病毒感染的微生物学检查方法课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,病毒感染的微生物学检查方法,41、实际上，我们想要的不是针对犯罪的法律，而是针对疯狂的法律。马克吐温,42、法律的力量应当跟随着公民，就像影子跟随着身体一样。贝卡利亚,43、法律和制度必须跟上人类思想进步。杰弗逊,44、人类受制于法律，法律受制于情理。托富勒,45、法律的制定是为了保证每一个人自由发挥自己的才能，而不是为了束缚他的才能。罗伯斯庇尔,病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法41、实际上，我们想要的不是针对犯罪的法律，而是针对疯狂的法律。马克吐温,42、法律的力量应当跟随着公民，就像影子跟随着身体一样。贝卡利亚,43、法律和制度必须跟上人类思想进步。杰弗逊,44、人类受制于法律，法律受制于情理。托富勒,45、法律的制定是为了保证每一个人自由发挥自己的才能，而不是为了束缚他的才能。罗伯斯庇尔病毒感染的检查方法一、标本采集与送检原则：1.尽早采取：发病初期,2.部位适宜：由感染部位采取,3.冷藏速送：装有冰块或干冰的容器内（一）供分离病毒、检出核酸及抗原的标本（二）检测特异性抗体 的标本,采集双份血清，4-20保存,病毒感染的微生物学检查方法41、实际上，我们想要的不是针对犯,1,病毒感染的微生物学检查方法课件,2,病毒感染的微生物学检查方法课件,3,病毒感染的微生物学检查方法课件,4,病毒感染的微生物学检查方法课件,5,（一）病毒分离,标本采集,杀灭杂菌,（,青链霉素,）,接种,鉴定病毒种型,易感动物,出现病状,鸡胚,病变或死亡,细胞培养,细胞病变,三大方法,（一）病毒分离标本采集杀灭杂菌接种鉴定病毒种型易感动物出现病,6,（二）病毒鉴定,1.,形态学鉴定,观察,CPE,。常见的细胞形态学变化为细胞变圆、坏死、溶解、脱落或形成合胞体。有些病毒能形成包涵体。,正常细胞,病变细胞,（二）病毒鉴定1.形态学鉴定观察CPE。常见的细胞形态学变,7,感染细胞具有吸附红细胞的能力,感染细胞的培养液中有许多游离病毒存在，具有凝集红细胞的作用,2.,血吸附和血凝作用,多见于以出芽方式释放的病毒。,感染细胞具有吸附红细胞的能力2.血吸附和血凝作用多见于以出,8,红细胞吸附,正常细胞,（,1,）血吸附作用,吸附试验可通过特异抗血清抑制来达到鉴定具有吸附特性的病毒,红细胞吸附正常细胞（1）血吸附作用吸附试验可通过特异抗血清抑,9,（,2,）血凝作用,血凝试验,血凝抑制试验,（2）血凝作用血凝试验血凝抑制试验,10,（,3,）病毒成分的直接检测,用免疫学或分子生物学技术直接检查感染细胞或其上清液中病毒抗原（或核酸）。,（3）病毒成分的直接检测用免疫学或分子生物学技术直接检查感染,11,三、电子显微镜检查,病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借助电子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态又非常典型的病毒，可直接从感染组织或分泌液，或者接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子显微镜检查，直接观察病毒粒子。,三、电子显微镜检查 病毒的很多特征如大小、形,12,透射电子显微镜,透射电子显微镜,13,1.,正染法：超薄切片法,取材,固定,戊二醛,四氧化锇,清洗与脱水,浸透,包埋,聚合,切片,染色,铀染,铅染,1.正染法：超薄切片法取材固定戊二醛四氧化锇清洗与脱水浸,14,鸡痘病毒（超薄切片）,鸡痘病毒（超薄切片）,15,超薄切片法的优缺点：,优点：,可观察病毒形态和形态发生过程,缺点：,操作复杂，费时，但标本可长时间保存,超薄切片法的优缺点：,16,2.,负染技术,负染是指通过重金属盐在样品四周的堆积而加强样品外周的电子密度，使样品显示负的反差，衬托出样品的形态和大小。,2.负染技术负染是指通过重金属盐在样品四周的堆积而加强样品外,17,口蹄疫病毒的电镜负染,口蹄疫病毒的电镜负染,18,负染法的优缺点：,优点：,快速简易（,10-20min,）；分辨率高；图象清晰地病毒结构,缺点：,敏感性低，要求病毒量在,10,7,以上；所有样品应处于悬浮状态,负染法的优缺点：优点：快速简易（10-20min）；分辨率高,19,免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相结合，在亚细胞和超微结构水平上对抗原物质进行定位分析的一种高度精确、灵敏的方法。,3.,免疫电镜技术,(,Immune electron microscopy,，,IEM,),免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相,20,（,1,）免疫凝集电镜技术,抗原与抗体凝集反应后，可使标本中病毒颗粒聚集成团，再经负染直接在电镜下观察，提高了敏感性，确定病毒的血清学性质。,（1）免疫凝集电镜技术抗原与抗体凝集反应后，可使标本中病毒颗,21,（,2,）免疫电镜定位技术,特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、过氧化物酶等标记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。,酶标记染色,（2）免疫电镜定位技术特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、过,22,四、血清学试验,是一种常用的诊断病毒病的方法。可采用,ELISA,、琼脂扩散、中和试验、标记抗体技术等免疫血清学方法检查病畜的抗体消长情况和发病组织中的病毒抗原。,四、血清学试验 是一种常用的诊断病毒病的,23,virus,1.,中和反应,观察特异性抗体能否保护易感的试验动物死亡，能否抑制病毒的细胞病变效应。凡能与病毒结合，使其失去感染力的抗体又称中和抗体。,virus1.中和反应观察特异性抗体能否保护易感的试验动物死,24,2.,补体结合反应,Ag,Ab,红细胞,溶血素,补体,Ab,Ag,红细胞,补体,溶血素,溶血 （,-,）,不溶血 （,+,）,2.补体结合反应 AgAb红细胞溶血素补体AbAg红细胞补体,25,3.,免疫扩散,3.免疫扩散,26,4.,酶联免疫吸附试验,（,ELISA,）,将已知的抗体或抗原结合在某种固相裁体上，并保持其免疫活性。测定时，将待检标本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应。然后加入酶的作用底物催化显色，进行定性或定量测定。,4.酶联免疫吸附试验（ELISA）将已知的抗体或抗原结合在,27,（,1,）间接,ELISA,（1）间接ELISA,28,（,2,）夹心,ELISA,（2）夹心ELISA,29,3,3,5,5,3,3,3,3,3,3,5,5,5,5,5,5,3,3,5,5,3,3,5,5,模板,DNA,双链,形成新的双链,DNA,退火,变性,五、分子生物学技术,聚合酶链反应,（,PCR,）,335533333355555,30,2.,核酸杂交技术,核酸探针（,probe,）是指能与特定核酸序列发生特异性互补的已知核酸片段，可检测待检样品中特定的基因顺序。,2.核酸杂交技术核酸探针（probe）是指能与特定核酸序列,31,六、感染组织的组织学检查,病毒在光学显微镜下无法看到，但是在某些病毒感染细胞内出现,包涵体,，或者细胞形态发生变化，则对诊断有重要意义。如,Negri,氏包涵体是狂犬病犬脑细胞的特征。病理组织或渗出液作成涂片检查包涵体时，常用苏木紫,-,伊红染色法。,六、感染组织的组织学检查 病毒在光学显微镜下,32,狂犬病毒包涵体（,Negri body,）,狂犬病毒包涵体（Negri body）,33,26,、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。,卢梭,27,、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。,罗曼,罗兰,28,、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。,孔子,29,、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。,达,芬奇,30,、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。,叔本华,谢谢！,34,26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必,