实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,)东林煮大学,基础性实验,实验六,大肠杆菌质粒DNA的提取及检测,)东林煮大学,1,实验目的,掌握碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的原理和方法。,掌握离心机、移液器、震荡培养箱的正确使用方法。,了解不同构型的质粒DNA在琼脂糖凝胶中泳动速率的,差异。,实验目的,2,实验原理,质粒是存在于细菌染色体外的能够自主复制的环状,DNA分子。大小在1200kb之间,质粒DNA通常,以游离状态持续稳定地处于染色体外(在一定的条,件下又会可逆地整合到寄主染色体上),随着染色,体的复制而复制,并通过细胞分裂传递到后代。由,于质粒DNA自身具有复制原点、可携带外源基因,转移性强、拷贝数高、带有选择性标记等特点,使,得质粒成为基因工程中最常用的DNA载体。,实验原理,3,实验原理,质粒DNA分子具有3种不同的构型:,sC构型:共价闭合环形DNA(CCCDNA),质粒的,两条多核苷酸链均保持着完整的环形结构;,Oc构型:开环DNA(OCDNA),质粒的两条多核苷,酸链中一条保持着完整的环形结构,另一条链存在,处至多处断裂;,L构型:线性DNA(linear DNA),质粒DNA发生双,链断裂而形成线性分子。,实验原理,4,实验原理,同一质粒DNA的不同构型尽管相对分子质量相同,但在琼脂糖凝胶电泳中的电泳迁移率却是不同的,般情况下,泳动速率由快至慢依次为:超螺旋质粒,(Sc)、线性质粒(L)、开环质粒(Oc),质粒DNA的提取方法较多,要根据宿主菌和质粒的,特性选择适合的提取方法。目前常用的质粒提取方法,有:碱裂解法、煮沸法。,几种方法的提取流程是一样的:培养细菌扩增质粒,收集菌体裂解细胞分离和纯化质粒DNA。,实验原理,5,实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件,6,实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件,7,实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件,8,实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件,9,实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件,10,实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件,11,实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件,12,实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件,13,实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件,14,实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件,15,实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件,16,实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件,17,