核酸分离提取技术课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,核酸分离提取技术,51、山气日夕佳，飞鸟相与还。,52、木欣欣以向荣，泉涓涓而始流。,53、富贵非吾愿，帝乡不可期。,54、雄发指危冠，猛气冲长缨。,55、土地平旷，屋舍俨然，有良田美池桑竹之属，阡陌交通，鸡犬相闻。,核酸分离提取技术核酸分离提取技术51、山气日夕佳，飞鸟相与还。,52、木欣欣以向荣，泉涓涓而始流。,53、富贵非吾愿，帝乡不可期。,54、雄发指危冠，猛气冲长缨。,55、土地平旷，屋舍俨然，有良田美池桑竹之属，阡陌交通，鸡犬相闻。植物分子生物学实验技术,主要内容,第一部分核酸的分离制备,第二部分PCR技术,第三部分主要分子标记,第四部分基因克隆,摘要：随着教育体制的改革，中学生的体育锻炼越来越受到关注，初中体育课程的重要性也逐渐体现出来。本文主要阐述多媒体在初中体育教学中的作用以及初中体育教师要怎样有效地利用多媒体进行教学。,初中的体育课堂教学对学生的身体素质和意志品质有着不可忽视的影响。初中体育的学习还强调理论与实际动作和技术的结合，引导学生培养终身体育的健康观念。随着时代的发展，多媒体在教育教学中的作用也备受人们关注。然而，在当前的初中体育教学中仍然存在着不少的问题，导致初中体育的教学效果大打折扣。,1当前初中体育教学中存在的问题,1.1教师的教学手段较落后，方法单一,不少的初中体育教师在教学过程中所使用的教学手段比较落后，且教学方法单一，未能适应现代学生的发展需要。他们在体育课堂中偏重对学生的动作技术的教学，往往是通过自身来示范动作，让学生模仿学习，再自行练习，并将这样的教学模式一直循环往复，从初一到初三基本都是如此，导致学生在长时间的重复中感到无趣，这在一定程度上也阻碍了学生的创新能力的发展。,1.2学生对初中体育的学习积极性不高,不少初中学生对体育课堂学习的积极性并不高，这不是说这些学生不喜欢体育课，只是他们认为体育课程过于单调，不能激发学习兴趣。他们往往认为上体育课就是要完成教师交代的任务，并在期末测试中获得一定的成绩即可，而没有理解体育课程的真正意义和内涵，他们没有从体育课程中真正认识和学习到可以让他们获益的东西。另外，由于教师在课堂中没有将教学内容和社会生活实际相联系，导致学生只能体会到干巴巴的动作，而没有感受到体育运动背后所传达的重要意蕴。,2多媒体在初中体育教学中的重要意义,2.1利用多媒体有助于学生形成终身体育观念,在初中体育教学中利用多媒体，有助于优化体育技能教学和训练模式的可变性，易于被初中学生接受，让他们形成终身体育观念。1多媒体教学因其教学手段新颖，教学方式生动，容易吸引学生快速进入体育课程的教学当中，增强学生对体育学习的接受性，有利发挥学生的个性。例如，初中体育教师在教授广播体操时，就可以利用多媒体展示，让学生深切体会到广播体操的结构简易、训练形式多变、形态组合灵活多变等特点，有助于锻炼学生的意志和情操，健全和完善他们的道德品质，能让学生明白体育锻炼的重要性，身心健康的可贵性，使他们不但具有健康的体魄，还拥有健康的心理。,2.2利用多媒体有助于满足学生对体育课程文化的求知欲,利用多媒体有助于学生对体育课程文化的求知欲。初中学生对知识的渴求，对学习的积极性是十分强烈的，如果体育教师在课堂教学中可以调度适当，应用多媒体的视频和图片的展示，并结合声音或音乐，将所要教学的内容展现在学生面前，突出他们的课堂主体性，调动他们的学习主动性，发挥其个性，则有助于满足他们对体育文化的求知欲。让初中体育课程的教学能够更好地与学生的体育学习和体育锻炼相结合，对传承体育文化的精神有着极其重要的意义。,2.3利用多媒体有助于激发学生学习体育的兴趣,利用多媒体有助于激发学生学习体育的兴趣，优化体育课堂中的动作技能教学，使学生更容易从心底里接受体育活动、喜爱体育活动，逐渐了解体育的精神实质，进一步理解体育独特的形式和宝贵的价值理念。,3有效利用多媒体在初中体育教学中的策略,3.1直观展示，激发学生兴趣,在初中体育课堂中，要恰当地运用多媒体的技术结合直观示范教学的方法，加强理论学习，激发学生兴趣。2教师本人或指定学生将具体动作作为范例，让学生从直观地了解和明确体育技能动作的表像，使学生从感性认识中获得正确的动作全貌。充分利用多媒体制作、录像、拍照等技术手段，整合体育课堂教学的过程，突出体育教学中的动作中的本质和固有特点，帮助学生建立正确的动作概念，领会单个动作乃至整体动作的演练风格。避免学生因为只是听着教师的讲解而抽象地理解教学内容。,3.2因材施教，适应学生的学习需要。,要恰当地运用多媒体技术在初中体育课堂中，要因材施教，根据班上的学生的学习特点和教学内容的特质，选择适合的手段和方法来适应学生的学习需要。由于每个学生的学习基础和学习个性都有所差异，所以初中体育教师在教学中要借助多媒体来为学生创设个性化的情境进行因材施教。例如，在教羽毛球的时候，可以根据学生的行为特征和羽毛球教学的不同类型，借助多媒体技术为学生提供不同打法的动作技能指导，让学生可以有针对性地学习，教师也可以灵活地进行个性化教学。,一、运用板图，简单明了，激发学生兴趣,兴趣是最好的老师，是成功的先导。实践证明，在课堂教学中经常性地使用板图，设置情境，激发兴趣，能逐步引导学生对地球课爱学、乐学。如，了解“非洲气候的分布”，是学生认识的一个难点。课堂上使用彩笔，运用圈、点、线条法，绘出“非洲气候分布略图”，边绘边讲，让学生清楚看到：非洲大陆赤道南、北的气候是对称分布的，即从赤道附近的热带雨林气候，向南北依次为热带草原、热带沙漠和地中海气候。色彩鲜艳的板图，绘“形”绘声的讲解，不仅能充分调动学生的视觉、听觉记忆，便于理解，印象深刻，而且培养了学生的审美情趣，圈、点、线条的符号美、色彩美。与此同时，教师娴熟的绘画技巧和精湛的描图笔法，也会对学生产生一种无形的感染力，形成师生之间的亲和作用，使学生亲其师，信其道，乐其学。,二、运用板图、启迪思维，加深学生理解,地理板图的形象直观性特点，使它不仅便于帮助学生理解、掌握地理知识，而且有利于学生想象力和思维能力的培养。如，学生对“长江防洪”的理解是“长江”一节的教学重点。教师可在黑板上绘出“长江水系略图”，启发学生从气候、水系、植被等方面思考“造成长江洪灾的主要原因”和“长江中下游洪水的主要来源”两个问题。在此基础上，进一步引导学生根据板图，展开联想，深入思考产生洪灾的人为因素：上、中游地区植被毁坏严重、造成生态失衡、水土流失加剧、泥沙大量淤积。关于中、下游洪水的主要来源问题，以及对这三股洪水有时汛期错开、调节干流水量，有时一起涌来，造成洪涝灾害的具体分析。可利用学生已有的“我国东部地区锋面雨带推移规律”的知识，指导学生在板图上做动态演示和推理判断，并启发学生由直观形象的感知，进一步上升到理性认识：防洪是综合治理长江的首要任务。这样运用板图，启思导学，让一些多媒体不能表达的死知识变得鲜活生动，既发展了智力，又培养了能力。,三、运用板图，指导训练，提高教学效益,地理板图化繁为简，突出重点的特色，决定了它在反馈训练、复习巩固等环节上的巨大优势。教学实践证明，整节、整章的内容有时都可根据教学需要，把它浓缩到一、两个板图进行系统、条理或巩固练习。图表，特别是在进行地理事物的位置教学时，更能发挥其多媒体手段不能替代的作用。如，“中国的河流和湖泊”一章的复习，就可利用一副中国轮廓略图来实施：首先，绘制板图，引导学生回顾本章三节内容的知识要点，从整体上把握本章教材的脉络；然后，精心取舍，选取重点，在上述空白板图上分别绘出长江、黄河的水系略图，请学生边说边填注两河最为突出的地理要素。如，源头、支流、注入的海洋等等，直到完成填注内容，教师最后依图小结。这种复习训练，体现了地理学科的综合性，一方面通过精讲多练，帮助学生形成了准确的空间位置观念，锻炼了学生的绘图、填图技能；另一方面，也培养了学生快速整合知识的能力，以及整合分析解决问题的能力，有利于提高教学效率，实现教学目的。,核酸分离提取技术51、山气日夕佳，飞鸟相与还。核酸分离提取技,1,植物分子生物学实验技术,植物分子生物学实验技术,2,主要内容,第一部分核酸的分离制备,第二部分PCR技术,第三部分主要分子标记,第四部分基因克隆,主要内容,3,参考书目:,三美)Dveksler Gs and Dieffenbach CW,黄培堂俞炜源陈添弥等译,现代生物技术译从PCR技术实验指南科学出版社,三(荚)Clark MS主编顾红雅瞿礼佳主译植物分子生物学实验手册高等教育出版社施普林格出版社三,三郑成木主编植物分子标记原理与方法湖南科学技术出版社,Brown ta.魏群等译国外优秀生命科学教材译从基因克隆和DNA分析高等教育出版社,3,参考书目:,4,第一部分:核酸的分离制备,uu日,第一部分:核酸的分离制备,5,第一部分:核酸的分离制备,1.DNA在分子生物学研究中的重要性,DNA提取是一切分子生物学研究最基础的技术,高质量的DNA是用于PCR和酶,切分析等系列后续操作的重要保证,发展了多种DNA提取方法,可从植物叶片、愈伤组织、组培苗、果实、韧皮部,等多种组织器官中提取DNA;但不同植物、同种植物材料的不同来源、部,位、形态以及不同化学成分、组织结构特点差异,导致DNA提取时需要选,择不同的方法或作一些特殊处理,从富含多糖、多酚、单宁、色素及其他次生代谢物质的木本植物中提取DMA的,方法难度就相对大于大多数禾谷类及蔬莱类植物,(1)多酚被氧化成棕褐色,(2)多糖、单宁等物质与DNA会结合成粘稠的胶状物,获得的DNA常出现产,量低、质量差、易降解,影响了DNA质量和纯度,不能被限制性内切酶,酶切,严重的甚至不能作为模板进行PCR扩增,第一部分:核酸的分离制备,6,2.提取DNA应满足的基本原则,不同的研究对DNA的要求不一致,但一般应满足,(1)排除蛋白、糖类和脂类等物质的污染,DNA纯度应满足下游操作需要,用于RFLP、AFLP应满足酶切要求,用于PCR的不含PCR的千扰甚至抑制物,(2)所得DNA应当完整,电泳检测得到清晰、完整、可重复、无降解的条带,保证DNA一级结构的完整,(3)足够量的DNA,有的实验要求量多(标记),2.提取DNA应满足的基本原则,7,3.基本原理,1)破坏(消化)细胞壁、释放内容物,在破壁时也会剪切DNA,在完整性和产量间折衷考虑,分离总DNA破壁方法,液氮中快速冷冻、研磨成细粉末三,分离核DN或细胞器DNA破壁方法,更温和的方法、以免过早破坏内膜系统、含渗透剂的缓冲液4C匀浆,(2)破坏细胞膜使DNA释放到提取缓冲液中,通常靠SDS或CTAB去污剂来完成,保护DNA受核酸内源酶降解,缓冲液通常含EDTA,可螯合大多数核酸酶所需要的辅助因子镁离子三,3.基本原理,8,4.基本步骤,1)植物材料的采集及前处理,尽可能使组织材料保持水分而保鲜(用湿纱布包襄,放置于密闭的冰盒等),野外远距离采集样本时,尽可能采用冷冻保存(如放置于液氮中),不具备冷冻条件时无水CaS04的瓶子分别保存使其迅速千燥,可将材料,保存数月,返回后尽快提取DNA,对具有大量次生代谢物(如丹宁、酚类、醌类等)的植物材料,尽可能采集幼嫩,组织,冷冻保存、短时间内提取DNA,植物组织化学保存法乙醇、丙二醇处理法导致DNA剧烈降解(不推荐),样品长期保存液氮处理后贮存在-80冰箱或直接储放于液氮中,在与提取缓冲液接触前防止冰冻样品在空气中融化导致酚类易被氧化,实验室发苗、田间取叶片(清洗去除灰尘、泥土以及茵孢子等),饥饿处理减少淀粉含量、遮光处理产生黄化苗,4.基本步骤,9,4.基本步骤,(2)组织(细胞)破碎三,物理方法溶涨和自溶;化学方法生物酶降解,液氮快速冷冻处理后硏磨(推荐)或在提取缓冲液中硏磨,若)