实验二显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1(精品)

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验二,显微镜油镜的使用及 细菌的简单染色法,一、实验目的：,1.,学习并掌握普通光学显微镜油镜的使用技术；,2.,学习微生物制片、染色的基本技术，掌握细菌的,简单染色法及无菌操作技术；,3.,观察细菌的基本形态。,二、实验原理：,1,、染色原理：,用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性,染料和中性染料三大类。,碱性染料的离子带正电荷,，能和,带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生,长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通,常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿,等）使其着色。,酸性染料的离子带负电荷,，能与带正电荷,的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基,pH,下降时，细,菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等,酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染,料，如伊红美蓝、伊红天青等。,简单染色法,:,是只用一种染料使细菌着色以,显示其形态的染色法，简单染,色不能辨别细菌细胞的构造。,2,、,显微镜油镜,工作原理：,利用油镜不但能增加照明度，更主要是能,增加数值口,径,，因为显微镜的放大效能是由其数值口径决定的。所,谓数值口径，即光线投射到物镜上的最大角度（称为镜,口角）的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质的折射率所,得的乘积，可用下列公式表示：,NA=nsin,NA:,数值孔径,n:,介质折射率,：,镜口角的半数,显微镜的分辨率是指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。,它与接物镜的数值口径成正比，与光波长度成反比，因此接物镜的数值口径愈大，光波波长愈短，则显微镜的分辨力愈大，被检物体的细微结构也愈能明显地区别出来。,能辨别两点之间最小距离,=1/2,光波长度,数值口径,=1/2NA,三、实验器材,1,、活材料：,培养,18-24h,的,金黄色葡萄球菌,(,S.aureus,),和枯草芽孢杆菌（,B.subtilis,）,。,2,、,染色液和试剂：,复红、美兰、二甲苯、香柏油。,3,、器材：,载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。,四、实验步骤：,1,、,涂片,：,取干净载玻片一块，在载玻片的左、右各加一滴蒸馏,水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂,金黄色葡萄球菌,，右,边涂芽孢杆菌，做成薄的涂面，注意取菌不要太多。,整个过程中要注意无菌操作。（示范无菌操作技术）,2,、,干燥,：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文,火烘干。,3,、,固定,：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰,2-3,次固定（以不烫手为宜）。,4,、,染色,：将固定过的涂片加复红或美兰染色,1-2min,。,5,、,水洗,：用水洗去涂片上的染色液。,6,、,干燥,：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。,7,、,镜检,：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野,后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将,油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。,8,、,绘图：,9,、实验完毕后的处理：,将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净：,a.,先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。,b.,用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦,23,次。,c.,再用干净的擦镜纸将镜头擦,23,次。注意擦镜头时向一个,方向擦拭。,看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，再用洗衣粉清洗。,五、,结果与思考题,1,、油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应,注意些什么？,2,、,按比例,绘出你所观察到的细菌的形态，,并显,示两菌的排列方式。,六、注意事项,1,、油浸物镜的工作距离（指物镜前透镜的表面到被检物体,之间的距离）很短，一般在,0.2mm,以内，再加上一般,光学显微镜的油浸物镜没有“弹簧装置”，因此使用油浸物,镜时要特别细心，避免由于“调焦”不慎而压碎标本片并使,物镜受损。,2,、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上,的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。,实验报告的撰写要求,实验报告必须以实事求是、严肃认真的科学态度，按照指,导书的要求按时完成。实验报告应该简明扼要、叙述准确、数,据完整、绘图清晰且写实，应有讨论、有分析，结论明确。一,般应包括以下一些内容：,1,实验项目名称；,2,实验目的；,3,实验原理；,4.,实验材料；,5,实验步骤；,6,实验结果与讨论。,简单染色实验步骤,涂片 干燥 固定 染色,水洗 干燥 镜检,结果与思考题：,1,、油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应注意些什么？,2,、,按比例,绘出你所观察到的细菌的形态，,并显示两菌的排列,方式。,复红或美蓝,1-2min,