃希菌,每批，以后每周,6,常用试验、染液的推荐菌株,试验名称,阳性对照菌,阴性对照菌,血浆凝固酶试验,金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌,触酶试验,金黄色葡萄球菌,肺炎链球菌,氧化酶试验,铜绿假单胞菌,大肠埃希菌,杆菌肽试验,A群链球菌,B群链球菌,奥普托欣试验,肺炎链球菌,草绿色链球菌,革兰染液,金黄色葡萄球菌,大肠埃希菌,抗酸染液,结核分枝杆菌,混合非抗酸菌,7,测定各种培养基性能的菌种,培养基 质控菌株 判定标准,羊血琼脂平板 金黄色葡萄球菌ATCC25923 生长,生长试验 大肠埃希菌ATCC25922 生长,溶血反响 肺炎链球菌ATCC19615 生长,溶血,化脓性链球菌ATCC6305 生长,溶血,杆菌肽敏感（纸片法）化脓性链球菌ATCC6305 10mm,敏感,B群链球菌 10mm,耐药,Optochin敏感（纸片法）肺炎链球菌 1518mm,敏感,涎链球菌 15mm,耐药,8,测定各种培养基性能的菌种,巧克平板,生长试验,淋病奈瑟菌,脑膜炎奈瑟菌,流感嗜血杆菌,肺炎链球菌,生长,SS平板,鼠伤寒沙门菌,伤寒沙门菌,福志贺菌,大肠埃希菌,肠球菌,生长,黑色菌落中心,生长,无色透明菌落,生长,无色透明菌落,局部抑制生长,红色混浊菌落,局部抑制生长,9,测定各种培养基性能的菌种,麦康凯平板 大肠埃希菌生长,红色混浊菌落,伤寒沙门菌生长,无色透明菌落,中国蓝琼脂 大肠埃希菌 生长,蓝色菌落,伤寒沙门菌 生长,无色菌落,营养琼脂 金黄色葡萄球菌 大量生长,福志贺菌 大量生长,厌氧血平板 脆弱拟杆菌 生长,产气荚膜梭菌 生长,溶血,碱性蛋白胨水 霍乱弧菌 大量生长,大肠埃希菌 抑制生长,10,测定各种培养基性能的菌种,弯曲菌琼脂 空肠弯曲菌 生长,大肠埃希菌 局部抑制,TCBS平板 霍乱弧菌 生长,黄色菌落,副溶血性弧菌 生长,蓝绿色菌落,沙保弱琼脂 白色念珠菌 生长,大肠埃希菌 局部或完全抑制,需氧血液增菌液 肺炎链球菌 生长,化脓性链球菌,铜绿假单胞菌,白色念珠菌,厌氧血液增菌液 脆弱拟杆菌 生长,11,各种鉴别培养基的测试菌种,培养基 阳性对照菌 阴性对照菌,赖氨酸脱羧酶 缓慢爱德华菌 费枸橼酸杆菌,鸟氨酸脱羧酶 产气肠杆菌 费枸橼酸杆菌,精氨酸双水解酶 阴沟肠杆菌 普通变形杆菌,蛋白胨水（靛基质）大肠埃希菌 阴沟肠杆菌,12,各种鉴别培养基的测试菌种,培养基 阳性对照菌 阴性对照菌,MR 大肠埃希菌 阴沟肠杆菌,V-P 阴沟肠杆菌 大肠埃希菌,枸橼酸盐（西蒙氏）产气肠杆菌 缓慢爱德华菌,苯丙氨酸脱氨酶 雷极变形杆菌 费枸橼酸杆菌,O-F试验管 铜绿假单胞菌（氧化型）洛菲不动杆菌（不利用）,大肠埃希菌（发酵型）,硝酸盐复原 大肠埃希菌 洛菲不动杆菌,13,各种鉴别培养基的测试菌种,培养基 阳性对照菌 阴性对照菌,胆汁-七叶苷 粪肠球菌 化脓性链球菌,脱氧核糖核酸琼脂 粘质沙雷菌 表皮葡萄球菌,氰化钾肉汤 产气肠杆菌 缓慢爱德华菌,丙二酸盐 产气肠杆菌 缓慢爱德华菌,尿素琼脂 雷极变形杆菌（快）大肠埃希菌,肺炎克雷白菌（慢）,半固体琼脂动力试验 大肠埃希菌 肺炎克雷白菌,14,仪器设备的质量控制,设备 控制范围 备注,高压灭菌器 121 定期用嗜热芽胞杆菌测试（每月）,孵育箱 35 1 定期加水,水浴箱 370.5 定期加水、清洁内壁,冰箱 4 2 定期清洁内部,CO2箱 5-10%淋病奈瑟氏菌检测效果,厌氧箱 美兰或铜绿假单胞菌测试厌氧条件,生物平安柜 更换滤网,紫外线消毒性能检测（每三个月）,血液培养仪 培养瓶进行少量生长试验；瓶位定期校正,微生物鉴定仪 探测部位定期清洁；鉴定卡、条、板测试,15,标本检验过程的质量控制,选择合理的检验工程,选择适当的标本,正确书写检验申清单,16,直接诊断,直接发现病原体,-脓、脑脊液、胸腹水等无菌部位标本,确定标本是否合格,并推测病原体,-痰液标本,发现病原体并进行初步计数,-尿液标本,为培养基和培养方法的选择提供信息,17,病原菌的别离培养,呼吸道标本,接种血琼脂平板、巧克力平板、麦康复凯平板和沙保弱琼脂,并将巧克力血平板置5%-10%CO2 35环境中培养。,粪便标本,接种SS平板、麦康凯平板或中国蓝平板,血液培养,在血液增菌培养期间,应至少在24h48h盲目翻种一次,以后有可疑细菌生长即刻翻种,尽早发现病原菌。,18,病原菌的鉴定,菌落形态观察-涂片染色镜检-生化鉴定-血清学试验,-氧化酶试验不应在糖类发酵选择性平板上进行,以免假阴性结果出现。,-在肠道选择性平板上应挑取菌落进行生化反响,生化反响符合,血清学凝集阳性者可确认报告。,不能从选择性平板上挑取菌落进行血清学凝集,会因为交叉抗原的存在或抗原的丧失而导致假阳性或假阴性。,每次血清凝集试验时,应用生理盐水作对照。防止粗糙型菌落造成的假凝集,19,药敏试验的质量控制要点,培养基,纸片,菌量,操作,孵育：,时间、温度、平板放置,结果判断,质控菌株,20,纸片扩散法的质控菌株,金黄色葡萄球菌,ATCC25923,大肠埃希菌,ATCC25922,大肠埃希菌,ATCC35218,（,用于,内酰胺酶抑制剂复合制剂）,铜绿假单胞菌,ATCC27853,粪肠球菌,ATCC29212,流感嗜血杆菌（用于,HTM,培养基）,ATCC49247,、,49766,淋病奈瑟菌（用于,GC,琼脂）,ATCC49226,肺炎链球菌（用于,5%,羊血,MH,琼脂）,ATCC49619,21,失控的常见的原因,-质控结果记录错误,-量取抑菌环直径时读数错误,-标准菌株被污染或其它改变,-接种的菌悬液太浓或过淡,-0.5管麦氏浊度标准管未摇匀或已过期失效,-孵育温度或气体环境不正确,-MH培养基质量有无问题,-含药纸片失效,22,检验后的质量保证,检验后程序：也称分析后期。,指检验后全部过程。,包 括,检验结果的评审与报告,-报告时间、分级报告、危急值报告及记录,标本的处置,-感染性废弃物,23,菌种保存方法,培养基保存法,快速冷冻法,冷冻枯燥法,24,菌种保管,定期转种,制备记录卡,专人负责,25,室内全面质量控制,全面实施各项质量控制内容,对人员要及时进行培训和考核,严格审核标本和结果报告,在日常标本中掺入模拟标本,进行盲点试验,发现误差,应及时找出原因,进行改进,26,室间质量控制的实施,组织单位：各级临床检验中心和参考实验室,工作任务：,定期或不定期地进行熟练程度考核和盲点试验检查。,定期或不定期地举办各种学习班,提高各级技术人员的技术水平,学习新的知识。,提供或催促有关部门提供合格的标准化的试剂、抗血清、培养基等实验必需品。,27,盲点质量控制,-quality control blind unknown,方 法,质控管理机构将模拟标本混入临床普通标本,送入实验室进行常规测定。,评 价,质控管理机构负责收回和评价实验结果,根据参加的规模和鉴定的正确数,计算鉴定正确率及所有参加实验室的平均分,以及每个实验室的得分。,28,谢 谢,29,