血清总蛋白测定

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,血清总蛋白测定,双缩脲法,实验目的,熟悉血清蛋白的测定方法（双缩脲法）。,掌握血清总蛋白测定的临床意义。,进一步巩固掌握721E型分光光度计的使用。,实验原理,尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫色的化合物，此反应称为双缩脲反应。,蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似，故也能进行此反应。双缩脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。,双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反映！,凡分子内含有2个或2个以上甲酰基氨基（-CONH2-）均可呈双缩脲反映。,实验试剂,生理盐水：NaCl 0.9g 溶于100ml蒸馏水,双缩脲试剂：硫酸铜 3.0g溶于500ml蒸馏水，加酒石酸钾钠9.0g,碘化钾5.0g，完全溶解后，加入24%NaOH100ml，用蒸馏水稀释到1L，置聚氯乙烯瓶内盖紧保存。,蛋白质标准液：收集混合血清，经凯氏定氮法定值，用作蛋白质标准液。贮于冰箱中备用。也可用100mg/ml牛血清白蛋白替代。,待测血清用生理盐水1:10稀释。,实验操作,取3支试管，按下表操作。,测定管,标准管,空白管,血清（ml）,蛋白质标准液（ml）,生理盐水（ml）,双缩脲试剂（ml）,1.00,5.0,1.00,5.0,1.00,5.0,混匀，37水浴放置10分钟，以空白管调零点，在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。,计算（P60）,临床意义,血清蛋白升高,血清蛋白降低,