流式细胞仪的临床应用课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2013 Mindray Confidential,#,流式细胞仪的应用,流式细胞仪的检测范围,检测范围：,凡细胞内能进行荧光标记的成分或变化都可用流式细胞仪进行检测。,RNA,含量,细胞大小,细胞颗粒度,细胞表面面积,DNA,含量与细胞周期,蛋白质含量,钙离子，,PH,值,膜电位,细胞结构,特异性抗原（细胞表面,/,胞浆,/,核）,细胞内细胞因子,细胞活性,酶活性,激素结合位点,细胞受体,细胞功能,3,生物学颗粒的概念,生物学颗粒包括大的免疫复合物、,DNA,、,RNA,、蛋白质、病毒颗粒、脂质体、细胞器、细菌、霉菌、染色体、真核细胞、杂交细胞、聚集细胞、人工合成微球等。,流式细胞仪在生命科学领域的应用,制药工业,药物筛选，疫苗研究,生物学研究,遗传，生殖，微生物，细胞生物，毒理，分子生物,环境研究,湖泊、海洋生态研究,临床研究,血液，肿瘤，药理，免疫,农业畜牧业,选种，育种,食品工业,主要工程：,淋巴细胞亚群分析,HLA-B27检测,白血病免疫分型,急性白血病、慢性淋巴增生性疾病CLD)/淋巴瘤,造血干细胞分析,造血干细胞相对计数；,造血干细胞绝对计数；,阵发性睡眠性血红蛋白尿症PNH诊断,CD55/CD59检测,血小板相关分析,血小板计数、血小板免疫表型分析,细胞周期与DNA倍体分析,流式细胞仪的临床应用,6,一、淋巴细胞亚群分析,7,白细胞分化抗原和,CD,分子,白细胞分化抗原leukocyte differentiation antigen：,指血细胞在分化成熟为不同谱系、分化不同阶段及活化过程中，出现或消失的外表标记分子；,CD分子cluster of differentiation：,将来自不同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原，且其编码基因和表达的细胞种类都已被明确鉴定的分化抗原，统一编号命名称为CD分子，目前至少发现有350种；,8,淋巴细胞亚群分析相关,CD,分子,CD,分子,主要功能描述,CD3,是组成,TCR,复合物的重要成分，其功能是负责向细胞内转导抗原刺激信号；,是,T,淋巴细胞的特异性表面标记分子,。,CD4,为单链跨膜糖蛋白分子，参与,TCR,识别特异性,MHC-,类分子,-,抗原肽复合物的信号转导；,CD4,也是,HIV,病毒,gp120,的受体，可与其发生特异性结合；,主要表达于辅助,T,淋巴细胞表面。,CD8,由,/,链借二硫键组成的异源二聚体,，参与,TCR,识别特异性,MHC-,类分子,-,抗原肽复合物的信号转导；,主要表达于细胞毒性,T,淋巴细胞和部分胸腺细胞表面。,CD19,主要表达于除浆细胞外的,B,细胞谱系发育的各个阶段，,是,B,细胞特异性表面标记分子。,CD16,属于免疫球蛋白超家族的跨膜分子，表达于,NK,细胞和巨噬细胞细胞表面，,可作为,NK,细胞的标志分子。,CD56,又称为,Leu-19,、,NKH1,或神经细胞黏附分子（,N-CAM,），,可作为,NK,细胞特异性表面标记分子。,CD45,在所有白细胞表面都有表达，又称为白细胞共同抗原（,LCA,）；,因其在各白细胞表面的表达丰度不一样，可作为淋巴细胞的设门标记分子。,9,淋巴细胞分类,根据淋巴细胞功能，可将淋巴细胞分为：,T淋巴细胞CD3+，主要与细胞免疫应答相关；,B淋巴细胞CD3-CD19+，主要与体液免疫应答相关；,NK淋巴细胞CD3-CD16+CD56+，主要介导靶细胞的杀伤作用；,根据细胞外表抗原表达，可将T淋巴细胞分为：,T辅助/诱导淋巴细胞CD3+CD4+；,T抑制/细胞毒淋巴细胞 CD3+CD8+；,CD3+CD4+/CD3+CD8+比值，主要用于评价自身免疫功能状态；,10,淋巴细胞亚群分析的临床应用,淋巴细胞亚群分析可以了解机体在不同条件下的免疫功能状态，主要包括细胞免疫功能和体液免疫功能。在临床上，主要用于对免疫系统造成明显干扰的相关疾病如病毒感染、恶性肿瘤、自身免疫病、免疫缺陷病、器官移植和造血干细胞移植后的免疫功能监控等等的辅助诊断，分析疾病的发病机理，监控疾病的病程进展，观测疗效及监测预后等等。,11,淋巴细胞亚群分析在肿瘤内科中的应用,临床意义,CD3,+,CD3,+,CD4,+,CD3,+,CD8,+,CD4,+,/,CD8,+,B,细胞,NK,细胞,肿瘤进展,预后不良,复发转移,有效手术,有效化疗,12,淋巴细胞亚群分析在风湿免疫科中的应用,临床意义,CD3,+,CD3,+,CD4,+,CD3,+,CD8,+,CD4,+,/,CD8,+,B,细胞,NK,细胞,SLE,类风湿性关节炎,自身免疫性溶血性贫血,重症肌无力,免疫缺陷病,13,淋巴细胞亚群分析在器官移植中的应用,急性排斥反响是器官移植的第一大障碍；,动态观测受者淋巴细胞亚群变化特点，对判断急性排斥反响和估计移植后感染等预后具有重要意义；,当CD4+/CD8+比值持续升高且大于1.2时应当考虑排斥发生；当CD4+/CD8+比值持续降低说明移植后出现感染；假设CD4+/CD8+比值小于0.2时，应立即停用免疫抑制剂；,14,常见疾病的淋巴细胞亚群变化,细胞亚群,变化,常见疾病,CD3,+,T,细胞,增高,T,系淋巴细胞白血病、,SLE,、重症肌无力、慢性活动性肝炎；,降低,恶性肿瘤晚期、,B,系细胞白血病、多发性骨髓瘤，传染性单核细胞增多症、免疫缺陷病；,CD3,+,CD4,+,T,细胞,增高,类风湿（活动期）、自身溶血性贫血；,降低,AIDS,、肿瘤晚期、巨细胞病毒感染、麻风、血小板减少；,CD3,+,CD8,+,T,细胞,增高,病毒感染（,HBV,、,EB,）、肿瘤、,传染性单核细胞增多症；,降低,类风湿、,重症肌无力、免疫缺陷病、肿瘤放射治疗；,（,CD3,+,CD4,+,）,/,（,CD3,+,CD8,+,）比值,增高,类风湿、,重症肌无力、,SLE,、自身溶血性贫血；,降低,AIDS,、传染性单核细胞增多症、病毒感染、肿瘤；,B,细胞,增高,MM,、巨球蛋白血症、淋巴瘤、,AIDS,；,降低,先天性免疫缺陷病、恶性肿瘤；,NK,细胞,增高,病毒感染早期、骨髓移植术后、习惯性流产；,降低,恶性肿瘤、部分病毒,细菌和真菌感染；,15,淋巴细胞亚群预期值,细胞亚群,(%),N,MEAN,95%RANGE,Total CD3,+,210,69,50-84,CD3,+,CD4,+,210,36,21-51,CD3,+,CD8,+,210,27,14-47,Total CD3,+,210,69,49-83,CD3,-,CD19,+,210,11,4-19,CD3,-,(CD16+CD56),+,210,19,6-38,注：,迈瑞,TBNK,试剂检测来源于北京年龄分布在,1865,岁之间的健康个体样本；,16,二、,HLA-B27,检测,17,血清阴性脊柱关节病,是一类具有以下共同特征的疾病：,类风湿因子RA阴性；,有家族聚集现象；,皆可影响脊柱，都有不同程度的骶髂关节炎，也可影响外周关节，下肢关节多于上肢关节，且呈不对称性；,与革兰氏阴性杆菌有一定相关性：强直性脊柱炎与肠道肺炎克雷白杆菌相关；Reiter综合征与沙眼衣原体、福氏痢疾杆菌相关；反响性关节炎与沙门杆菌、痢疾杆菌、耶尔森菌和HP相关；,与HLA-B27表达不同程度相关；,。,18,HLA-B27,相关的疾病,疾病,HLA-B27,阳性率,(%),强直性脊椎炎,90,Reiters,综合症,7090,银屑病性关节炎,5060,急性前葡萄膜炎,4050,溃疡性结肠炎伴关节病,510,正常人群,27,19,强直性脊柱炎,强直性脊柱炎AS定义：,一种慢性、进行性和炎性疾病，也是血清阴性脊柱关节病SpA中最具代表性的疾病。主要累计骶髂关节、脊柱、脊柱软组织及四肢关节，表现为椎间盘纤维环和纤维环结缔组织的骨化，椎间动关节和四肢关节滑膜的炎症和增生，严重者可失去劳动能力。,实验室检查：,CRP,升高,血沉加快,HLA-B27,阳性,内风湿因子阴性,20,HLA-B27检测阳性可显著增加正确诊断AS的几率，阴性那么为排除AS的诊断提供了有力的证据；,淋巴细胞,HLA-B27,检测在,AS,中的诊断价值,21,HLA-B27,的实验室检测,微量淋巴细胞毒实验MLCT,酶联反响吸附实验ELISA,引物特异性聚合酶联反响PCR-SSP,流式细胞术FCM,22,三、,PNH,检测,23,PNH,概述,阵发性睡眠性血红蛋白尿Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria：,是一种获得性造血干细胞异常性疾病，临床主要表现为造血功能异常，慢性溶血性贫血，夜间血红蛋白尿等等；,细胞膜,GPI,锚链蛋白缺失；,流式细胞术已经取代Ham实验，蔗糖溶血实验等传统筛查实验，成为诊断PNH的“金标准；,24,PNH,的流式诊断,正常人红细胞、粒细胞和血小板,CD59/CD55,表达完全阳性,；,25,四、细胞周期和,DNA,倍体分析,26,细胞周期和,DNA,倍体分析与肿瘤诊断,DNA,异倍体,的出现是癌前病变发生癌变的一个重要标志；,细胞的,增殖能力,的大小也可反映肿瘤的生物学特征；,利用流式细胞仪进行细胞周期分析和,DNA,倍性分析，辅助肿瘤诊断，包括监测,癌前病变,、肿瘤的,早期诊断,和肿瘤细胞学诊断。,27,细胞周期和,DNA,倍体分析原理,DNA,染料：,PI,7-AAD,DAPI,Hoechst 33342,THANKS,！,28,