3、1菊花的组织培养(给力的课件)

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,Page,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,萧县郝集中学,课题,一,一,菊花,的,的组,织,织培,养,养,安岳,中,中学,：,：,蒋,蒋,小,小丽,有丝,分,分裂,受精,卵,卵,细胞,分,分化,在个,体,体发,育,育中,，,，由,一,一个,或,或一,种,种细,胞,胞增,殖,殖产,生,生的,后,后代,，,，在,形,形态,、,、结,构,构和,生,生理,功,功能,上,上发,生,生稳,定,定性,差,差异,的,的过,程,程。,1,、细,胞,胞分,化,化的,概,概念,一、,知识,回,回顾,黑色,素,素细,胞,胞在,体,体外,培,培养,30,多代,后,后仍,能,能合,成,成黑,色,色素,；,；离,体,体培,养,养的,上,上皮,细,细胞,，,，始,终,终保,持,持为,上,上皮,细,细胞,，,，而,不,不会,变,变成,其,其他,类,类型,的,的细,胞,胞。,2,、稳,定,定性,3,、不,可,可逆,性,性,细胞,分,分化,发,发生,在,在整,个,个生,命,命进,程,程中,。,。,1,、持,久,久性,2,、细,胞,胞分,化,化的,特,特点,造血,干,干细,胞,胞,原,原,红,红细,胞,胞,早,早,幼,幼红,细,细胞,中,中幼,红,红细,胞,胞,晚,晚,幼,幼红,细,细胞,成,成熟,红,红细,胞,胞,死,死亡,4,、,普,普,遍,遍,性,性,细胞分化是否意味着细胞中遗传物质的改变？,遗,传,传,物,物,质,质没,有,有,改,改,变,变，,不,不,同,同,组,组,织,织,的,的,细,细,胞,胞,共,共,同,同,来,来,源,源,于,于,受,受,精,精,卵,卵,，,，,经,经,有,有,丝,丝,分,分,裂,裂,产,产,生,生,。,。,3,、,细,细,胞,胞,分,分,化,化,的,的,实,实,质,质,A,B,D,C,E,E,D,C,A,B,E,D,C,A,B,E,D,C,A,B,E,D,C,A,B,基,因,因,在,个,个,体,体,发,发,育,育,过,过,程,程,中,中,，,，,不,不,同,同,细,细,胞,胞,中,中,遗,遗,传,传,信,信,息,息,的,的,执,执,行,行,情,情,况,况,不,不,同,同,即,即,基,基,因,因,的,的,选,选,择,择,性,性,表,表,达,达,的,的,过,过,程,程,红,细,细,胞,胞,合,成,成,血,血,红,红,蛋,蛋,白,白,(,不,合,合,成,成,肌,肌,动,动,蛋,蛋,白,白,),肌,细,细,胞,胞,肌,动,动,蛋,蛋,白,白,基,基,因,因,开,开,启,启,合,成,成,肌,肌,动,动,蛋,蛋,白,白,(,不,合,合,成,成,血,血,红,红,蛋,蛋,白,白,),肌,动,动,蛋,蛋,白,白,基,基,因,因,关,关,闭,闭,血,红,红,蛋,蛋,白,白,基,基,因,因,关,关,闭,闭,血,红,红,蛋,蛋,白,白,基,基,因,因,开,开,启,启,试,一,一,试,试:,现,现,在,在,你,你,能,能,解,解,释,释,这,这,些,些,现,现,象,象,了,了,吗,吗?,4,、,细,细,胞,胞,分,分,化,化,的,的,结,结,果,果,细,胞,胞,产,产,生,生,了,了,不,不,同,同,种,种,类,类,的,的,蛋,蛋,白,白,质,质,即,即,出,出,现,现,了,了,不,不,同,同,的,的,结,结,构,构,和,和,功,功,能,能,的,细,胞,胞,和,和,组,组,织,织,。,。,愈,伤,伤,组,组,织,织,胚,状,状,体,体,1958,，,美,美,国,国,，,，,斯,斯,图,图,尔,尔,德,德,植,物,物,组,组,织,织,培,培,养,养,离,体,体,二,、,、,基,基,础,础,知,知,识,识,（,一,一,）,）,植,植,物,物,组,组,织,织,培,培,养,养,概,概,念,念,关,键,键,词,词,：,：,外,植,植,体,体,、,、,脱,脱,分,分,化,化,、,、,再,再,分,分,化,化,、,、,愈,愈,伤,伤,组,组,织,织,在无菌和人工控制条件下，,将,将离体的,植,植物器官、组,织,织、细胞，培养在,人,人工配置,的,的培养基,上,上，给予,适,适宜的培,养,养条件，,诱,诱导其脱,分,分化产生,愈,愈伤组织,再,再分化形,成,成丛芽，,最,最终形成完整的植,株,株。,又称：植物离体,培,培养,脱分化（,或,或去分化,）,）：,由高度分,化,化的植物,组,组织或细,胞,胞产生愈,伤,伤组织的,过,过程。,再分化：脱分化,产,产生的愈,伤,伤组织继,续,续进行培,养,养，又可,以,以重新分,化,化成根或,芽,芽等器官,的,的过程。,外植体,：,用于离体,培,培养的植,物,物器官或,组,组织片段,。,愈伤组织：细胞排,列,列疏松、,无,无规则、,高,高度液泡,化,化的无定,形,形的薄壁,细,细胞。,切取,形成层,无菌接种,诱导愈伤,组,组织,的形成,试管苗的,形,形成,培养室,移栽,脱分化,再分化,（二）植,物,物组织培,养,养的基本,过,过程,植物组织,培,培养过程,离体组织,或,或细胞,植物体,脱分化,细胞分裂,素,素生长,素,素,愈伤组织,芽,根,细胞分裂,素,素,生长素,细胞分裂,素,素,生长素,细胞分裂素,生长素,细胞分裂素,有利于根的分化,有利于芽的分化，抑制根的分化,促进愈伤组织生长,激素的使,用,用顺序、,使,使用量及,比,比例影响,植,植物细胞,的,的发育方,向,向：,思考：以,下,下培养基,出,出现的现,象,象反应了,什,什么问题,？,？,生长素,/,细胞分裂素,高 利于根的形成,适中 利于愈伤组织的形成,供参考的,配,配方,1,、诱导,菊,菊花愈,伤,伤组织,：,：,在,MS,培养基,中,中加入,BA,和,NAA,，质量,浓,浓度均,为,为,0.5mg,、诱,导,导菊花,从,从芽：,在,MS,培养基,中,中加入,BA,和,NAA,，质量,浓,浓度分,别,别为,2-3mg,和,0.020.03mg,3,、诱导,菊,菊花生,根,根：,在,MS,培养基,各,各成分,用,用量减,半,半，并,添,添加入,NAA,或,IAA,，质量,浓,浓度均,为,为,0.1mg,4,温度,、,、光照,、,、pH,的,的影响,光照：菊花每,日,日用日,光,光灯照,射,射,12h,。,温度：大多数,植,植物组,织,织培养,控,控制在23,27,低于15时,植,植物组,织,织会表,现,现生长,停,停止,高于35时,对,对植物,生,生长不,利,利。,菊花的,组,组织培,养,养控制,在,在18,22,。,pH,：,不同植,物,物对培,养,养基最,适,适,pH,的要求,不,不,同，大,多,多数控,制,制在,5,6.5,。,菊花的,组,组织培,养,养控制,在,在,5.8,左右。,制备,MS,固体培,养,养基,外植体,消,消毒,接种,培,养,养,栽,培,培,四、实,验,验操作,移,栽,栽,冲洗,酒精,无菌水,冲,冲洗,氯化汞,无菌水,冲,冲洗至,少,少三次,之,之上,配制各,种,种母液,配制培,养,养基,灭菌,（一）,制,制备,MS,固体培,养,养基,MS,培养基,包,包括,20,多种营,养,养成分,，,，实验,室,室一般,使,使用,4,保存配,制,制好的培养基母液来制备,1,、配制,各,各种母,液,液,无机,物,物中大,量,量元素,浓,浓缩,10,倍，微,量,量元素,浓,浓缩,100,倍，常,温,温保存,激素,类,类、维,生,生素类,以,以及用,量,量较小,的,的有机,物,物一般,可,可按,1mg/ml,的质量,浓,浓度单独配制成,母,母液,用母,液,液配制,培,培养基,时,时，需,要,要根据,各,各种母,液,液的浓,缩,缩倍数,，,，计算,用,用量,2,、配制,培,培养基,分装到,锥,锥形瓶,中,中，每,瓶,瓶分装,50ml,或,100ml,配,制,制培养,液,液,调,PH,培养基,的,的分装,由于菊,花,花的茎,段,段的组,织,织培养,比,比较容,易,易，因,此,此不必,添,添加植,物,物激素,3,、灭菌,分装好,的,的培养,基,基连同,其,其他器,械,械一起,进,进行高,压,压蒸汽,灭,灭菌,1,、选材,：,：菊花茎,段,段，取,生,生长旺,盛,盛的嫩,枝,枝,（二）,外,外植体,消,消毒,2,、消毒,流水,冲,冲洗,菊花茎,段,段用流,水,水冲洗,后,后可少,许,许洗衣,粉,粉，用,软,软刷轻,轻,轻刷洗,，,，刷洗,后,后在,流水,下冲洗,20min,左右,酒,精,精处理,用无菌,吸,吸水纸,吸,吸干外,植,植体表,面,面的水,分,分，放,入,入,体积分,数,数为,70,的酒,精,精,中摇动,2,3,次，持,续,续,6,7s,，立即,将,将外植,体,体取出,，,，在,无菌水,中清洗,消毒,液,液处理,取出后,用,用无菌,吸,吸水纸,吸,吸干外,植,植体表,面,面的水,分,分，放,入,入,质量分数为,0.1,的氯化汞,溶,溶液,中,1,2min,，取出后在,无菌水,中至少清洗,3,次，漂净消毒液,（三）接种,污染的主要,来,来源是空气,中,中的细菌和孢子，接种室消,毒,毒是至关重,要,要的。用70的酒,精,精喷雾使空气,消,消毒，酒,精,精或新洁尔,灭,灭搽洗工作,台,台并用紫外,线,线照射20,分,分钟,。,1,、接种室消,毒,毒,2,、无菌操作,要,要求,操作要在酒精灯火焰,旁,旁完成，每次,使,使用器械后,，,，都需要用,火,火焰灼烧灭,菌,菌，接种后,立,立即盖好瓶,盖,盖。,3,、材料的切,取,取和接种,将消过毒的,菊,菊花茎段在无菌培养皿中切成,0.5,1cm,的小段，用镊子夹取菊花茎,段,段接种。,4,、接种注意,事,事项,每接种一,块,块外植体前,，,，镊子需放,入,入体积分数,为,为,70,的酒精溶,液,液中消毒一,次,次，然后在,酒,酒精灯火焰,上,上烧一遍，,冷,冷却后再接,种,种,外植体在,培,培养基中要,分,分布均匀，,放,放置外植体,数,数量根据锥,形,形瓶的大小,确,确定，一般胡萝卜,3,4,块，菊的茎,或,或叶,6,8,块，也不要太,少,少，以充分,利,利用培养基,中,中的营养成,分,分和光照条,件,件,插入时应,注,注意方向，,形态学上端,朝,朝上，形态,学,学下端朝下,，,，,不要倒插。,茎,茎段、茎尖,基,基部插入培,养,养基利于吸,收,收水分和养,分,分,正常苗,污染苗,1,、外植体带,菌,菌,2,、培养基及,接,接种器具灭,菌,菌不彻底,3,、接种操作,时,时带入,4,、环境不清,洁,洁,污染途径,思考：你打,算,算做几组重,复,复？你打算,设,设置对照实,验,验吗？,答：每种材,料,料或配方至,少,少要做一组以上的重复。设,置,置对照实验,可,可以取用一,个,个经过灭菌的装有培养,基,基的锥形瓶,，,，与接种操,作,作后的锥形,瓶,瓶一同培养,，,，用以说明培养基,制,制作合格，,没,没有被杂菌,污,污染,。,（四）培养,接种后的锥,形,形瓶最好放,在,在无菌箱中培养，培,养,养期间应定,期,期消毒,培养温度控,制,制在,18-22,每日用日光,灯,灯光照,12h,（五）移栽,移栽生根的,菊,菊花试管苗,之,之前，应先,打,打开培养瓶,的,的封口膜，,让,让试管苗在,培,培养间生长,几,几日,。,一般放置在2025,的遮荫环境中，适应57d。试管苗不萎,蔫,蔫，有新生,长,长的趋势，,便,便可移栽。,1,、打开封口,膜,膜,2,、清洗转移,用流水清洗,根,根部的培养,基,基，将幼苗移植,到,到消过毒的,蛭,蛭石或珍珠,岩,岩等环境下生活一段时,间,间,3,、移栽,幼苗长壮后,，,，移栽到土,壤,壤中,固体基质型,，,，含水量高,、,、,蓄水性强、,透,透性好，适,合,合栽培,珍珠岩,珍珠岩是一,种,种火山喷发,的,的酸性熔岩,，,，经急剧冷,却,却而成的玻,璃,璃质岩石，,有,有弧形或圆,形,形裂隙，如,珍,珍珠的结构,，,，所以被命,名,名为珍珠岩,。,。,蛭石是一种