PLA2R在特发性膜性肾病诊断中的作用课件

Klicken Sie,um das Titelformat zu bearbeiten,Klicken Sie,um die Formate des Vorlagentextes zu bearbeiten,Zweite Ebene,Dritte Ebene,Vierte Ebene,Fnfte Ebene,抗,PLA,2,R,抗体,在原发性肾小球肾炎的诊断作用,抗PLA2R抗体,原发性肾小球肾炎简介,流行病学,致病机制,诊断方法,血清学检测指标：抗,PLA2R,抗体,主要内容,原发性肾小球肾炎简介主要内容,膜性肾小球肾炎,分类,原发性,MN,抗,PLA2R,抗体,特发性（查无自身抗体或已知的继发病因）,继发性,MN,（可参见,KDIGO,列表）,病原体感染（例如,HBV,、,HCV,、梅毒和疟疾）,自身免疫性疾病（例如类风湿性关节炎、干燥综合征和类天疱疮）,癌症,其他疾病（例如镰状细胞贫血、格林,-,巴利综合征）,药物诱导（例如非甾体类抗炎药，黄金，水银和青霉胺）,膜性肾小球肾炎 分类原发性MN抗PLA2R抗体特发性（查,原发性膜性肾小球肾炎（,primary membranous glomerulonephritis;pMGN,），,也,被称为特发性膜性肾病（,idiopathic membranous nephropathy;IMN,）,是,最,常见的以肾病,综合征,（,nephritic syndrome,；,NS,）,为特点的肾脏疾病,。,可见于几乎所有的种族和性别,，,更易,出现在,40,岁以上的,男性,和,白种人患者,。,疾病介绍,原发性膜性肾小球肾炎（primary membranous,pMGN,是原发性膜性肾病，与继发性膜性肾病,不同。,继,发性膜性肾病是一种感染、药物治疗、滥用、吸毒、胶原病或其他自身免疫病以及肿瘤的继发病（并发症），并可随着潜在疾病的治疗而改善,。,pMGN,是,作为一种独立疾病治疗的，尤其是对伴有肾病综合征和高渗性,的,pMGN,。,疾病介绍,疾病介绍,约,80%,的,pMGN,患者,具有肾病,综合征,；,有时,胳膊和眼皮出现严重水肿，体重减轻，排尿减少,；,约,20%,的,pMGN,患者,具有蛋白尿，但是无其他任何症状。尿沉渣检查常见脂肪,粒,、,滴,、,管；,约,50%pMGN,患者,具有显微镜血尿，蛋白尿与糖尿,；,约,70,%,pMGN,患者,在发病初期血压与肾功能正常。,pMGN,的临床表现,肾病综合征：,由,多种病因引起，以,肾小球基,底,膜通透性增加为特征，,表现为大量蛋白尿、低蛋白血症、高度水肿、高脂血症的一组临床症候群。,约80%的pMGN患者具有肾病综合征；pMGN的临床表现肾病,流行病学,国内,pMGN,发病率,约占原发性肾小球疾病的,9.9%,13.5%,，居,IgA,肾病、系膜增生性肾小球肾炎之后，列第三位,。,pMGN,患者随着,蛋白尿的,增加肾衰竭,发病率及死亡率风险也在不断升高，这种长期风险尤其与血栓和心血管并发症相关。,流行病学国内pMGN发病率约占原发性肾小球疾病的9.9%1,致病机制,自身免疫反应导致,肾小球免疫球蛋白和补体复合物沉积,，,导致这种反应的抗原主要为,M,型磷脂酶,A2,受体（,M-type phospholipase A2 receptor,PLA2R,）,，,是在成年特发性膜性肾病患者中发现的第一个抗原。,致病机制自身免疫反应导致肾小球免疫球蛋白和补体复合物沉积，导,pMGN,临床诊断的困惑,如何辨别原发还是继发？,如何进行鉴别诊断？,SLE,相关肾炎,乙肝相关肾炎,非膜性肾小球肾炎,紫癜性肾小球肾炎,诊断方法,pMGN临床诊断的困惑如何辨别原发还是继发？SLE相关肾,诊断,:,肾穿刺,组织学检查,肾脏组织电镜检测,新方法学,:,血清学检测,(anti-PLA2R),血清学检测特点,：,减轻病人痛苦,节约时间和成本,可,定量化,Anti-PLA2R,阳性,pMGN,诊断,诊断方法,诊断:Anti-PLA2R 阳性pMGN诊断诊断方法,诊断方法,肾脏穿刺活检是诊断金标准，但也是高风险的创伤性检查手段！,活检确定为膜性肾病,pMN,s,MN,排查继发病因,询问病史,体格检查,实验室检测：血清学、影像学,肾脏活检：光镜、免疫荧光、电镜,-,+,激素,+,烷化剂治疗,治疗原发疾病,治疗方案不同,KDIGO Clinical Practice Guideline for,Glomerulonephritis.2012.,http,:/www.kidney-international.org,pMN,诊断主要依赖,“排除法,诊断,(exclusion,of,diagnosis),”,诊断方法肾脏穿刺活检是诊断金标准，但也是高风险的创伤性检查手,PLA2R,结构模式图：,N-terminal,cysteinerich,domain,(CysR,),，,fibronectin,type,II domain(FNII,),8,个,CTLDs,一,个跨膜结构,(TM),intracellular C terminal,tail,(IC).,N Engl J Med 2009;361:11-21,.,PLA2R,PLA2R,是在人肾小球足细胞表面,表达，参与,调节细胞中磷脂酶的结合过程,。目前,PLA2R,主要分为两型（,M,型与,N,型,），,M,型,PLA2R,是自身抗体的主要靶抗原。,PLA2R结构模式图：N Engl J Med 2009;3,抗,PLA2R,抗体,血清学,检测,抗,PLA2R IgG,抗体检测有助于：,原发性,与继发性膜性肾小球肾炎的鉴别诊断,疾病活动性评估,制定,治疗方案,治疗监测,抗PLA2R抗体血清学检测 抗PLA2R IgG抗体检,标准化,ELISA:,-,试剂通用性,-,温育时间短,-,30/30/15 min-,半定量检测,（ratio or index）,或,-,定量检测,（5,个标准品,2 1500 RU/ml）,Anti-PLA2R RC-IIFT,（,FA 1254-xxxx-50,）,Anti-PLA2R ELISA,（,EA 1254-9601 G,）,HEK,PLA,2,R,-transfected,HEK control-transfected,intracellular tail,transmembrane domain,extracellular tail,抗,PLA,2,R,抗体检测产品,标准化ELISA:Anti-PLA2R RC-IIFTAnt,使用间接免疫荧光法检测,抗,PLA2R,抗体,PLA2R,转染细胞,目前，间接免疫荧光（,IIFT,）是血清学诊断的唯一,方法,(,金标准），,该方法适于抗,PLA2R,抗体的定性与定量分析,。,使用间接免疫荧光法检测抗PLA2R抗体PLA2R 转染细胞,转染细胞,质粒转染细胞,DNA,合成编码,PLA2R,的,DNA,片段,抗原,转染细胞表达抗原,间接免疫荧光法,检测抗体,将目标片段,插入质粒,插入目标,DNA,的质粒,基于重组细胞的间接免疫荧光法（,RC-IFT,）,转染细胞质粒转染细胞DNA合成编码PLA2R的DNA片段抗原,含两个基质的生物薄片马赛克,:,生物薄片,:,PLA2R,转染,HEK,细胞,对照质粒转染,HEK,细胞,抗,PLA2R,抗体的,RC,-,IFT,含两个基质的生物薄片马赛克:生物薄片:抗PLA2R抗体的RC,基于抗原特异转染细胞的间接免疫荧光法,HEK293 cells,PLA,2,R-transfected,Anti-PLA,2,R Recombinant Cell IFT,-BIOCHIP Technology-,基于抗原特异转染细胞的间接免疫荧光法HEK293 cells,敏感度,:,52%,特异性,:,100%,Cohort(n=360),n,Anti-PLA2R,阳性,组织学证实的,p,MGN,100,52,继发,MGN,17,0,非膜性肾小球肾炎,90,0,正常人,153,0,Hoxha,Fechner,Stahl et al.,Nephrology Dialysis Transplantation:26(8);2526-32,2011,Anti-PLA2R Ab,-,敏感性和特异性,-,PLA2R-Ab,敏感度:52%特异性:100%Cohort(n,J Am Soc Nephrol 22:11371143,2011,检测,anti-PLA2R,抗体对,IMN,鉴别诊断有很重要的意义（国内数据）,敏感度：,81.7%,；特异性：,89.1%,J Am Soc Nephrol 22:11371143,灵敏度和特异性,n,Anti-PLA,2,R positive,IgGRC-IFT,Anti-PLA,2,R positive,IgGELISA,Primary MN,before treatment,within 8 weeks after biopsy,anti-PLA,2,R RC-IFT positive,200,200(100%),193(96.6%),Secondary MN,before treatment,within 8 weeks after biopsy,other underlying disease known,anti-PLA,2,R RC-IFT negative,27,0,0,Other glomerulonephritides,230,0,0,Other autoimmune diseases,315,0,0,Healthy blood donors,291,0,1,Specificity,836,100%,99.9%,Dhnrich,Stahl,Schlumberger et al.,Clin Chim Acta 421,213-218(2013),灵敏度和特异性nAnti-PLA2R positive Ig,Dhnrich,Stahl,Schlumberger et al.,Clin Chim Acta 421,213-218（2013）,抗,PLA2R,抗体,的,疾病,特异性,Dhnrich,Stahl,Schlumberger,Hoxha,Fechner,Stahl et al.,Nephrology Dialysis Transplantation:26(8);2526-32,2011,IIFT,检测,性能,Hoxha,Stahl et al;,Kidney Int,2012,对,88,例,膜性肾病患者进行检测,采用,欧蒙,RC-IFT,产品,结果,:,灵敏度：,82%,82,%,的,MN,患者确认为原发性,MN,所有的继发性,MN,患者均未检出抗,PLA2R,抗体,特异性：,100%,Hoxha,Fechner,Stahl et al.,几乎所有阳性检出率数据均来自于回顾性研究,!,抗体滴度会随着疾病活动性而发生波动，甚至可能因取样时发生以下事件而检测不出：,自发性缓解,免疫抑制治疗,原发性,/,特发性膜性肾病并非单一的疾病，可能存在多种靶抗原,一些患者可能被误判为原发性膜性肾病（实际为继发性）,为什么并非所有的,pMN,患者均能检出抗,PLA2R,抗体,?,几乎所有阳性检出率数据均来自于回顾性研究!为什么并非所有的p,Hoxha,Fechner,Stahl et al.,N Engl J Med 363,496-498(2010),Anti-PLA2R,Ab,-,预测疾病预后,-,患者肾脏移植前后血清,Anti-PLA2R,滴度变化，预测疾病复发,Hoxha,Fechner,Stahl et al.,PLA2R在特发性膜性肾病诊断中的作用课件,肾病综合征分型诊断,原发性肾小球肾炎,帮助,医生,确定治疗方案,评估疾病活动度和严重程度,监测疾病治疗效果,预测疾病预后：痊愈,/,复发,（,免疫学反应先于临床症状）,肾脏移植患者复发风险评估,具有在早期