食品安全快速检测11模块三 项目三电子课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,食品安全快速检测,0,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,食品安全快速检测11模块三 项目三电子课件,模块三 食品企业的快速检测,食品安全快速检测,模块介绍,食品企业对产品的自检自控体系的特点就是其控制的时效性和经济性，对检 测的要求是快速、灵敏、简便、经济，尽可能体现在线测量的效果，以提高响应 速度，保证体系的可操作性。食品安全快速检测技术一般体现在短时间、简化操 作、自动化、可进行多项目或多样品的同时检测，非常适合食品企业的检测要求。可以说食品安全快速检测是食品企业检测体系的需要和发展趋势。,课 程 学 习 要 求,知识要求：,.,了解食品安全快速检测的目的和任务。,.,了解食品安全快速检测常用方法。,.,了解食品安全快速检测设备。,能力要求：,.,熟练掌握样本的采集与制备。,.,熟练查找食品快速检测的相关标准。,.,熟练进行食品安全快速检测数据处理。,项目三 原料中生物毒素的快速检测,任务,1,黄曲霉毒素的快速检测,任务引入案例,2017,年,8,月,22,日国家食药监总局发布了关于,9,批次中药,饮片,不合格的通告。通告称，经重庆市食品药品检验检测研究院检验，标志为北京同仁堂,(,亳州,),饮片有限责任公司等,9,家企业生产的,9,批次中药饮片不合格，不合格项目为黄曲霉毒素。目前，相关监管部门已采取查封扣押等控制措施，要求企业暂停销售使用、召回产品，并进行整改。,京同仁堂检出黄曲霉毒素,任,实操一,花生中黄曲霉毒素胶体金法检测,1,适用范围,适用花生、玉米、小麦、大米、茶叶、油脂、饲料等的检测,2.,方法原理,采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术进行检测。,3.,操作方法,（,1,）取,5g,以上有代表性的粉碎后的谷物样品（过,20,目筛），准确称取,0.5g,均匀粉碎试样，加入到配套的,15mL,离心管中。,（,2,）向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各,2mL,，将瓶塞盖紧密封，用力振荡,5,分钟，,4000rpm,离心,1,分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取,1.5mL,上清液，用小离心机离心）。,（,3,）用吸管取,0.6mL,上清液到小玻璃杯中，吹干滤液（吹风机或烘箱），然后用,0.3mL,体积稀释液复溶杯底固体。此溶解液即为检测液。,（,4,）取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入,3,滴检测液。,（,5,）,5,10,分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。,4.,结果判断,（,1,）阴性：测试线（,T,）与对照线（,C,）都出现，表明样品中黄曲霉毒素的浓度小于,5g/kg,。,（,2,）阳性：只有对照线（,C,），无测试线（,T,），表明样品中黄曲霉毒素的浓度大于或等于,5g/kg,。,（,3,）无效：对照线（,C,）和测试线（,T,）都不出现，或者对照线（,C,）不出现。,胶体金试剂盒结果判读,（,3,）若三个稀释度的菌落数都有在,10,100,个之内，应选择二个低数值的平均数（见例,4,）。,（,4,）,若三个稀释度的菌落数均小于,10,个或大于,100,个时，应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数；或采用均小于数量标准的最小值，或采用均大于数量标准的最大值,5.,注意事项,本品需存放在,8,以下冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后，未用的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。,任务,2,赭曲霉毒素的快速检测,任务引入案例,最早关于 赭曲霉毒素,A,的记录是在,1928,年的丹麦。在,1957,年和,1958,年，多瑙河沿岸国家南斯拉夫、罗马尼亚和保加利亚等国的居民流行一种肾病（巴尔干肾病），农村地区从事种植业的农民，只食用自己田里收获的粮食。该肾病就是由于人食用了含有赭曲霉毒素的食物引起，,巴尔干肾病,赭曲霉毒素,A,人类食物和动物饲料中都有赭曲霉毒素存在，赭曲霉毒素就是造成人类和猪发生肾病的原因。国际癌症研究机构（,IARC,）将赭曲霉毒素,A,分类为可能的致癌物。,任,实操,小麦中赭曲霉毒素,A,荧光定量快速检测,1,适用范围,适用于中草药、谷物及制品、牛奶、咖啡等样品中的赭曲霉毒素,A,的检测。,2.,方法原理,利用赭曲霉毒素,A,特异性核酸适体，利用荧光染料对双链核酸的特异性结合原理，建立的一种检测赭曲霉毒素,A,的快速定量方法。荧光染料不结合单链核苷酸，仅识别并结合双链的螺旋结构，继而释放荧光。当荧光染料浓度一定时，反应体系中加入不同浓度的赭曲霉毒素,A,，则反应液中的荧光强度不同，从而达到快速定量检测的目的。,3.,操作方法,将小麦粉碎后过,20,目筛，在,65,下烘干后充分混匀，准确称取,5.0g,待测样品于,50mL,离心管中，加入,25mL 70%,甲醇溶液。振荡提取,5,7 min,，静置,3min,过滤或离心得上清液。取,600,L,室温下的样品稀释液与,100,L,上清液涡旋混合，即为待测溶液。,提前将未开封的检测卡及待检样本放在室温下平衡,0.5 h,左右。将检测卡平放，用移液器定量吸取,100,L,待测液加入,600,L,样本稀释液中，反复吸打至,5,次，使其充分混和均匀，再吸取,100,L,此混合液垂直滴加于荧光定量检测卡的加样孔中，开始计时；反应,10 min,后，将检测卡放入时间分辨荧光免疫层析检测仪中，点击仪器主界面“测量”菜单中“样品及时测量”按钮，进行检测。仪器读数完成后会自动计算出被检样本中的赭曲霉毒素,A,含量。,4.,结果判断,采用便携式赭曲霉毒素,A,检测仪进行读数，打印检测报告。,任务,3,龙葵碱的快速检测,实操,马铃薯中龙葵碱的化学显色法快速检测,1.,适用范围,适用马铃薯、番茄及茄子等茄科植物食品。,2.,检测原理,龙葵碱能与钒酸铵，,硒酸钠,显色，且随着时间变化，颜色变化多样，是龙葵碱的特征,性反应,。同时龙葵碱也能与,浓硝酸,、,浓硫酸,发生,氧化还原显色反应,。,3.,操作步骤,（,1,）取适量样品捣碎后榨汁，放入烧杯中，残渣用水洗涤，将洗液与汁液混合，取上清液用。,（,2,）氨水碱化，蒸发至干。残渣用,95%,热乙醇提取,2,次，过滤，滤液用氨水碱化，使龙葵碱沉淀，滤去沉淀。,（,3,）取少量沉淀加入,1mL,钒酸铵溶液，观察颜色变化。,（,4,）取少量沉淀加入,1mL,硒酸钠溶液，温热，冷却后观察颜色变化。,（,5,）将马铃薯发芽部位切开，在出芽部位分别滴加浓硝酸和浓硫酸，观察颜色变化。,4.,结果判读,（,1,）加入,1mL,钒酸铵溶液，呈现黄色，以后逐渐转变为橙红色、紫色、蓝色、绿色，最后颜色消失，结果为龙葵碱阳性。,（,2,）加入,1mL,硒酸钠溶液，温热，冷却后呈紫红色，后转为橙红色、黄橙色、黄褐色，最后颜色消失，结果为龙葵碱阳性。,（,3,）滴加浓硝酸和浓硫酸，显玫瑰红色，结果为龙葵碱阳性。,任务,4,玉米赤霉烯酮的快速检测,实操,玉米中玉米赤霉烯酮,ELISA,试剂盒快速检测,1.,适用范围,可用于定量、定性检测饲料、玉米等样本中玉米赤霉烯酮的残留。,2.,方法原理,酶联免疫法测定抗原主要有四种方法，竞争法、双抗体夹心法、改良的双抗体夹心法和抑制性测定法。,本试剂盒采用间接竞争酶联免疫法，在微孔板上预包被玉米赤酶烯酮偶联抗原，标准品或样本中的玉米赤酶烯酮与微孔板上的抗原竞争结合抗玉米赤酶烯酮抗体，加入酶标二抗后，用,3,3,5,5-,四甲基联苯胺,TMB,显色（,TMB,是非常优越的酶免试验显色剂底物），样本吸光值与其所含玉米赤酶烯酮的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中玉米赤酶烯酮的含量。,3.,操作方法,（,1,）称取,5 g,具有代表性的粉碎样品于,100 mL,带塞三角瓶内，准确加入,25 mL 60%,（,v/v,，,60:40,）甲醇水溶液。,（,2,）将加入了甲醇水溶液的样品放入振荡器内（或用手强力振荡），充分振荡,3,分钟后，用滤纸过滤，收集滤液。,（,3,）取滤液,2mL,，加入,6 mL 20%,（,v/v,，,20:80,）甲醇水溶液，混匀，用滤纸过滤，此为样品待检液。,定量检测程序,（,1,）实验准备：从冰箱取出试剂盒，恢复至室温后，打开自封袋，取出所需数量的板条插入微孔架，记录空白、标准品,号及样品的位置。其余板条封口后放入冰箱。将浓缩洗涤液用超纯水或蒸馏水稀释,20,倍，待用。,（,2,）加样：空白孔加入,100,L,洗涤液,(,不加抗体,),。标准品孔和样品孔相应地加入标准品,(),和样品待检液,50,L/,孔（如上表所示加入），再加入抗体,(50,L/,孔,),，此时各孔中溶液体积为,100,L,。将酶标板在水平桌面上轻微振荡（注意避免液体溅出），使之混匀，放入湿盒内,(,在有盖容器内放置一块平整湿纱布,),，,37,温育,30,分钟。注意：此操作步骤要快，尽量保持前后孔温育时间一致，每次加样须更换新的吸头。去除中间空格,（,3,）洗板：甩出孔中的液体，用洗瓶或移液器将洗涤液加入各孔中,(,满孔,),，再次甩出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打以除去孔中的液体，再重复操作洗涤步骤三次,(,共洗四次,),。,（,4,）加酶标二抗：将洗好的酶标板平放，加入酶标二抗,100,L/,孔，置于湿盒内，,37,温育,30,分钟。,（,5,）洗板，参照步骤（,3,）。,（,6,）显色：将洗好的酶标板平放，加入显色液,100,L/,孔，,37,显色,5,分钟,(,若显色较浅，可适当延长，但不宜超过,10,分钟,),。,（,7,）终止及测定：将显色完毕的酶标板取出，加入终止液,50,L/,孔，轻微震荡混匀，以空白孔调零，在,450nm,处测量吸光值,A,（在加入终止液,5,分钟内读取吸光值）。,4.,结果判定,以标准品浓度,30ppb,、,60ppb,、,200ppb,、,500ppb,的常用对数值（,1gC,）为横坐标，各浓度标准品相应的吸光值,A,与,0ppb,的标准品,A,值的比值,(B/B,0,%),为纵坐标，,B/B,0,%=,标准品（或样品）的吸光值,/0ppb,标准品的吸光值,100%,，绘制标准曲线。,根据样品孔的吸光值计算样品的,B/B,0,%,值，查标准曲线，可得到相应样品中的含量,(,已考虑样品提取的稀释倍数，结果无需换算，或可直接用,RADEWIN,等专用,ELISA,分析软件对数据进行分析得出结果,),。如果检测结果高于检测上限，请将待测样品提取液用,30%,甲醇水（,v/v,，,30:70,）稀释后再检测，测定结果乘以相应的稀释倍数,.,任务,5,肉毒素的快速检测,实操,豆瓣酱中肉毒素的免疫胶体快速检测,1.,适用范围,本方法适用于肉类、豆制品、腌制的菜、酱、蜂蜜、奶液等,A,型肉毒素的检出。,2.,检测原理,采用双抗体夹心法，将抗,A,型肉毒素特异性抗体包被在硝酸纤维膜上，用于捕捉标本中的,A,型肉毒素，然后用特异性抗体标记的免疫胶体金探针进行检测。检测时，待测样品中的肉毒素与试纸条上的金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，并与膜上的抗体结合形成肉眼可视红色带。,双抗夹心法,3.,操作步骤,（,1,）固态食品如肉类、豆制品、腌制的菜、酱等，称取约,2g,，充分剪碎，加,5mL,生理盐水振荡,10min,，使内容物充分浸出，自然沉降后取上清液,0.3mL,作为样品检测液；液体食品如蜂蜜、奶液等，吸取,0.1mL,，加生理盐水,0.4mL,，混匀后作为样品检测液。,（,2,）取试剂一个，撕开外包装，吸取样品检测液，滴加,3,4,滴（约,0.2mL,）于试剂圆孔中，,2min,后观察结果，,15min,终止观察。,4.,结果判定,（,1,）阳性结果：试剂窗口,“C”,和,“T”(,对照和检测,),处出现,2,条红色沉淀线为阳性，即有肉毒素检出。,（,2,）阴性结果：试剂窗口,“C”,（对照）处出现,1,条红色沉淀线为阴性，即无肉毒素检出。,（,3,）试剂失败：试剂窗口,“