07 实验六 微生物菌种保藏技术

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验七 微生物菌种保藏技术,一、目的要求,二、基本原理,三、器材,四、操作步骤,五、实验报告,一、目的要求,1,、学习和掌握四大类微生物菌种保藏的基本原理，比较几种不同的菌种保藏方法。,二、基本原理,微生物个体微小、代谢活跃、生长繁殖快，如果保存不妥容易发生变异，被其他杂菌污染，甚至导致微生物细胞死亡。微生物菌种的长期保藏对任何微生物学工作者都是很重要的，也是非常必要的。,自,19,世纪末,F.Kral,开始尝试微生物菌种保藏以来，已经建立了许多长期保藏菌种的方法。虽不同的方法原理各异，但基本原则是使微生物的新陈代谢处于最低或几乎停止的状态。保藏方法通常基于温度、水分、通气、营养和渗透压等方面的考虑。,菌种保藏方法：,1,、传代培养法,又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于,46,冰箱内保存。,2,、悬液法,将细菌细胞悬浮在一定的溶液中，包括蒸馏水、蔗糖、葡萄糖等糖液、磷酸缓冲液、食盐水等，有的还是用稀琼脂。悬液法操作简便，效果较好，有的酵母菌、细菌可以保存几年甚至近十年。,3,、载体法,是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。,4,、真空干燥法,这类方法包括冷冻真空干燥法和,L-,干燥法。前者是将要保藏的微生物样品预先经过低温预冻，然后在低温状态下进行减压干燥，后则则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在,1020,范围内进行真空干燥。,5,、冷冻法,菌种,枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、黑曲霉、细黄链霉菌,2,、培养基,牛肉膏蛋白胨培养基、,20%,蔗糖悬液、麸皮培养基、,沙土管等,3,、仪器或其他用具,三、器材,1,、菌种活化,四、操作步骤,2,、传代培养法（细菌）：牛肉膏斜面,牛肉膏蛋白胨琼脂培养基斜面，,1,支,/,人,，,4-5ml/,支。,3,、沙土管法（放线菌）：,取河沙加入,10%,浓度的盐酸漂洗，加热煮沸,30,分钟，除去有机质。自来水冲洗至中性，烘干后用,40,目筛子过筛，弃去粗颗粒，备用。,准备：,1,支,/,人,。,4,、蔗糖悬液法（酵母菌）：,50ml,蒸馏水,+10g,蔗糖，溶解，分装至,15150,试管中，,2ml/,管。,1,支,/,人。,5,、载体法（霉菌）：,麦麸培养基,取,20g,麦麸,+20ml,水，拌匀，制成含水量为,50%,的麦麸培养基。,1,支,/,人。,保存处理,斜面冰箱保存法：,斜面，,37,培养,24,小时，转入,4,冰箱冷藏保存。保存期,36,个月。,沙土管：,每支砂管加入,0.2ml,菌悬液，用接种环搅拌均匀。把砂管放入干燥器内干燥,24,小时后，封口，在,4,冰箱或者室温干燥处保存。,每隔,3,个月测定一次活性。保存期,15,年。,蔗糖悬液保存：,每支蔗糖管加入,0.2ml,菌悬液，混合均匀。把蔗糖管封口，在,4,冰箱暗处保存。,每隔一年测定一次活性。保存期,510,年。,麦麸保存法,每支麦麸管加入,0.2ml,菌悬液，混合均匀，尽量捣匀小试管中的麦麸，呈疏松状态。,30,培养,72,小时，待菌丝长好后，放置在干燥器内干燥，在,4,冰箱或室温保存。,每隔一年测定一次活性。保存期,15,年。,1,、思考题,（,1,）根据你自己的试验，谈谈,12,种微生物菌种保藏方法的利弊？,五、实验报告,