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,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验一 糖类的定量测定,3,，,5-,二硝基水杨酸比色定糖法,一、实验目的,1,、掌握,3,5-,二硝基水杨酸法定糖的原理及方 法。,2,、用,3,5-,二硝基水杨酸比色法测定山芋粉中总糖。,3,、熟悉分光光度计的原理及使用方法。,还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。,还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类,，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。,利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。,二、实验原理,3,5-,二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成,棕红色,的氨基化合物：,在一定范围内，棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。因此，我们可以利用比色法测定样品中还原糖以及总糖的含量。,该法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较少。,三、实验操作,1,、样品总糖的水解及提取,准确称取,山芋粉,1,克,，放入大试管中，加入,10ml 6N,HCl,和,15ml,蒸馏水,，混匀。在沸水浴加热,30min,后，用,KI-I,2,溶液检查水解程度。,完全水解后,冷却并加入酚酞试剂一滴,以,10%,NaOH,中和至溶液呈,微红色,先用双层纱布过滤,再用滤纸过滤并定容至,100ml,。,精确吸取上述溶液,10ml,放入,100ml,容量瓶、稀释至刻度,备用。,2,、制作葡萄糖标准曲线,项 目,空白,1,2,3,4,5,6,葡萄糖液,(ml,）,0,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,蒸馏水,（,ml,）,2.0,1.6,1.4,1.2,1.0,0.8,0.6,DNS,试剂,(m1),1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,加 热,均在沸水浴中加热,5min,冷 却,立即用流动冷水冷却,蒸馏水,(ml),21.5,21.5,21.5,21.5,21.5,21.5,21.5,光 密 度,(O.D,520nm),将以上各管溶液混匀后，用分光光度计,(520nm),进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值，以葡萄糖浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制出标准曲线。,3,、样品中含糖量的测定,取,4,支大试管，分别按下表加入各种试剂。,2,、制作葡萄糖标准曲线,测定样品中含糖量时各试剂的用量,项 目,空白,1,2,3,样品量,(ml,）,0,1.0,1.0,1.0,蒸馏水,（,ml,）,2.0,1.0,1.0,1.0,DNS,试剂,(m1),1.5,1.5,1.5,1.5,加 热,均在沸水浴中加热,5min,冷 却,立即用流动冷水冷却,蒸馏水,(ml),21.5,21.5,21.5,21.5,光 密 度,(O.D,520),将各管混匀后,按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度,在标准曲线上查出相应的糖含量,按下述公式计算出山芋粉总糖百分含量,。,还原糖,mg/ml,提取液体积,稀释倍数,总糖,=,100,样品重量,3,、样品中含糖量的测定,1.,实验过程中所有的试管要干净,加入各种试剂量要准确。,2.,试剂不可倒出试剂瓶，用干净的移液管吸取，用后盖好瓶塞，防回原处。,3.,分光光度计使用,：溶液不要倒太多,;,毛边不要对着透光处,;,用后用自来水冲洗干净,防回原处。,4.,移液管使用,：有色看外边缘,无色看中间凹处。,5.,实验室中所有的仪器上面不能放置烧杯、试管、试剂瓶等，以防试剂污染仪器。,四、实验要求,
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