微生物实验-实验四中文ppt课件

,实验四肠道致病菌的微生物学检查结核分枝杆菌的培养及形态观察,医学微生物学实验,实验四肠道致病菌的微生物学检查结核分枝杆菌的培养及形态,实验内容：,1.,肠道致病菌的微生物学检查,2.,结核分枝杆菌的培养及形态观察,（抗酸染色）,实验内容：,1.,肠道致病菌的微生物学检查,实验目的：,肠道细菌营养要求不高，普通培养基均能生长。所有肠道杆菌形态、菌落特点相似，无鉴别意义。但生化反应十分活泼，是鉴定肠道菌的重要依据。,1.肠道致病菌的微生物学检查 实验目的：,（,2,）,常用培养基介绍,主要包括：,SS,琼脂平板,伊红美蓝培养基,（,EMB,）,双糖铁培养基,（2）常用培养基介绍,SS,平板分离肠道病原菌的强选择培养基,成分和作用,：,基础培养基,：提供氮源和碳源,胆盐、枸橼酸钠、煌绿,：可抑制肠道非致病菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。,乳糖，中性红,（,pH6.8-8.0,，红橙黄）：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质菌落淡黄色。,SS平板分离肠道病原菌的强选择培养基成分和作用：,H,2,S:,H2S:,致病菌,:,不分解乳糖，透明,无色，小菌落,非致病菌,:,分解乳糖，紫黑色,EMB,（,Eosin Methyl Blue),平板,分离肠道病原菌的弱选择培养基,致病菌:不分解乳糖，透明,无色，小菌落 E,微生物实验-实验四中文ppt课件,Double sugar iron agar slant,乳糖,FeSO,4,葡萄糖,指示剂,:,酚红,固体,半固体,37,18-24hrs,Double sugar iron agar slant乳,Double sugar iron agar slant,lactose,Fe,2,SO,4,glucose,指示剂,:,酚红,solid,Semi-solid,37,18-24hrs,observe,upperlayer,Lactose fermemtation,：,pathogenic bacillired,nonpathogenic bacilli-yellow,H,2,S,uderlayer,Glucose fermemtation,（,acid,gas,）,Motivation,gas,如何观察,上层含乳糖部分,乳糖发酵：致病菌红色，非致病菌黄色,H,2,S,然后观察下层,发酵葡萄糖（产酸产气）,动力,Double sugar iron agar slantl,Lactose fermemtation,glucose fermemtation,H,2,S,-,-,-,-,-,Lactose fermemtationglucose fe,（,3,）,肠道致病菌的分离鉴定,标本收集,分离培养,初步鉴定,生化反应,血清学鉴定,（3）肠道致病菌的分离鉴定,标本,选择鉴别培养基,SS,平板,生化反应,血清学鉴定,双糖铁,已知,Ab,检测未知,Ag,(,玻片凝集试验,),37,24h,粪便标本肠道致病菌分离鉴别流程,菌落,标本选择鉴别培养基 SS平板生化反应血清学鉴定双糖铁已知Ab,鉴别肠道致病菌的生化反应,糖发酵试验,甲基红试验,VP,实验,枸橼酸盐利用试验,硫化物（硫化氢）生成试验,吲哚生成试验,尿素水解试验,鉴别肠道致病菌的生化反应糖发酵试验,糖发酵试验,(fermentaton test),示教：单糖发酵管,糖发酵试验(fermentaton test)示教：单糖发酵,甲基红试验,（,methyl red test,）,-+,甲基红试验（methyl red test）-,-+,VP,（,Voges-Proskauer,）试验,-+VP（Voges-Proskauer,+,+,-,+-,Urease Test,尿素酶试验,：,H2S Production,硫化氢试验,Urease TestH2S Product,-+,-+,IMViC,试验,(,I,ndole Test,;,M,ethyl Red(MR)Test,;,V,oges-Proskauer(VP)Test,;,C,itrate Utilization Test),大肠埃希菌 ,产气杆菌 ,IMViC试验(Indole Test;Methyl Re,2.,结核分枝杆菌的培养及形态观察,发病趋势和临床意义,:,世界人口中大约,1/3,感染结核分枝杆菌。据,WHO,报道，每年约有,800,万新病例发生，至少有,300,万人死于该病。近年来，世界上有些地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫困等原因，发病率又有上升趋势。,抗酸染色试验是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据，也是考核疗效、评价防治效果的可靠标准。但抗酸染色阳性也不一定是结核杆菌，应注意鉴别。,2.结核分枝杆菌的培养及形态观察,结核分枝杆菌,形态：,细长，略弯曲的杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。,染色性：,不易着色，齐尼抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中其他物质蓝色。,培养特性：,专性需氧，最适,37,，营养要求高，生长缓慢，,18h,分裂一代。,罗氏,(Lowenstein-Jensen),培养基含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐、孔雀绿，,26,周可见菌落生长，菜花、颗粒或结节状菌落，乳白色或黄色，不透明。在液体培养基，生长于表面，有皱褶。,结核分枝杆菌形态：,结核分枝杆菌的培养方法,1,痰标本培养前处理,（,1,）酸处理法：痰标本加入,4,硫酸稀释,2,4,倍，置室温下,30min,，期间振荡,2,3,次，使痰液化后即可接种。,（,2,）碱处理法：痰标本加入,2,氢氧化钠溶液稀释,2,4,倍，置,37,温箱内,30min,，期间振荡,2,3,次，痰液化后即可接种。,2,接种培养法,取上述处理过的痰液,0.1ml,均匀接种于改良罗氏培养基斜面，,37,孵育,3,4,周后观察菌落特点。,结核分枝杆菌的培养方法1痰标本培养前处理,菌落为乳白色或米黄色，表面粗糙呈颗粒状或菜花状,菌落为乳白色或米黄色，表面粗糙呈颗粒状或菜花状,抗酸染色,结核杆菌对苯胺染料一般不易着色，但经加温或延长染色时间后能抵抗,3,盐酸乙醇的脱色作用。经此法染色后，结核杆菌及其他分枝杆菌呈红色，非抗酸菌呈蓝色。,示教：结核分枝杆菌抗酸染色,抗酸染色示教：结核分枝杆菌抗酸染色,实验步骤：,1,用竹签挑取开放性肺结核病人晨痰标本中干酪样小粒或脓性部分，或用取菌环挑取经酸、碱处理后的痰标本，置载玻片中央，均匀涂布成,1.52.0cm,卵圆形痰膜，干燥，固定。,2,滴加石炭酸复红液于涂片上，玻片置于酒精灯火焰缓缓加热，至有蒸汽冒出，约维持,5min,（,切勿沸腾或使染液干涸于玻片上,）。如有染液干涸趋势，应补加染液。然后自然,冷却,，用流水漂去多余染液。,3,滴加,3,盐酸乙醇脱色，至涂片较厚处无颜色脱出为止，约,30s,，水洗。,4,滴加碱性亚甲蓝液复染,1min,，水洗。,5,滤纸吸干后镜检。,实验步骤：,涂片,痰标本,固定,干燥,石炭酸复红,加热,注意：不要让染料干枯，需补加染料，保持冒蒸汽。,5,水冲,脱色,3%,盐酸乙醇,30”,水冲,美兰,1,水冲,干燥,观察,涂片 痰标本固定干燥石炭酸复红加热注意：不要让染料干枯，需补,抗酸染色,-,结核杆菌,抗酸染色-结核杆菌,微生物实验-实验四中文ppt课件,实验材料,痰液,1,管,/,小组，抗酸染色染液,1,套,/,小组，玻片,1,个,/,人,实验材料,实验报告内容,抗酸染色法,实验原理、实验步骤、实验结果绘图和结果分析。,实验报告内容,