细胞培养技术(实验篇)ppt课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,细胞培养技术（实验篇）,安徽医科大学微生物学教研室,2007年12月3日 合肥,11/15/2024,1,细胞培养技术（实验篇）安徽医科大学微生物学教研室2007年1,实验一,实验准备工作,配液,11/15/2024,2,实验一 实验准备工作配液10/7/20232,材料（1）,所需物品名称,预试验需要量,每实验室准备量,普通天平及匙勺（只）,2,2,大酒精瓶（个）,3,3,250ml、1000ml量筒（个）,各1,各1,500ml盐水瓶（个）,1,1,玻璃棒（个）,2,2,中号镊子（把）,7,7,火柴、标签纸、记号笔（套）,6,6,11/15/2024,3,材料（1）所需物品名称预试验需要量每实验室准备量普通天平及匙,无菌100ml/250ml盐水瓶（个）,70,70,无菌大翻（个）,70,70,10ml吸管（支）,3,3,5ml吸管（支）,5,5,1ml吸管（支）,1,1,青霉素小瓶（个）,120,120,青霉素瓶塞（个）,120,120,重铬酸钾（g）,2400,2400,浓硫酸（ml）,4000,4000,双蒸水（5000ml）,5000,5000,青霉素(80万单位）,2瓶,30瓶,链霉素（1g),1瓶,15瓶,试剂（NaHCO3、KCL、NaCl、,Na2HPO4.12H2O、KH2PO4),各1瓶,各1瓶,结晶紫、甲醛、无水酒精,染液1瓶,染液1瓶,材料（2）,11/15/2024,4,无菌100ml/250ml盐水瓶（个）7070无菌大翻（个）,实验内容,（一）配清洁液,配制注意事项,：重铬酸钾溶于水中有时不能完全溶解，预先用2000ml热水助其溶解，再加入足量自来水，最后缓慢加浓硫酸。,切记：浓硫酸要缓慢加入，且边加边搅拌！,配方,：重铬酸钾 2400g,浓硫酸 4000ml,自来水 20000ml,11/15/2024,5,实验内容（一）配清洁液配制注意事项：重铬酸钾溶于水中有时不,（二）其他培养用液的配制及分工（分为三大组）,RPMI 1640,培养液,试验器材,：,RPMI 1640,2袋,NaHCO3 4g,双蒸水 2000ml,搅拌溶解,过滤除菌,分装,100ml/瓶，共20瓶，塞好大翻，并注明名称配制日期和组别,（每实验室20瓶，每小组1瓶）,2000ml大酒精瓶,1个,无菌100ml盐水瓶,20个,1000ml量筒,1只,天平,1台,过 滤器,1台,大翻、记号笔、标签纸,试验试剂,：,RPMI 1640,2袋,NaHCO3,1瓶,双蒸水,11/15/2024,6,（二）其他培养用液的配制及分工（分为三大组）RPMI 164,无菌分装5.6NaHCO3（调PH值使用,技术室提供,）,按照3ml/瓶分装，每室16瓶，每小组1瓶,。（,由学生完成分装,）,试验器材,：,无菌青霉素瓶,20只,无菌5ml吸管,1支,5.6NaHCO3 配制（由教师完成）：3ml/瓶16瓶14班672ml,过滤除菌,11/15/2024,7,无菌分装5.6NaHCO3（调PH值使用,技术室提供）按照,无菌分装1胰蛋白酶（技术室提供,）,按照1ml/瓶分装，每室16瓶，每小组1瓶。,（,由学生完成分装,）,试验器材,：,无菌青霉素瓶,20个,无菌1ml吸管,1支,1胰蛋白酶 配制（由教师完成）：1ml/瓶16瓶14班224ml,过滤除菌,11/15/2024,8,无菌分装1胰蛋白酶（技术室提供）按照1ml/瓶分装，每室1,Hanks液（母液由技术室提供）：,每室4瓶。每小组1瓶。,无菌10ml吸管,2支,无菌500ml盐水瓶,4个,大酒精瓶,1个,1000ml量筒,1只,配方,：,A液 100ml,B液 100ml,双蒸水 1800ml,混匀,过滤除菌,分装,500ml/瓶，共4瓶，塞好,大翻，并注明名称配制,日期,试验器材,：,A、B母液,配制（由教师完成）：100ml/瓶1瓶14班1400ml,11/15/2024,9,Hanks液（母液由技术室提供）：每室4瓶。每小组1瓶。无,配制双抗（无菌操作）：,按5ml/瓶分装，瓶口贴好胶布作好标记，胶布上注明配制日期和组别。,无菌5ml吸管,2支,无菌青霉素瓶,20个,配方,：,青霉素（80万U）2瓶,链霉素（1g)1瓶,Hank s液 100ml,混匀,每室20瓶。每小组1瓶。,试验器材,：,11/15/2024,10,配制双抗（无菌操作）：按5ml/瓶分装，瓶口贴好胶布作好标记,无菌5ml吸管,1支,无菌青霉素瓶,30只,无菌分装牛血清：,无菌血清150ml,56的水浴锅中,灭活30min,按每瓶5ml分装，并在瓶口处贴好胶布作好标记，写好日期和组别。,每实验室30瓶。每小组2瓶。,试验器材,：,血清购买（由教师完成）：150ml/瓶1瓶14班2100ml,过滤除菌,11/15/2024,11,无菌5ml吸管1支无菌青霉素瓶30只无菌分装牛血清：无菌血清,标好1000ml刻度的酒精瓶,1个,100ml量筒,1只,无菌100ml盐水瓶,15个,1PBS配制：,NaCl 8.0 g,KCl 0.2g,Na2HPO412H2O 2.9g,KH2PO4 0.2g,去离子水 1000ml,配方,：,按70ml/瓶分装，用硫酸纸包好瓶口，待高压灭菌后第二天派人再换大翻保存。,混匀,每实验室15瓶。每小组1瓶。,试验器材,：,11/15/2024,12,标好1000ml刻度的酒精瓶1个100ml量筒1只无菌100,100、250ml量筒,各1只,500ml盐水瓶,1个,天平,1台,染色液：,结晶紫 2.5g,甲醛 50ml,无水酒精 250ml,NaCl 4g,去离子水加至 500ml,配方,：,滤纸过滤备用,混匀,试验器材,：,由教师完成配制,每实验室1瓶。,11/15/2024,13,100、250ml量筒各1只500ml盐水瓶1个天平1台染色,无菌5ml吸管,1支,无菌青霉素瓶,15只,分装VTP（由技术室提供）：,无菌操作按4ml/瓶分装，并注明日期和组别。,60mlVTP,每实验室15瓶。,试验器材,：,VTP配制（由教师完成）：60ml/瓶1瓶14班840ml,过滤除菌,11/15/2024,14,无菌5ml吸管1支无菌青霉素瓶15只分装VTP（由技术室提供,特别说明,若未特别说明，上述试剂均放置28冰箱保存备用。,每次实验除菌过滤的顺序：,五个班,的RPMI 1640先滤，然后再滤Hanks液。,每组完成后统一收好，下次再分配到各小组。,11/15/2024,15,特别说明若未特别说明，上述试剂均放置28冰箱保存备用。1,谢 谢！,11/15/2024,16,谢 谢！10/7/202316,