【教学课件】第六章食用菌选种育种技术

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第六章,食用菌选种育种技术,第一节 食用菌的繁殖方式,第二节 食用菌的生活史,第三节 选种技术,第四节 育种技术,教学目标：,掌握常规菌种筛选技术；掌握孢,子分离技术；基本掌握诱变育种和细胞质融,合育种技术。,教学重点：,组织分离技术、孢子分离技术,食用菌的繁殖方式共有三种，即无性繁殖、,有性繁殖和准性繁殖。,第一节 食用菌的繁殖方式,一、无性繁殖,不通过有性生殖细胞的结合，而由亲代直接产和新个体的生殖方式叫无性繁殖，食用菌的无性繁殖主要有以下几种形式：,1.可以菌丝断裂的方式繁殖：,2.以产和无性孢子的方式繁殖：如香菇产生节孢子，双孢蘑菇产生次生孢子，草菇产生厚垣孢子，黑木耳产生钩状分生孢子等。,3.以出芽方式繁殖：,二、有性繁殖,通过有性生殖细胞的结合，产生新个体的繁殖方式，叫有性繁殖。,孢子核基因的不同就决定了其所萌发成的单核菌丝的不同性别。有性繁殖根据进行质配的单核菌丝的性别，又可以分为以下两种形式。,（一）同宗结合：,1.初级同宗结合,由单个孢子萌发而形成的菌丝全，无需亲和性，很快发展成双核菌比体，并通过锁状联合增殖。每个细胞内的两个核没有遗传上的差别，均能形成子实体。,2.次级同宗结合,减数分裂后4个子核，“雌雄”两两相配分别通过孢子梗（小梗）进入孢子，形成2个含有异核的孢子。这种担孢子一旦萌发，初期为多核，随之产生隔膜，将每一个细胞分隔成只含有2个核的细胞,。,顶端细胞核又不断再进行分裂，到一定程度又再被横隔成每一细胞内只含有2个核的菌丝，周而复始。这种双核菌丝具有结实性，称之为次级同宗结合。,（二）异宗结合,异宗结合是一种“雌雄不同株”自身不孕的有性生殖方式。在担子菌亚门中，异宗结合占90%，主要有两种形式。,1.二极性异宗结合,一部分食用菌的单核菌丝有“雌”、“雄”之分，通常用“”、“”表示。唯有两条性别不同的菌丝进行交配产生的双核菌丝，才具有结实性,。,2.四极性异宗结合,由同一子实体所产生的担孢子萌发的菌丝间进行交配时，唯有1/4的交配组合能产生可孕的双核菌丝。,第二节 食用菌的生活史,食用菌的生活史，是指从孢子萌发，经历菌丝体、子实体阶段，直到产生第二代即同一种孢子的全过程。,一、伞菌的生活史,1.担孢子萌发,2.单核菌丝（初生菌丝）开始发育。,3.两条可亲和的单核菌丝进行质配。,4.质配形成异核的双核菌丝。多数种类的双核菌丝可见锁状联合，,一、伞菌的生活史,5.在适宜的环境条件下，双核菌丝体组织化，开成各种食用菌所特有的子实体。,6.来自两个亲本的一对交配型不同的单倍体核在担子中融合，进行核配，形成一个双倍体核。,7.双倍体核进行减数分裂，结果产生四个单倍体核，原担子变成担子。,8.各个单倍体核分别移支担子小梗的顶端，形成担孢子。至此，一个完整的生活史结束了。,二、有性生殖过程中细胞核的变化,一是质配后开始的异核双核阶段，即异核双核期。具有产生子实体的能力。,二是核配后开始的短暂的双倍核期。,三是核配马上进行减数分裂，每个细胞中都有4个单倍体核，称为单核期，此期亦短暂。,第三节 选种技术,一、选种的原理和方法,1.原理,食用菌的种性是通过菌丝体的繁衍逐代传递的，所以自然选择就侧重于在不同菌株之间进行，而不是在同一菌株的后代中进行。,食用菌自然选育的基本流程：,收集品种资源,生理性能测定,品种比较试验,扩大、示范推广,2.方法,品种资源的收集.,尽可能的收集有足够代表性的野生菌株。确定采种的目标，采集点的地理条件，并做好详细的采集记录。,生理性能测定,标本采集后应尽快采用多种分离方法获取菌株，随后，立即用平板做拮抗试验（即分离的菌株菌丝两两配对接入同一平板培养基内），适温培养，经十余日，不同菌株的菌落内是否出现拮抗线，同时还可在平板或生长测定管上测定菌丝生长速度及对温度的反应。,菌株比较,比较各菌株的优劣，详细记录各菌株的产量、菇形、温性、干鲜比、始菇期、菇潮间隔、形态等。为了试验的准确性，要保证菌种的质量，培养基配方，接种，管理措施等可能影响结果的因素，尽可能使之一致。试验还应按生物统计原理进行安排。,扩大试验,上述的品种评比结果仅是个阶段性的成果，还应和当地的当家菌株同时进行栽培，证实它是更优良的菌株。,示范推广,经扩大试验后，将选出的优良品种放到有代表性的试验点进行示范性生产，待试验结果进一步确定之后，再由点到面推广。,二、菌种分离,什么是菌种的分离呢？,将有价值的子实体的局部组织、孢子或基内菌丝移接到斜面试管培养基上，获得纯培养菌丝的操作称为菌种分离。,（一）种子资源的获得,种子资源的获得有野外采集和栽培场所采集两种途径。野外标本的采集，主要适用于食用菌的野生种驯化、遗传育种、生理生态以及各种研究用的一级种的分离。而在食用菌栽培上的一级种的分离，其种菇的来源主要是从栽培场中经留种获得的。,种菇（耳）的选择,分离对象应从当地当家品种，或从外地引进并经大面积栽培后表现出高产、稳产的菌株中选择。留种种菇要求菇形理想，长势健壮，无虫无病的子实体。,成熟度的选择,组织分离一般选择幼菇，即器官分化尚未结束时采摘。此时菇体正在生长。从最旺盛的“生长点”挑取组织，其菌丝萌发快，长势好，而且操作时，组织块纤维化程度低，容易挑取。,（二）菌种分离,菌种分离可以分为,孢子分离,、,组织分离,和,基内菌丝,分离三种。,1.分离前的准备,培养基的选择,通常使用PDA培养基。特殊分离培养时，常采用相应的培养基。,种菇的预处理,种菇采摘后，若种菇水分太高，菇盖沾粘，可适当风干后再进行分离。胶质耳只能用无菌水多次冲洗，无菌滤纸吸干，然后让耳片子实层上重新产生成熟的孢子供分离，这样可降低污染率。,2、组织分离,伞菌组织分离法,组织分离时，用75%酒精棉球擦拭双手及接种工具。点燃酒精灯，,将尖头镊子烧灼灭菌；随后将种菇纵向撕成两半，于菌柄、菌肉,交界处切取火柴头大小的组织块，迅速抖落到试管中，烧灼管口,及棉塞，塞上棉塞。这些操作都是在酒精灯火焰无菌区域进行的。,胶质菌类组织分离法,一种方法是将耳片反复用无菌水冲洗，切成0.5cm,小块移入培养基，于28下进行培养；,另一种方法是剖取尚未展开耳片的耳基团内的组织,块进行分离。,菌核的组织分离法,一些药用菌如茯苓、猪苓、雷丸都有菌核。进行组织,分离时，采用含浆汁多的菌核。在无菌的条件之下，,将菌核剖开，于菌核的附近，剖取蚕豆大小的菌核组,织块移入斜面培养基上，在26-30下培养,。,特,特殊的组织分离,2.,菌,索,分,离,3.,子,实,层,分,离,1.,生,长,点,分,离,3.木腐菌基内菌丝分离,把分离用菇木的部分或全部的表面在火焰上轻燎。,取小刀在火焰上灭菌，对准菇木上菇柄（耳基）的着生位置切成两半。,确定欲分离菌丝在菇木上的位置，再次用火焰灭菌过的小刀，在欲分离部位刻划数个井字。,用火焰灭过菌的接种钩，钩取一小块木屑（绿豆大小或更小）移接于斜面培养基。,接种后将试管置于2527下培养，促使其恢复。近风干的种木内菌丝常处于休眠状态。接种后，种木吸湿，菌丝逐渐恢复生长。如果短期时间内分离物未曾发，则可保留至4周后，再断定分离是否成功。,孢子分离主要是指利用子实体上产生的成熟,有性孢子分离培养获得纯菌种的方法。分为多孢,分离与单孢分离两种。,（一）多孢分离,4.孢子分离技术,1.,种,菇,孢,子,弹,射,法,2.帖褶法,3.褶上涂抹法,：,4.空中孢子捕捉法:,5.钩悬法,6.试管插割法,此法方便快捷，成功率高，是多数菌种孢子分离,的主要方法。适合于大型子实体的孢子分离。,具体操作方法是：,无菌操作迅速用无菌试管取下组织块。,用接种镐将组织块推至,距斜面培养基,1cm处，,塞好棉塞。于,25-28,条件下,见光竖立,培养至,12,小时左右，在无菌,操作条件下用尖头镊子取出组织块。,继续暗光培养，,2-3,天后，萌发成星芒,状的单孢子菌落。,所谓单孢分离即从收集到的多孢子中将单,个孢子分离出来，分别培养，作为育种的材料,。,1.涂抹法：,用已沾湿无菌水的接种针，从孢子印,上沾取孢子，在无菌条件下，插入盛用无菌水的,小试管内振荡稀释成适宜浓度的孢子悬浊液。随,后无菌条件下划线培养。,（二）单孢分离,2.梯度稀释点样法,用同样的方法制成浓度较高的孢子悬浊液。同时取灭菌过,的空试管数根，排序编号。按无菌操作规程获得一系列的,不同浓度梯度的孢子悬浮液。再用毛细管在各个梯度孢子,液中取样培养，单孢萌发后菌丝便长入小培养基块中，再,将其转移到试管斜面上培养获得单孢培养物。,第四节 育种技术,一、杂交育种的原理,食、药用菌的杂交是指不同种或种内不同株系之,间的交配，后者则理重要。,二、杂交育种的方法,1.选择亲本：,2.单孢子分离,3.单孢子杂交配对,4.转管繁殖,将可亲和的组合移入新的斜面保存备用。,四极性的异宗结合的食用菌，由于自交不育，经配,对后，凡出现双核菌丝的组合，并能正常结实者，即证,明杂交成功。,次级同宗结合食用菌（如双孢蘑菇），首先经过单孢,子分离、培养，获取不孕菌丝。随后进行不孕性菌丝间的,配对。,5.初次筛选,经过初步筛选，淘汰大部分表现一般的菌株。,经初筛后再做出菇试验比较，选出优良菌株。,6.复筛,通过栽培比较，选出少数性能优良的菌株。出菇鉴定包,括如下几个方面：,菌丝生长速度：,出菇菌块（袋）的表型特征：,子实体表型特征：,测定其最适生长温度、湿度等。,计算子实体的产量,。,7.小面积栽培试验：,将复筛菌株置于不同地域的栽培区进行栽培，以,考察其适应性与性状的稳定性，并做相关的详细,记录。,8.大面各示范推广：,逐步扩大栽培面积，进行示范性的推广，将种性,优良、优质高产的菌株逐渐定为当家菌株。,9.为确定保留下来的杂交新品种正式定名，并申,请有关部门批准。,细胞工程重点研究和开发的是,细胞融合技术和细胞,培养技术,。细胞融合技术是人们按照需要，使两个,不同遗传特性的细胞，融合成一个新的杂种细胞，,从而人工构建新型细胞，这个细胞兼有两个亲代细,胞的遗传特性。,细胞工程在食用菌育种中的应用,